一种芳基取代的脱氢枞胺衍生物及其制备方法和应用与流程

本申请涉及脱氢枞胺基化合物合成技术领域。具体来说，本申请涉及一种芳基取代的脱氢枞胺衍生物，该芳基取代的脱氢枞胺衍生物的制备方法和该芳基取代的脱氢枞胺衍生物在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

脱氢枞胺(亦称为脱氢松香胺)是比松香更稳定的一种松香衍生物，其结构式如下所示：

天然产物是在自然界中由活生物产生的那些通常具有药理学或生物学活性的化学物质，可被用于药学上的药物研发与药物设计。我国的松香年产量约占世界总产量的四分之一，是国际松香市场主要的供应国。希夫碱化合物具有杀菌、抑菌、抗癌、抗病毒等特性而被普遍应用于医学、药物等研究领域[arjmandf,sayeedf,muddassirm.synthesisofnewchiralheterocyclicschiffbasemodulatedcu(ii)/zn(ii)complexes:theircomparativebindingstudieswithct-dna,mononucleotidesandcleavageactivity.journalofphotochemistryandphotobiologybiology,2011,103(2):166-179.]。有报道表明吡啶醛与胺基反应合成schiff碱及其配合物具有抗菌、抗肿瘤活性[周健.吡啶醛类过渡金属席夫碱配合物的合成,晶体结构及谱学表征.广西师范大学,2004.]。

脱氢枞胺是松香的主要组分之一，它本身有一定的灭菌和抗菌活性。有少量研究表明脱氢枞胺希夫碱化合物具有抗菌、抗癌等生物活性[①饶小平.松香树脂酸衍生物的合成、表征及生物活性研究.中国林业科学研究院,2007.②饶小平,宋湛谦,高宏.含氟脱氢枞胺schiff碱的合成及抑菌活性.林产化学与工业,2007,27(2):97-99.③raoxp,songzq,yaoxj,etal.syntheses,crystalstructureandpropertiesofdehydroabietylamine5-nitro-sacyldieneschiffbaseanditsmetalcomplexes.chemistry&industryofforestproducts,2007,27(1):1-7.]。

前列腺癌是人类特有的疾病，是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率在欧美国家仅次于肺癌，位居男性癌症死亡的第2位[[siegelrl,millerkd,jemala.cancerstatistics,2015.cacancerjclin,2015,65(1):5-29.]。中国、日本、印度等亚洲国家前列腺癌发病率远低于欧美，但有增长趋势。[叶定伟.前列腺癌的流行病学和中国的发病趋势.中华外科杂志,2006,44(6):362-364.]。

目前临床上对前列腺癌的治疗方法包括手术治疗、放射治疗、内分泌治疗、化学治疗及免疫治疗等，其中内分泌治疗是晚期前列腺癌治疗的主要手段。前列腺癌具有高度异质性和激素敏感性。对于中晚期前列腺癌，雄激素剥夺治疗(androgendeprivetherapy)是其主要治疗手段，但大多数患者经过14～30个月的治疗后均逐渐发展为去势抵抗性前列腺癌(castration-resistantprostatecancer，crpc)，其中位生存期小于20个月[韩博,戚美,谭薇薇,杨木易.去势抵抗性前列腺癌的发生发展机制及药物治疗新进展,山东大学学报(医学版),2015,53(9):1-7.]。近年来，crpc的临床治疗现状已有了很大改观，可以明确改善患者预后的药物亦不断涌现。但是，在治疗方案越来越多的同时，也出现了更多的挑战和问题。例如，每种新药物的最适患者群是什么？是否可以选择特异性的生物学标志物来筛选将从某一特定治疗中获益的crpc患者？针对每一个体如何选择最合适的治疗方法，如何平衡疗效和不良反应，如何克服药物的耐药性都是急切解决的问题。

