一种油棕花粉萌发用培养基及其萌发方法与流程

文档序号:15457402发布日期:2018-09-15 01:28

本发明属于种子培养技术领域,具体涉及一种油棕花粉萌发用培养基及其萌发方法。



背景技术:

油棕属多年生单子叶植物,是热带木本油料作物。油棕的果肉、种仁含油丰富,在各种油料作物中,有“世界油王”之称。用果肉榨的油叫棕榈油。油棕的产量受到授粉率的制约。因此,可以通过研究油棕花粉萌发过程中的生理生化和分子机制,提高花粉质量,从而提供油棕的产量。而研究油棕花粉萌发过程中的生理生化和分子机制,需要大批量进行花粉萌发,满足实验取样。但目前使用的油棕花粉萌发的培养基花粉萌发率低,不适宜花粉大量批量萌发。



技术实现要素:

有鉴于此,本发明提供了一种油棕花粉萌发用培养基及其萌发方法,能够有效地提高油棕花粉的萌发率。

为了解决上述问题,本发明提供了以下技术方案:

本发明提供了一种油棕花粉萌发用培养基,以水为溶剂,包括以下含量的组分:蔗糖45~55g/L,硼酸0.09~0.11g/L和MS培养基0.09~0.11g/L。

优选的,包括以下含量的组分:蔗糖50g/L,硼酸0.1g/L和MS培养基0.1g/L。

优选的,所述培养基的pH值为5.6~6.2。

本发明提供了一种油棕花粉的萌发方法,包括如下步骤:

将油棕花粉与上述方案所述培养基混合,在25~33℃条件下,光照培养2~4.5h;

所述油棕花粉的质量与培养基的体积比为1g:9~14mL。

优选的,所述光照培养时的湿度为70%~85%。

优选的,所述光照培养的温度为31℃。

优选的,所述光照培养的时间为3h。

优选的,所述油棕花粉的质量与培养基的体积比为1g:10~13mL。

优选的,所述油棕花粉的收集保存方法包括:上午8~10点收集花粉,过200~400目筛后,在35~40℃条件下干燥12~30h后,在-22~-18℃条件下冷冻保藏。

本发明提供了一种油棕花粉萌发培养基,包括以下含量组分:蔗糖45~55g/L,硼酸0.09~0.11g/L和MS培养基0.09~0.11g/L。本发明提供的培养基中,MS培养基提供了萌发所需要的无机盐、微量元素和维生素,硼酸可加强代谢活动,参与花粉管壁构建,蔗糖为花粉萌发提供能量,并维持花粉管的渗透压平衡。实施例结果表明本发明提供的培养基能够使花粉萌发率到达80~85%,相较于对照组提高10%~20%。

进一步的,本发明提供了一种油棕花粉的萌发方法,将油棕花粉与上述方案所述油棕花粉萌发培养基按1g:9~14mL质量体积比混合,在25~33℃条件下,光照培养2~4.5h;不仅可以使花粉充分与培养基接触,且适宜的比例,不会因为培养基过多,导致大量花粉沉着在培养基下面不能够和空气有效接触导致呼吸困难从而导致不能萌发的问题,从而提高花粉的萌发率。

附图说明

图1为实施例1的花粉萌发后在显微镜下的形态图;

图2为实施例2的花粉萌发后在显微镜下的形态图;

图3为实施例3的花粉萌发后在显微镜下的形态图;

图4为对比例1的花粉萌发后在显微镜下的形态图;

图5为对比例2的花粉萌发后在显微镜下的形态图;

图6为对比例3的花粉萌发后在显微镜下的形态图。

具体实施方式

本发明提供了一种油棕花粉萌发用培养基,以水为溶剂,包括以下含量的组分:45~55g/L,硼酸0.09~0.11g/L和MS培养基0.09~0.11g/L。

本发明提供的油棕花粉萌发培养基包括蔗糖。所述蔗糖的浓度为45~55g/L,优选为50g/L。本发明中,所述蔗糖为花粉萌发提供能量,并维持花粉管的渗透压平衡。本发明对所述蔗糖的来源没有特殊限定,采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中采用的蔗糖购买自广州化学试剂厂。

本发明提供的油棕花粉萌发培养基中包括硼酸。所述硼酸的浓度为0.09~0.11g/L,优选为0.1g/L。本发明中,所述硼酸可加强代谢活动,参与花粉管壁构建,蔗糖为花粉萌发提供能量,并维持花粉管的渗透压平衡。本发明对所述硼酸的来源没有特殊限定,采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中采用的硼酸购买自广州化学试剂厂。

本发明提供的油棕花粉萌发培养基中包括MS培养基。所述MS培养基的浓度为0.09~0.11g/L,优选为0.1g/L。本发明中,所述MS培养基提供萌发所需要的无机盐、微量元素和维生素。本发明对所述MS培养基的来源没有特殊限定,采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中采用的MS培养基购买自PhytoTechnology。

本发明中,所述油棕花粉萌发培养基的pH值优选为5.6~6.2,更优选为6.0。

本发明提供了一种油棕花粉的萌发方法,包括如下步骤:

将油棕花粉与上述方案所述油棕花粉萌发培养基混合,在25~33℃条件下,光照培养2~4.5h;

