本发明属于植物多肽领域，更具体地，涉及一种火棘籽多肽及其制备方法。
背景技术
火棘，是一种常见于我国东南和西南各省的野生常绿灌木果树，适应能力强，产果率较高，是一种储量十分丰富且分布集中的野生植物资源。火棘不仅可用于园林绿化，其根、叶、果实均含有丰富的营养成分和生物活性物质，尤其是火棘所含有的多糖类、黄酮类、多酚类和其他生物活性物质，在营养保健食品、药用、日化用品、生态保护等方面均具有广阔的开发和应用前景。随着火棘的深入研究开发，火棘果大量用于加工食品，提取天然色素、果胶等重要食品及化妆品添加剂。火棘果加工后，产生了大量残渣，一般被弃置或作为粗肥料来处理。研究报道火棘籽中含有10％～20％的蛋白质，但这些蛋白质多被木质纤维包裹，蛋白消化利用率很低。如果能够将这些蛋白质有效地水解加工成小分子多肽，不但可提高消化吸收效率用于保健作用，而且综合提高了火棘资源开发利用价值，减轻生态环境压力。
目前关于火棘籽多肽的研究还未见报道，本发明利用火棘籽为原料，提供了一种火棘籽多肽及其制备方法，为火棘资源综合开发利用提供科学依据，促进火棘资源产业的发展。
技术实现要素：
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明的目的在于提供一种火棘籽多肽及其制备方法，其中通过对制备方法整体的工艺流程设计进行改进，采用两步酶解法对火棘籽进行处理，并通过对反应体系内各个反应原料及试剂的配比、反应温度、ph值环境等进行控制，与现有技术相比能够有效解决火棘籽多肽的制备问题，并且该制备方法中火棘籽多肽转化率高、提取率高，为火棘籽多肽的进一步应用提供了良好的支持。
为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种火棘籽多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将火棘籽原料清洗后，加入至重量为该火棘籽原料重量1～3倍的40～60℃的纯净水中，然后在高压均质机中进行组织细胞破碎得到火棘籽匀浆液；接着，将所述火棘籽匀浆液投入可温控的超声辅助提取罐，添加纯净水，调节ph值至3～7，并使底物质量浓度为5～15％，然后添加酶制剂，所述酶制剂的添加量为所述火棘籽重量的0.2～3％，接着进行逆流循环浸提，浸提温度控制在35～65℃，然后再离心去渣得离心提取液，真空浓缩，得到浓缩浸膏；
所述酶制剂为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶中的一种或多种；
(2)向所述步骤(1)得到的所述浓缩浸膏中加入6～10倍重量的纯净水，用碱液调ph至6.8～7.2，按底物质量浓度0.5～5％添加中性蛋白酶进行水解，水解温度为30～60℃；水解处理完毕后升温至90～100℃灭酶，接着冷却，然后离心取上层清液，得到火棘籽酶解液；
(3)将所述步骤(2)得到的所述火棘籽酶解液经过截留分子量为4000～8000da的超滤膜进行过滤，除去大分子杂质，得超滤膜透过液，接着，再将该超滤膜透过液经过截留分子量为150～1000da的纳滤膜进行过滤，除去部分残留无机盐和小分子杂质，得目标截留酶解液，然后40～60℃减压浓缩至浸膏，真空冷冻干燥后粉碎即可制得火棘籽多肽。
作为本发明的进一步优选，所述步骤(1)中，所述火棘籽原料预先经过浸泡处理，浸泡时间优选为4～6h；
所述组织细胞破碎所采用的均质压力为20～30mpa，历时10～20分钟；
所述调节ph值至3～7具体是采用盐酸溶液；
所述逆流循环浸提的浸提时长为2～5h；
所述离心去渣是在3000～5000rpm的条件下进行的。
作为本发明的进一步优选，所述步骤(2)中，所述碱液为naoh或ca(oh)2溶液；
所述水解具体为搅拌水解，所述搅拌水解的时间1h～4h，
所述灭酶的时间10～30min；
所述离心取上层清液是在3000～5000rpm的条件下进行的。
