本发明涉及中药提取领域，具体而言，涉及一种化合物及其制备方法和应用。
背景技术
牛角瓜，别名哮喘树、羊浸树、断肠草。直立灌木，高达3米，有毒。产于云南、四川、广西和广东等省区。有很高的经济和药用价值。
具体地，牛角瓜的根、茎、叶和果等均可药用，具有消炎、抗菌、化痰和解毒等作用，用于麻风病、哮喘、咳嗽、溃疡和肿瘤等疾病的治疗。牛角瓜的乳汁具有强心、保肝、镇痛消炎等疗效，树皮可治癫痫。茎叶的乳汁有毒，含多种强心甙，供药用，治皮肤病、痢疾、风湿、支气管炎；树皮可治癫痫。
但牛角瓜的医药价值还有待进一步研究。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一目的在于提供一种化合物，该化合物是从牛角瓜中提取得到，经进一步体外细胞毒活性研究，表明具有很好的体外抗肿瘤作用。
本发明的第二目的在于提供一种所述的化合物的制备方法，为上述化合物的提取提供支持。
本发明的第三目的在于提供上述的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种化合物，其结构式如下所示：
本发明提供的该化合物，从牛角瓜中经提取分离得到，经进一步体外细胞毒活性研究，表明该化合物具有很好的体外抗肿瘤作用。
本发明还提供了上述的化合物的制备方法，包括以下步骤：
以牛角瓜作为原料，采用90％±2％乙醇溶液浸泡，得到的浸泡液进行浓缩得到第一浸膏；
所述第一浸膏采用石油醚萃取并浓缩，得到的水层进行浓缩得到第二浸膏；
所述第二浸膏进行层析，所述层析采用醋酸乙酯作为层析液，最后经分离得到所述化合物。
本发明提供的上述的化合物的制备方法，方法简单，提取得到的化合物纯度高，易于工业化生产。
本发明从牛角瓜中采用不同的层析方法，得到多种化合物单体，利用现代波谱技术进行结构确认。然后通过mtt体外活性筛选法，对获得的单体化合物进行体外活性筛选，评价其体外抗肿瘤活性，得到本发明提供的化合物具有良好的体外抗肿瘤活性。
进一步地，所述浸泡的次数为2-5次。如在不同的实施例中，浸泡的次数可以为2次、3次、4次、5次等等。
采用特定的溶液将牛角瓜浸泡，以将牛角瓜中特定的有效活性成分溶出。
进一步地，所述浸泡的温度为15-30℃。如在不同实施例中，浸泡的温度可以为15℃、18℃、20℃、22℃、25℃、28℃、29℃、30℃等等。一般在室温下操作即可。
每次浸泡的时间为1天以上，一般为2-5天。
进一步地，所述层析采用硅胶柱进行。所用的硅胶柱一般为200-300m硅胶柱。
进一步地，所述分离采用hplc进行。
进一步地，所述牛角瓜选用牛角瓜根，所述牛角瓜根在进行浸泡前先粉碎。
本发明还提供了上述的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
进一步地，所述肿瘤包括肝癌、宫颈癌、胃癌、慢性髓性白血病和肺腺癌。
根据临床的要求，药物可制成各种剂型。进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
进一步地，所述药学可接受的辅料包括稀释剂、赋形剂、崩解剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、矫味剂、表面活化剂、稳定剂中的任一种或多种组合。
如赋形剂包括甘露醇、乳糖、淀粉、右旋糖酐、微晶纤维素中的任一种或多种组合；崩解剂包括聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素中的任一种或多种组合；润滑剂包括滑石粉、硬脂酸镁中的任一种或两种组合。
进一步地，所述药物的剂型包括注射剂、针剂、片剂、冲剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂中的任一种。
本发明中涉及的稀释剂如水等；填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂，如淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；表面活化剂如阳离子型、阴离子型、两性离子型和非离子型；稳定剂如硬脂酸镉、硬脂酸锌、二巯基乙酸异辛酯二正辛基锡、二月桂酸二正丁基锡等等。
本发明提供的药物的剂型按照本领域的常规方法制备即可。如为了将本发明的有效成分制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
如：为了将给药单元制成胶囊剂，可以将本发明的有效成分与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
又如：为将本发明的有效成分制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、ph调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；ph调节剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
优选地，所述药物的剂型为注射剂。有效活性成分可以制成水溶液或粉剂等适用于注射用的药物形式，方便快捷，易于使用。
具体地，上述化合物应用于治疗肿瘤，特别是宫颈癌、胃癌和慢性髓性白血病。
肿瘤的治疗方法，包括给予受试者有效量的上述化合物。
给药方式可以为口服、静脉注射或者是透皮渗透方式，施加于需要治疗的患者，具体可根据病人的病情、年龄等，由医师决定。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明从牛角瓜中分离得到多个化合物单体，结合mtt体外活性筛选法，并利用现代波谱技术进行结构确认，得到了本发明提供的化合物单体具有良好的体外抗肿瘤活性。
(2)本发明提供的化合物为牛角瓜中强心苷类化合物，该化合物的活性的检测为强心苷类化合物结构-活性的构效关系提供理论依据。
(3)本发明提供的上述的化合物的制备方法，方法简单，提取得到的化合物纯度高，易于工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例2中化合物对不同肿瘤细胞生长抑制作用的曲线图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
牛角瓜根切片，采用90％±2％乙醇溶液在室温下浸泡，浸泡三次，得到的浸泡液经过滤浓缩得到第一浸膏；
第一浸膏采用石油醚萃取并浓缩，得到的水层进行浓缩得到第二浸膏；
第二浸膏采用硅胶柱进行层析，层析采用醋酸乙酯作为层析液，最后经hplc分离分别得到化合物。
现代波谱技术进行结构确认。
ei-ms谱给出的分子离子峰m/z＝410[m]+。1h-nmr谱中0.71(3h，s)、0.76(3h，s)、0.80(3h，s)、0.85(3h，s)、0.90(3h，s)、1.01(3h，s)、1.11(3h，s)、1.26(3h，s)为化合物中八个角甲基氢信号峰，故推测可能为五环三萜类化合物。5.20(1h，t)为该五环三萜类化合物15位的双键氢。13c-nmr谱中123.75、129.48为齐墩果烷型三萜特征烯碳信号，而且25.40(c-23)，18.27(c-24)，18.71(c-25)，19.04(c-26)，25.40(c-27)，24.26(c-28)，33.65(c-29)，24.20(c-30)为对应的8个角甲基碳信号。分子式为c30h50，ei-ms(m/z)：410[m]+，分子量为410，白色固体(石油醚-丙酮＝5:1)，5％浓硫酸-乙醇溶液显色为黑色。
化合物的分子式如下：
实施例2
实施例1得到的化合物采用不同的浓度分别对k562人慢性髓原白血病细胞、bel-7402人肝癌细胞、hela人宫颈癌细胞、a549人肺腺癌细胞培养，培养参数按照各癌细胞的正常培养参数进行按照常规的方法进行。同时以紫杉醇作为对比培养各细胞。检测ic50值，得到的结果如表1所示。
表1不同化合物培养条件下的各细胞ic50值
其中，sgc-7901人胃癌细胞、k562人慢性髓原白血病细胞和a549人肺腺癌细胞的曲线图如图1所示。
可以看出，本发明提供的化合物对bel-7402人肝癌细胞和a549人肺腺癌细胞的ic50>50表现为无细胞毒活性。
综上可知，本发明提供的化合物对宫颈癌、胃癌和慢性髓性白血病具有良好的抑制不同肿瘤细胞的作用。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。