柑桔衰退病毒侵染性克隆的构建及接种方法与流程

文档序号:15457463发布日期:2018-09-15 01:30阅读:来源:国知局

技术特征:

技术总结
本发明公开了一种柑桔衰退病毒侵染性克隆的构建方法,步骤:(1)三个覆盖CTV基因组全长特异片段CTV1、CTV2、CTV3的长链RT‑PCR扩增;(2)三元穿梭载体pCY线性化;(3)TAR克隆:采用醋酸锂转化法将CTV1、CTV2、CTV3回收片段和线性化的三元穿梭载体pCY共转化酵母菌YPH501;(4)转化农杆菌;(5)农杆菌介导接种,从而鉴定获得CTV侵染性克隆。还公开了侵染性克隆的接种方法:(1)播种:柑桔种子剥去外种皮播于培养基,暗培养;2)离心收集携带CTV侵染性克隆与Hc‑Pro或P19表达质粒的农杆菌细胞,用接种缓冲液悬浮;(3)真空浸润;(4)暗培养。

技术研发人员:宋震;崔甜甜;宾羽;晏建红;李中安;周常勇
受保护的技术使用者:西南大学
技术研发日:2018.04.23
技术公布日:2018.09.14
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