为此，本领域迫切需要开发一种低成本且在治疗前列腺癌时无副作用的芳基取代的脱氢枞胺衍生物及其制备方法。

技术实现要素：

本申请之目的在于提供一种低成本且在治疗前列腺癌时无副作用的芳基取代的脱氢枞胺衍生物，从而解决上述现有技术中的技术问题。本申请通过利用含苯甲醛结构的芳香族化合物来改性脱氢枞胺，得到芳香基取代的脱氢枞胺衍生物。具体来说，本申请将脱氢枞胺基本骨架引入芳环结构合成了3个脱氢枞胺还原希夫碱化合物，得到具有抗癌活性的脱氢枞胺衍生物。发明人令人意外地发现，这种特定结构的脱氢枞胺衍生物可有效杀死前列腺癌细胞，例如前列腺癌pc-3细胞。

此外，发明人发现根据本申请的脱氢枞胺衍生物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有良好的杀菌效果。

本申请具体合成的3种脱氢枞胺席夫碱化合物拓展了脱氢枞胺基席夫碱化合物种类，为研究脱氢枞胺基席夫碱化合物结构与性能之间的关系创造条件。同时，该系列脱氢枞胺席夫碱化合物表现出良好的抗癌活性，为抗前列腺癌药物的开发提供依据。

为了实现上述目的，本申请提供下述技术方案。

在第一方面中，本申请提供一种芳基取代的脱氢枞胺衍生物，其具有通过下述通式(i)所示的结构：

在通式(i)中，基团r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自氢原子、羟基、c1-c3烷基、或c1-c3烷氧基。

在第一方面的一种实施方式中，基团r1或r2为羟基。

在第一方面的一种实施方式中，基团r3选自羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基或异丙氧基。

在第一方面的一种实施方式中，基团r2或r4为氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。

在第一方面的一种实施方式中，所述芳基取代的脱氢枞胺衍生物包括具有下述结构式(1)-(3)中任一种的化合物：

或

在第二方面中，本申请提供一种制备如第一方面所述的芳基取代的脱氢枞胺衍生物的方法，所述方法包括下述步骤：

s1：使脱氢枞胺和芳香族化合物在第一有机溶剂中反应第一预定时间段，得到第一反应混合物；

s2：使第一混合物和过量的还原剂在冰浴条件下反应第二时间段，得到第二反应混合物；以及

s3：在第二反应混合物中加入水，然后用第二有机溶剂萃取有机相，干燥该有机相并除去溶剂后得到所述芳基取代的脱氢枞胺衍生物；

其中所述芳香族化合物具有如下述通式(ii)所示的结构：

在通式(ii)中，其中，基团r1、r2、r3、r4和r5各自独立地选自氢原子、羟基、c1-c3烷基、或c1-c3烷氧基。

在第二方面的一种实施方式中，所述芳香族化合物包括水杨醛、对羟基苯甲醛、对甲氧基苯甲醛、对乙氧基苯甲醛、对丙氧基苯甲醛或对异丙氧基苯甲醛。

在第二方面的一种实施方式中，所第一有机溶剂包括甲醇。

在第二方面的一种实施方式中，所述第二有机溶剂包括二氯甲烷或乙酸乙酯。

在第二方面的一种实施方式中，所述还原剂包括硼氢化钠或硼氢化钾。

在第二方面的一种实施方式中，所述第一预定时间段为5-10小时。

在第二方面的一种实施方式中，所述第二预定时间段为2-12小时。

在第二方面的一种实施方式中，在步骤s1中，所述脱氢枞胺和所述芳香族化合物的加料摩尔比为1:1。

在第三方面中，本申请提供如第一方面所述的芳基取代的脱氢枞胺衍生物在制备抗癌药物中的应用。

在第三方面的一种实施方式中，所述抗癌药物包括抗前列腺癌的药物。

与现有技术相比，本申请的有益效果在于取材于天然产品，所用原料对患者无毒副作用，且原料易得、价格便宜，化合物合成方法简单，合成所得化合物抗癌效果好。

附图说明

图1显示具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱。

图2显示具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱。

图3显示具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱。

图4显示具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱。

图5显示具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱。

图6显示具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱。

图7显示具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物对前列腺癌pc-3细胞的抑制作用。

图8显示具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物对lncapclonefgc细胞的抑制作用。

