一种免疫调节肽的制备方法与流程

文档序号:15457496发布日期:2018-09-15 01:31

本发明属于提取方法领域,尤其涉及一种免疫调节肽的提取领域。



背景技术:

目前已报道的免疫调节肽在结构上多含精氨酸、谷氨酰胺或脯氨酸等氨基酸残基,玉米正好富含以上氨基酸,由此可以推测,玉米将是潜在的免疫调节肽的良好来源。

玉米是全球产量最大的谷物。我国是玉米产量大国,仅次于美国。玉米胚芽粕是玉米胚芽榨油后的主要副产物,粗蛋白质含量约为18-21%,主要成分与玉米蛋白粉相似,为玉米醇溶蛋白和球蛋白,不溶于水,易溶于醇;富含谷氨酸和精氨酸,但是必需氨基酸色氨酸、赖氨酸等含量很低,因此,目前国内玉米胚芽粕主要用作饲料或者直接废弃处理,并没有发挥其潜在的经济价值,存在严重不足。



技术实现要素:

为解决以上问题,本发明提供一种免疫调节肽的制备方法:玉米榨油后的下脚料——玉米胚芽粕制备的玉米肽即为免疫调节肽。

较佳的,提取包括如下步骤:

(1)原料粉碎:取权利要求1中所述的玉米胚芽粕,并将其置于粉碎机中粉碎;

(2)预变性:将玉米胚芽粕粉末按照原料:水=1:2-1:5的料液比例混合,充分搅拌后,在95℃水浴中加热15min,震荡速度为120-200rpm;

(3)酶解:采用嗜热菌蛋白酶-胃蛋白酶双酶复合酶解处理;水解条件为:料液调至至60-70℃并保温,搅拌速度为120-200rpm,用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH为7.5-8.5,加入嗜热菌蛋白酶,添加量为料液蛋白质量(其中玉米胚芽粕中的蛋白质含量按照GB5009.5食品中蛋白质的测定方法进行测定的)的0.5%-1.5%,酶解时间为3-5h;然后将料液温度降至室温,搅拌速度不变,用0.5mol/L的HCl溶液调节pH为1.8-2.5,加入胃蛋白酶,添加量为料液蛋白质量的2%-5%,酶解时间为3-5h;此时玉米肽的水解度约为25-40%;

(4)灭酶:将酶解液用0.5mol/L的NaOH溶液回调至pH 7.0,加热至100℃,保温15min-20min;

(5)离心除渣:酶解液经5000rpm,30min离心后,取上清液备用;

(6)膜分离:将步骤(5)中的上清液采用超滤除去蛋白酶、大分子蛋白及玉米黄素,收集滤过液,然后采用纳滤脱盐,收集截留液即为玉米免疫调节肽溶液;其中超滤条件为:超滤膜截留分子量3kDa,超滤压力0.3-0.5MPa;纳滤脱盐处理条件为:纳滤膜截留分子量为125Da,操作压力为0.2-0.4 MPa。

较佳的,步骤(1)中,原料粉碎至过100-200目的粉末状。

较佳的,还包括步骤(7)喷雾干燥:将步骤(6)中纳滤截留的玉米肽溶液用水稀释成浓度为6-12%,进行喷雾干燥,即得玉米免疫调节肽粉;其中喷雾干燥的条件为:料液温度为50-70℃、喷雾干燥塔内热风温度为130-150℃、进料泵速为4r/min、喷雾压力为14MPa、喷嘴孔径为2.0mm。

本发明提供的这种免疫调节肽的制备方法,选用榨油后的玉米胚芽粕作为原料提取出具有显著的抗炎类免疫调节活性的玉米肽,可大大提高玉米胚芽粕的附加值,减少浪费和环境污染,同时丰富玉米肽这一天然食品新资源的功能性,满足市场上对天然安全功能性食品配料的需求,具有重要的的经济和社会价值。同时,制备提取工艺简单,可批量化生产提取,其实用性强。

具体实施方式

实施例 1

一种免疫调节肽的制备方法,选用玉米榨油后的下脚料玉米胚芽粕提取出玉米肽,其提取包括如下步骤:

(1)原料粉碎:取权利要求1中所述的玉米胚芽粕,并将其置于粉碎机中粉碎至过200目的粉末状。

(2)预变性:将玉米胚芽粕粉末按照原料:水=1:5的料液比例混合,充分搅拌后,在95℃水浴中加热15min,震荡速度为150rpm。

(3)酶解:采用嗜热菌蛋白酶-胃蛋白酶双酶复合酶解处理。水解条件为:料液调至60℃并保温,搅拌速度为150rpm,用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH为8.0,加入嗜热菌蛋白酶,添加量为料液蛋白质量的0.5%,酶解时间为3h。然后将料液温度降至室温,搅拌速度不变,用0.5mol/L的HCl溶液调节pH为2,加入胃蛋白酶,添加量为料液蛋白质量的2%,酶解时间为3h。此时玉米肽的水解度约为32.5%。其中,料液蛋白质含量是按照GB5009.5食品中蛋白质的测定方法进行测定的。