所述油棕花粉的质量与培养基的体积比为1g:9~14mL。

本发明将油棕花粉与上述方案所述油棕花粉萌发培养基混合,在25~33℃条件下,光照培养2~4.5h。本发明中,所述油棕花粉的收集保存方法优选包括:上午8~10点收集花粉,过200~400目筛后,在35~40℃条件下干燥12~30h后,在-22~-18℃条件下冷冻保藏;更优选为上午9点收集花粉,过300目筛后,在38℃条件下干燥24h后,在-20℃条件下冷冻保藏。本发明对所述油棕花粉的品种和来源没有特殊限定,采用本领域常规市售产品即可。本发明实施例中所述油棕花粉收集自中国热带农业科学院椰子研究所油棕种质圃。本发明中,所述光照培养的温度优选为31℃。所述光照培养的时间优选为3h。培养的时间过长,花粉管生长过长交织在一起,影响对油棕花粉萌发率的统计与对花粉管长度的测量。本发明中,将在25~33℃条件下,光照培养2~4.5h,花粉进行了萌发,且花粉管长度适宜,利于后续的统计测量。本发明中,所述油棕花粉的质量与培养基的体积比为1g:9~14mL,优选为1g:10~13mL,更优选为1g:12mL。本发明中油棕花粉的质量与培养基的体积比为1g:9~14mL不仅可以使花粉充分与培养基接触,且适宜的比例,不会因为培养基过多,导致大量花粉沉在培养基下面不能够和空气有效接触导致呼吸困难从而导致不能萌发的问题。本发明中,所述光照培养时的湿度为70%~85%,更优选为80%。本发明中将油棕花粉和培养基混合后,优选在培养基上覆盖一层吸水纸来保持培养基的湿度。

培养完成后,本发明采用显微镜观察计数,计算萌发率。具体方法优选为:培养完成后,吸取1滴花粉与培养基混合液于载玻片上,不盖盖玻片,放入光学显微镜下观察萌发率。

为了进一步说明本发明,下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

称量蔗糖45g,硼酸0.11g和MS培养基0.09g,加水定容至1000mL,调节pH值为5.6,得到油棕花粉萌发培养基。在培养皿中倒入1g花粉和9mL的培养基,在培养基上覆盖一层吸水纸后盖上培养皿盖子。放入光照培养箱中,在33℃下光照培养2h后取出。吸取1滴花粉和培养基混合液于载玻片上,在显微镜下观察计数,在显微镜下观察的具体结果如图1所示。由图1可以看出花粉散布较疏松,花粉管较长,花粉萌发较多。

实施例2

称量蔗糖55g,硼酸0.09g和MS培养基0.11g,加水定容至1000mL,调节pH值为6.2,得到油棕花粉萌发培养基。在培养皿中倒入1g花粉和14mL的培养基,在培养基上覆盖一层吸水纸后盖上培养皿盖子。放入光照培养箱中,在25℃下光照培养4.5h后取出。吸取1滴花粉和培养基混合液于载玻片上,在显微镜下观察计数。在显微镜下观察的具体结果如图1所示。由图2可以看出花粉散布较疏松,花粉管较长,花粉萌发较多。

实施例3

称量蔗糖50g,硼酸0.1g和MS培养基0.1g,加水定容至1000mL,调节pH值为6.0,得到油棕花粉萌发培养基。在培养皿中倒入1g花粉和12mL的培养基,在培养基上覆盖一层吸水纸后盖上培养皿盖子。放入光照培养箱中,在31℃下光照培养3h后取出。吸取1滴花粉和培养基混合液于载玻片上,在显微镜下观察计数,在显微镜下观察的具体结果如图3所示。由图3可以看出花粉散布疏松,花粉萌发多,花粉管长。

对比例1

称量蔗糖50g,硼酸0.1g和MS培养基0.1g,加水定容至1000mL,调节pH值为6.0,得到油棕花粉萌发培养基。在培养皿中倒入2g花粉和10mL的培养基,在培养基上覆盖一层吸水纸后盖上培养皿盖子。放入光照培养箱中,在31℃下光照培养3h后取出。吸取1滴花粉和培养基混合液于载玻片上,在显微镜下观察计数,在显微镜下观察的具体结果如图4所示。由图4可以看出花粉散布密集,花粉萌发少,花粉管较短。

对比例2

称量蔗糖50g,硼酸0.1g和硝酸钾0.1g,加水定容至1000mL,调节pH值为6.0,得到油棕花粉萌发培养基。在培养皿中倒入1g花粉和12mL的培养基,在培养基上覆盖一层吸水纸后盖上培养皿盖子。放入光照培养箱中,在31℃下光照培养3h后取出。吸取1滴花粉和培养基混合液于载玻片上,在显微镜下观察计数,具体结果如图5所示。由图5可以看出花粉散布较疏松,花粉萌发较少,花粉管较短。

对比例3

称量蔗糖10g,硼酸0.3g和硝酸钾0.3g,加水定容至1000mL,调节pH值为6.0,得到油棕花粉萌发培养基。在培养皿中倒入1g花粉和12mL的培养基,在培养基上覆盖一层吸水纸后盖上培养皿盖子。放入光照培养箱中,在31℃下光照培养3h后取出。吸取1滴花粉和培养基混合液于载玻片上,在显微镜下观察计数,在显微镜下观察的具体结果如图6所示。由图6可以看出花粉散布较疏松,花粉萌发较少,花粉管较短。

以实施例1~3作为实验组,以对比例1~3作为对照组,分别统计萌发率,具体结果如表1所示。

由表1可以看出,本发明采用本发明提供的培养基萌发油棕花粉,萌发率可达80%以上,相较于对照组提高10%~20%。

以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

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