图9显示具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物对前列腺癌pc-3细胞的抑制作用。

图10显示具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物对lncapclonefgc细胞的抑制作用。

图11显示具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物对前列腺癌pc-3细胞的抑制作用。

图12显示具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物对lncapclonefgc细胞的抑制作用。

具体实施方式

术语“包含”，“包括”，“具有”以及它们的派生词不排除任何其它的组分、步骤或过程的存在，且与这些其它的组分、步骤或过程是否在本申请中披露无关。为消除任何疑问，除非明确说明，否则本申请中所有使用术语“包含”，“包括”，或“具有”的组合物可以包含任何附加的添加剂、辅料或化合物。相反，除了对操作性能所必要的那些，术语“基本上由……组成”将任何其他组分、步骤或过程排除在任何该术语下文叙述的范围之外。术语“由……组成”不包括未具体描述或列出的任何组分、步骤或过程。除非明确说明，否则术语“或”指列出的单独成员或其任何组合。

实施例

下面将结合本发明的实施例，对本发明的技术方案进行清楚和完整的描述。如无特别说明，所用的试剂和原材料都可通过商业途径购买。

一、制备具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物的方法的实施例如下：

实施例1：将脱氢枞胺(1.425g,5mmol)与水杨醛(610mg,5mmol)加入250ml的圆底烧瓶中，然后加入甲醇使其溶解，室温搅拌6小时后有明显的黄色固体析出，再称取过量的硼氢化钠(580mg,15mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，冰浴下反应2h后室温下继续搅拌过夜。反应结束后抽干溶剂，加入少量水摇匀，用二氯甲烷萃取并且收集萃取液的有机相，用饱和食盐水洗涤3次，干燥。过滤除去固体硫酸钠，收集滤液减压蒸馏除去溶剂，通过乙醇重结晶得具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物白色固体。

实施例2：将脱氢枞胺(712.5mg,2.5mmol)与水杨醛(305mg,2.5mmol)加入250ml的圆底烧瓶中，然后加入甲醇使其溶解，室温搅拌6小时后有明显的黄色固体析出，再称取过量的硼氢化钠(290mg,7.5mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，冰浴下反应2h后室温下继续搅拌过夜。反应结束后抽干溶剂，加入少量水摇匀，用二氯甲烷萃取并且收集萃取液的有机相，用饱和食盐水洗涤3次，干燥。过滤除去固体硫酸钠，收集滤液减压蒸馏除去溶剂，通过乙醇重结晶得具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物白色固体。

实施例3：将脱氢枞胺(356.25mg,1.25mmol)与水杨醛(152.5mg,1.25mmol)加入250ml的圆底烧瓶中，然后加入甲醇使其溶解，室温搅拌6小时后有明显的黄色固体析出，再称取过量的硼氢化钠(145mg,3.75mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，冰浴下反应2h后室温下继续搅拌过夜。反应结束后抽干溶剂，加入少量水摇匀，用二氯甲烷萃取并且收集萃取液的有机相，用饱和食盐水洗涤3次，干燥。过滤除去固体硫酸钠，收集滤液减压蒸馏除去溶剂，通过乙醇重结晶得具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物白色固体。

实施例1制备出的具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物为1.52g的白色固体化合物，产率为78％。

具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱结果如图1所示，且分析如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.18(t,j＝6.6hz,2h),7.01(d,j＝7.6hz,2h),6.92(s,1h),6.86(d,j＝8.1hz,1h),6.80(t,j＝7.4hz,1h),3.96(s,2h),2.94(t,j＝6.8hz,2h),2.85(dt,j＝13.7,6.9hz,1h),2.63(d,j＝11.7hz,1h),2.47(d,j＝11.6hz,1h),2.32(d,j＝12.9hz,1h),1.86-1.66(m,4h),1.54(dd,j＝19.5,12.5hz,2h),1.41(d,j＝12.7hz,2h),1.25(d,j＝6.8hz,9h),1.00(s,3h)。