按照本发明的另一方面，本发明提供了利用上述制备方法得到的火棘籽多肽。
通过本发明所构思的以上技术方案，与现有技术相比，通过匀浆机均质处理火棘籽，可有效解决被木质纤维包裹的问题。本发明还对组织细胞破碎所采用的高压均质机条件进行优选控制，可有效确保组织细胞破碎的效率。并且，本发明由于采用两步酶解法对火棘籽进行处理，先利用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶中的一种或多种作为酶制剂参与第一步酶解，再利用中性蛋白酶进行第二步酶解，并通过对反应体系内各个反应原料及试剂的配比、反应温度、ph值环境等进行控制，能够有效确保火棘籽多肽的转化率及提取率。本发明通过超滤膜分离系统、纳滤膜分离系统处理酶解液，即，先将火棘籽酶解液经过截留分子量为4000～8000da的超滤膜(如截留分子量为4000da、5500da或6500da的超滤膜)进行过滤，除去大分子杂质，得超滤膜透过液，接着，再将该超滤膜透过液经过截留分子量为150～1000da的纳滤膜(如截留分子量为500da、800da或1000da的纳滤膜)进行过滤，除去部分残留无机盐和小分子杂质，得到目标截留酶解液(这部分酶解液中所含的火棘籽多肽它们的分子量分布将满足预期)，并将其经浓缩、真空冷冻干燥、粉碎最终得到火棘籽多肽，效果好，易吸收。
本发明火棘籽原料来源广泛，价格低廉，工艺简单，易操作，本发明采取高压均质，并分两步酶解，多肽转化率和提取率高，生产过程绿色环保，产品质量稳定，具备良好的抗氧化活性、增强免疫力、抗疲劳、健脾消积等功能，可应用于功能性食品和化妆品等领域。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
本实施例中火棘籽多肽的制备方法包括以下步骤：
(1)将火棘籽原料清洗，浸泡4～6h，加入其重量的1～3倍40～60℃的纯净水(重量即为最初干燥的火棘籽重量的1～3倍)，在高压均质机中，均质压力20～30mpa，组织细胞破碎10～20分钟，得到火棘籽匀浆液，将火棘籽匀浆液投入可温控的超声辅助提取罐，添加纯净水，用盐酸溶液调节ph值至3～7，底物质量浓度为5～15％(相当于，火棘籽初始原料其重量占该体系整体的质量浓度为5～15％)，添加酶制剂，酶用量占火棘籽重量0.2～3％(重量即为最初干燥的火棘籽重量的0.2～3％)，逆流循环浸提，温度控制在35～65℃，浸提2～5h，再3000～5000rpm离心去渣，得离心提取液，真空浓缩，得到浓缩浸膏。
所述酶制剂为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶中的一种或多种。并且，由于步骤(1)调节ph值至3～7是采用盐酸溶液，而后续真空浓缩处理则可以除去残余的盐酸，减少后续碱液用量。
(2)向浸膏中加入6～10倍重量的纯净水，用碱液调ph至中性(例如，ph满足6.8～7.2)，按底物质量浓度0.5～5％(即步骤1所得浓缩浸膏重量的0.5～5％)添加中性蛋白酶进行水解，水解温度30～60℃，搅拌水解时间1h～4h，然后升温至90～100℃灭酶，灭酶时间10～30min，冷却至常温，3000～5000rpm离心取上层清液，得到火棘籽酶解液。
所述碱液为naoh或ca(oh)2溶液。
(3)上述火棘籽酶解液经过截留分子量为4000～8000da的超滤膜分离系统进行过滤，除去大分子杂质，得超滤膜透过液；将所述超滤膜透过液经过截留分子量为150～1000da的纳滤膜分离系统进行过滤，除去部分残留无机盐和小分子杂质，得目标截留酶解液，然后40～60℃减压浓缩至浸膏，真空冷冻干燥后粉碎即可制得火棘籽多肽。
本发明中所采用的中性蛋白酶可以是现有技术中已知的中性蛋白酶。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。