(4)灭酶:将酶解液用0.5mol/L的NaOH溶液回调至pH 7.0,加热至100℃,保温15min;

(5)离心除渣:酶解液经5000rpm,30min离心后,取上清液备用;

(6)膜分离:将步骤(5)中的上清液采用超滤除去蛋白酶、大分子蛋白及玉米黄素,收集滤过液,然后采用纳滤脱盐,收集截留液即为玉米免疫调节肽溶液;其中超滤条件为:超滤膜截留分子量3kDa,超滤压力0.3MPa;纳滤脱盐处理条件为:纳滤膜截留分子量为125Da,操作压力为0.25MPa。

(7)喷雾干燥:将步骤(6)中纳滤截留的玉米肽溶液用水稀释成浓度为8%,进行喷雾干燥,即得玉米免疫调节肽粉;其中喷雾干燥的条件为:料液温度为65℃、喷雾干燥塔内热风温度为135℃、进料泵速为4r/min、喷雾压力为14MPa、喷嘴孔径为2.0mm。

实施例 2

一种免疫调节肽的制备方法,选用玉米胚芽榨油后的玉米胚芽粕作为原料提取出玉米肽,其提取包括如下步骤:

(1)原料粉碎:取权利要求1中所述的玉米胚芽粕,并将其置于粉碎机中粉碎至过140目的粉末状。

(2)预变性:将玉米胚芽粕粉末按照原料:水=1:3.5的料液比例混合,充分搅拌后,在95℃水浴中加热15min,震荡速度为200rpm。

(3)酶解:采用嗜热菌蛋白酶-胃蛋白酶双酶复合酶解处理。水解条件为:料液调至65℃并保温,搅拌速度为180rpm,用0.5mol/L的NaOH溶液调节pH为8.2,加入嗜热菌蛋白酶,添加量为料液蛋白质量的0.8%,酶解时间为4h。然后将料液温度降至室温,搅拌速度不变,用0.5mol/L的HCl溶液调节pH为2.2,加入胃蛋白酶,添加量为料液蛋白质量的4%,酶解时间为2h。此时玉米肽的水解度约为30.8%。其中,料液蛋白质含量是按照GB5009.5食品中蛋白质的测定方法进行测定的。

(4)灭酶:将酶解液用0.5mol/L的NaOH溶液回调至pH 7.0,加热至100℃,保温20min;

(5)离心除渣:酶解液经5000rpm,30min离心后,取上清液备用;

(6)膜分离:将步骤(5)中的上清液采用超滤除去蛋白酶、大分子蛋白及玉米黄素,收集滤过液,然后采用纳滤脱盐,收集截留液即为玉米免疫调节肽溶液;其中超滤条件为:超滤膜截留分子量3kDa,超滤压力0.25MPa;纳滤脱盐处理条件为:纳滤膜截留分子量为125Da,操作压力为0.3MPa。

(7)喷雾干燥:将步骤(6)中纳滤截留的玉米肽溶液用水稀释成浓度为12%,进行喷雾干燥,即得玉米免疫调节肽粉;其中喷雾干燥的条件为:料液温度为60℃、喷雾干燥塔内热风温度为125℃、进料泵速为4r/min、喷雾压力为14MPa、喷嘴孔径为2.0mm。

为验证提取的玉米肽的免疫调节活力,特选择单核巨噬细胞U937和血管内皮细胞EAhy926细胞株,以玉米肽添加后对脂多糖诱导的U937的炎性反应和TNF-α 诱导的EAhy926的炎性反应来表征玉米肽的抗炎免疫调节活力。通过MTT实验发现5mg/mL的玉米肽添加量对两种细胞株的细胞增殖均无影响,即无细胞毒性。在脂多糖诱导的U937炎症反应中,玉米肽在细胞体系中添加量为0.5-1mg/mL时,对白细胞介素6(IL-6)的抑制率为32%-62.7%。在TNF-α 诱导的EAhy926的炎性反应中,玉米肽在细胞体系中添加量为0.5-1mg/mL时,可以显著下调血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)的表达,降低血管类炎症,由此可知,所提取出的玉米肽即为有显著的抗炎类免疫调节肽。玉米肽的免疫调节活力结果见下表1所示:

以上仅为本发明较佳的实施例,故不能依此限定本发明实施的范围,即依本发明说明书内容所作的等效变化与装饰,皆应属于本发明覆盖的范围内。

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