具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱结果如图2所示，且分析如下：¹³cnmr(101mhz,cdcl3):δ158.26,147.18,145.67,134.65,128.87,128.32,126.94,124.28,123.96,122.90,119.05,116.40,61.32,53.73,45.91,38.46,37.57,36.80,36.52,33.55,30.09,25.51,24.11(d,j＝1.5hz),19.39,18.89(d,j＝10.6hz)。

上述结果证明，本实施例制备的化合物确实为具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物。

二、制备具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的方法的实施例如下：

实施例4：脱氢枞胺(855mg,3mmol)与对羟基苯甲醛(367mg,3mmol)溶于45ml无水甲醇再加入到250ml的圆底烧瓶中，室温搅拌10小时后，再称取过量的硼氢化钠(380mg,10mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，继续搅拌10h,反应结束后除去溶剂，加入少量水，用ea萃取，收集有机层，干燥。过滤后除去溶剂，通过柱色谱(pe:ea＝1:1)分离得到具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物油状液体。

实施例5：脱氢枞胺(427.5mg,1.5mmol)与对羟基苯甲醛(183.5mg,1.5mmol)溶于45ml无水甲醇再加入到250ml的圆底烧瓶中，室温搅拌10小时后，再称取过量的硼氢化钠(190mg,5mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，继续搅拌10h,反应结束后除去溶剂，加入少量水，用ea萃取，收集有机层，干燥。过滤后除去溶剂，通过柱色谱(pe:ea＝1:1)分离得到具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物油状液体。

实施例6：脱氢枞胺(1.71g,6mmol)与对羟基苯甲醛(734mg,6mmol)溶于45ml无水甲醇再加入到250ml的圆底烧瓶中，室温搅拌10小时后，再称取过量的硼氢化钠(760mg,20mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，继续搅拌10h,反应结束后除去溶剂，加入少量水，用ea萃取，收集有机层，干燥。过滤后除去溶剂，通过柱色谱(pe:ea＝1:1)分离得到具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物油状液体。

实施例5制备出的具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物为1.12g的油状物，产率为95％。

具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱结果如图3所示，且分析如下：¹hnmr(400mhz,dmso):δ9.21-9.06(m,1h),7.13(d,j＝8.1hz,1h),7.09(d,j＝8.0hz,2h),6.93(d,j＝7.7hz,1h),6.83(s,1h),6.69(d,j＝8.1hz,2h),3.56(q,j＝13.3hz,2h),2.75(dd,j＝13.2,6.3hz,3h),2.42(d,j＝11.8hz,1h),2.23(d,j＝12.4hz,1h),2.09(d,j＝11.8hz,1h),1.74-1.44(m,7h),1.24(d,j＝12.5hz,2h),1.15(d,j＝6.8hz,6h),1.11(s,3h),0.81(s,3h).

具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱结果如图4所示，且分析如下：¹³cnmr(101mhz,dmso)δ:156.37,147.69,145.15,134.88,131.88,129.28,126.77,124.45,123.87,115.20,60.32,54.01,44.73,38.66,37.23(d,j＝18.6hz),36.11,33.31,30.11,25.62,24.35(d,j＝3.7hz),19.84,18.94,18.61。

上述结果证明，本实施例制备的化合物确实为具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物。

三、制备具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物的方法的实施例如下：

实施例7：脱氢枞胺(427.5mg,1.5mmol)与对甲氧基苯甲醛(204.5mg,1.5mmol)溶于25ml无水甲醇再加入到250ml的圆底烧瓶中，室温搅拌8小时后，再称取过量的硼氢化钠(190mg,5mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，继续搅拌过夜。反应结束后除去溶剂，加入30ml蒸馏水，用二氯甲烷萃取，收集有机层，干燥。过滤后除去溶剂，通过柱色谱(pe:ea＝10:1)分离得到具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物白色固体。

实施例8：脱氢枞胺(855mg,3mmol)与对甲氧基苯甲醛(409mg,3mmol)溶于45ml无水甲醇再加入到250ml的圆底烧瓶中，室温搅拌8小时后，再称取过量的硼氢化钠(380mg,10mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，继续搅拌过夜。反应结束后除去溶剂，加入30ml蒸馏水，用二氯甲烷萃取，收集有机层，干燥。过滤后除去溶剂，通过柱色谱(pe:ea＝10:1)分离得到具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物白色固体。

实施例9：脱氢枞胺(1.71g,6mmol)与对甲氧基苯甲醛(818mg,6mmol)溶于90ml无水甲醇再加入到250ml的圆底烧瓶中，室温搅拌8小时后，再称取过量的硼氢化钠(760mg,20mmol)在冰浴下缓慢加入反应瓶中，继续搅拌过夜。反应结束后除去溶剂，加入60ml蒸馏水，用二氯甲烷萃取，收集有机层，干燥。过滤后除去溶剂，通过柱色谱(pe:ea＝10:1)分离得到具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物白色固体。

实施例8制备出的具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物为1.05g的白色固体化合物，产率为86％。

具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振h谱结果如图5所示，且分析如下：¹hnmr(400mhz,cdcl3):δ7.35(d,j＝8.5hz,2h),7.30(d,j＝8.2hz,1h),7.11(d,j＝7.7hz,1h),7.01(s,1h),6.97(d,j＝8.6hz,2h),3.89(s,3h),3.81(t,j＝10.8hz,2h),2.95(dd,j＝17.1,10.3hz,3h),2.65(d,j＝11.8hz,1h),2.40(dd,j＝12.0,7.0hz,2h),1.96-1.72(m,5h),1.57(ddd,j＝29.1,19.3,8.2hz,3h),1.37(s,3h),1.34(d,j＝5.8hz,6h),1.04(s,3h).

具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的核磁共振c谱结果如图6所示，且分析如下：¹³cnmr(101mhz,cdcl3):δ158.58,147.67,145.40,134.89,133.31,129.12,126.83,124.35,123.82,113.71,60.95,55.25,54.25,45.34,38.67,37.51,37.14,36.37,33.54,30.43,25.47,24.10(d,j＝1.6hz),19.49,18.94(d,j＝15.0hz)。

上述结果证明，本实施例制备的化合物确实为具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物。

四、本申请对两种前列腺癌细胞的毒性的检测，通过以下技术方案来证明：

将本申请的脱氢枞胺衍生物用于治疗前列腺癌细胞时，具体操作步骤为：用完全培养基配制不同浓度的脱氢枞胺衍生物，孵育细胞24小时后，用cck8法检测癌细胞相对存活率。

本文实施例中所用的癌细胞为前列腺癌pc-3细胞和lncapclonefgc细胞。

首先将本申请的脱氢枞胺衍生物用分析纯dmso配置成脱氢枞胺衍生物质量浓度为50mmol/l的dmso溶液，然后用完全培养基稀释成不同梯度的低浓度溶液，最终溶液中dmso含量不超过1％。

用于稀释化合物质量浓度为50mmol/l的dmso溶液所用的完全培养基为：lncapclonefgc细胞采用1640培养基，pc-3细胞采用f-12培养基，用相应培养基稀释成5μmol/l、10μmol/l、25μmol/l、50μmol/l。对照组为培养基加上最大浓度50μmol/l所含有的dmso剂量。

所述的cck8法检测癌细胞相对存活率时所选择的吸收波长为450nm。

具有结构式(1)、(2)、(3)脱氢枞胺衍生物对2种癌细胞的毒性测试试验具体步骤如下，其中，每种衍生物对每种癌细胞的毒性测试实验至少三次以上，实验数据中，每种衍生物作用于每种癌细胞的存活率为平均值：

(一)、具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物对2种前列腺癌细胞的毒性测试试验：

1、具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物储备液配制

称取4.89mg具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物溶于250μldmso溶剂，配制成含具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物为50mmol/l的dmso溶液。

2、cck8测ic50实验

用完全培养基将上述1中具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物储备液稀释成物质的量浓度依次为0、5、25、50、100、200μmol/l的溶液(实验癌细胞lncapclonefgc采用1640培养基，pc-3细胞采用f-12培养基)，取对数生长期的待测试细胞，配制成10⁵个/ml的单细胞悬液，在96孔培养板上接种，每空100μl，于体积分数为5％的二氧化碳、饱和湿度、37℃培养箱中培养一天，将100μl不同浓度的待测样品加入到培养板上，设置多个复孔，继续培养24h后，每孔加10μl的cck8溶液，在培养箱中继续培养2h，在酶标仪上450nm波长处测定od(吸光度)值，通过以下公式计算样品对前列腺癌细胞pc-3和lncapclonefgc细胞活力：

m＝样品的od/对照样的od，式中m表示细胞活力。

参考图7和图8，对pc-3和lncapclonefgc细胞的抑制作用结果显示，具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物的ic50分别为58.67μmol/l和208.2μmol/l，说明了具有结构式(1)的脱氢枞胺衍生物对pc-3癌细胞具有良好的抗癌活性，而对lncapclonefgc细胞无作用。

(二)、具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物对2种前列腺癌细胞的毒性测试试验：

1、具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物储备液配制

称取4.89mg具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物溶于250μldmso溶剂，配制成含具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物为50mmol/l的dmso溶液。

2、cck8测ic50实验

用完全培养基将上述1中具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物储备液稀释成物质的量浓度依次为0、1、5、10、25、50μmol/l的溶液(实验癌细胞lncapclonefgc采用1640培养基，pc-3细胞采用f-12培养基)，取对数生长期的待测试细胞，配制成105个/ml的单细胞悬液，在96孔培养板上接种，每空100μl，于体积分数为5％的二氧化碳、饱和湿度、37℃培养箱中培养一天，将100μl不同浓度的待测样品加入到培养板上，设置多个复孔，继续培养24h后，每孔加10μl的cck8溶液，在培养箱中继续培养2h，在酶标仪上450nm波长处测定od值，通过以下公式计算样品对前列腺癌细胞pc-3和lncapclonefgc细胞活力：

m＝样品的od/对照样的od，式中，m为细胞活力。

参考图9和图10，对pc-3和lncapclonefgc细胞的抑制作用结果显示，具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物的ic50分别为18.71μmol/l和59.63μmol/l，说明了具有结构式(2)的脱氢枞胺衍生物对pc-3和lncapclonefgc癌细胞均具有良好的抗癌活性。

(三)、具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物对2种前列腺癌细胞的毒性测试试验：

1、具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物储备液配制

称取5.07mg具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物溶于250μldmso溶剂，配制成含具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物为50mmol/l的dmso溶液。

2、cck8测ic50实验

用完全培养基将上述1中具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物储备液稀释成物质的量浓度依次为0、1、5、10、25、50μmol/l的溶液(实验癌细胞lncapclonefgc采用1640培养基，pc-3细胞采用f-12培养基)，取对数生长期的待测试细胞，配制成105个/ml的单细胞悬液，在96孔培养板上接种，每空100μl，于体积分数为5％的二氧化碳、饱和湿度、37℃培养箱中培养一天，将100μl不同浓度的待测样品加入到培养板上，设置多个复孔，继续培养24h后，每孔加10μl的cck8溶液，在培养箱中继续培养2h，在酶标仪上450nm波长处测定od值，通过以下公式计算样品对前列腺癌细胞pc-3和lncapclonefgc细胞活力：

m＝样品的od/对照样的od，式中，m为细胞活力。

参考图11和图12，对pc-3和lncapclonefgc细胞的抑制作用结果显示，具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物对pc-3的ic50为47.05μmol/l，说明了具有结构式(3)的脱氢枞胺衍生物对pc-3癌细胞具有良好的抗癌活性，而对lncapclonefgc细胞无作用。

表1脱氢枞胺衍生物的抗前列腺癌活性研究(ic50,μm)

上述对实施例的描述是为了便于本技术领域的普通技术人员能理解和应用本申请。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其它实施例中而不必付出创造性的劳动。因此，本申请不限于这里的实施例，本领域技术人员根据本申请披露的内容，在不脱离本申请范围和精神的情况下做出的改进和修改都本申请的范围之内。