本发明涉及食品中厌氧菌的检测领域，特别的涉及一种生禽中耐热厌氧菌的检测方法。
背景技术：
厌氧菌是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，耐热厌氧菌是一类含有芽孢，经一定温度加工后仍然存活，在无氧环境及适宜温度条件下孢子可活化为营养体从而导致食品腐败的细菌的总称；目前，对于耐热厌氧菌的检测没有相关研究及标准。
技术实现要素：
本发明目的是提供一种生禽中耐热厌氧菌的检测方法，使其可以方便准确的检测处耐热厌氧菌。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种生禽中耐热厌氧菌的检测方法，首先，用无菌棉签涂抹鸡的表面及胸腔内部，涂抹后的棉签放入无菌均质袋中，加入20ml灭菌的厌氧液体培养基中，用拍打机拍打1-2min，取10ml厌氧液体培养基于试管中，同时设置温度对照管，水浴温度控制在84±2℃，当对照管温度上升至84℃时，开始计时，水浴10min，每隔3min摇动试管一次，加热完毕，取出实验试管冷却，然后接种实验试管稀释液2ml于无菌平皿中，待厌氧琼脂培养基冷却至46℃时，及时将15-20ml厌氧琼脂培养基倾注平皿中，并转动平皿使其混合均匀，将平板翻转，在无氧、温度36℃±1℃是环境下，培养72h±2h。
所述厌氧液体培养基包括以下原料：蛋白胨10～20g/l、酵母粉1～10g/l、葡萄糖1～10g/l、大豆胨1～10g/l、牛肉粉1-10g/l、氯化钠1-10g/l、可溶性淀粉1-5g/l、半胱氨酸0.1-1.0g/l、磷酸二氢钾1-5g/l、维生素k10.001～0.01g/l、氯化血红素0.001-0.01g/l，余量为水。
所述厌氧琼脂培养基包括以下原料：蛋白胨10～20g/l、琼脂粉10-20g/l、酵母粉1～10g/l、葡萄糖1～10g/l、大豆胨1～10g/l、牛肉粉1-10g/l、氯化钠1-10g/l、可溶性淀粉1-5g/l、半胱氨酸0.1-1.0g/l、磷酸二氢钾1-5g/l、维生素k10.001～0.01g/l、氯化血红素0.001-0.01g/l，余量为水。
进一步的，所述厌氧液体培养基包括以下原料：蛋白胨12～17g/l、酵母粉8～10g/l、葡萄糖2～5g/l、大豆胨2～5g/l、牛肉粉4-7g/l、氯化钠4-7g/l、可溶性淀粉2-5g/l、半胱氨酸0.1-1.0g/l、磷酸二氢钾3-5g/l、维生素k10.001～0.003g/l、氯化血红素0.004-0.007g/l，余量为水。
进一步的，所述厌氧琼脂培养基包括以下原料：蛋白胨12～17g/l、琼脂粉12-17g/l、酵母粉8～10g/l、葡萄糖2～5g/l、大豆胨2～5g/l、牛肉粉4-7g/l、氯化钠4-7g/l、可溶性淀粉2-5g/l、半胱氨酸0.1-1.0g/l、磷酸二氢钾3-5g/l、维生素k10.001～0.003g/l、氯化血红素0.004-0.007g/l，余量为水。
本发明所述的鸡、鸭中耐热厌氧菌的检测方法与已有技术相比具有突出的实质性特点和显著进步：采用厌氧液体培养基增菌培养后，再倒入厌氧琼脂进行厌氧菌的纯培养可准确检测热加工中心温度条件下鸡、鸭表面耐热厌氧菌的数量。
本发明的培养基可以有效培养厌氧菌，培养基各组成成分可以分别为厌氧菌提供不同的养分：
胰蛋白胨：低分子肽，游离氨基酸，提供营养基础；
酵母粉：提供维生素和氨基酸；
葡萄糖：提供碳源；
大豆胨：营养强化剂，使休眠状态的细菌快速生长；
牛肉粉：提供营养物质和微量的金属元素；
维生素k1：提供k族元素，促进芽孢生长；
氯化钠：提供钠离子；
可溶性淀粉：提供碳源；
半胱氨酸：除氧剂、还原剂；
磷酸二氢钾：控制培养基的ph值，，同时提供钾离子；
氯化血红素：铁质强化剂；
琼脂粉：凝固剂。
具体实施方式
为了更好地理解与实施，下面结合实施例详细说明本发明。
实施例1
本发明提供了一种生禽中耐热厌氧菌的检测方法，首先，用无菌棉签涂抹鸡的表面及胸腔内部，共用5支棉签，鸡表面用3支，胸腔用2支，涂抹后的棉签放入无菌均质袋中，加入20ml灭菌的厌氧液体培养基中，用拍打机拍打1-2min，取10ml于试管中，同时设置温度对照管，水浴温度控制在84±2℃，当对照管温度上升至84℃时，开始计时，水浴10min，每隔3min摇动试管一次，加热完毕，取出实验试管冷却，然后接种实验试管稀释液2ml于无菌平皿中，待厌氧琼脂培养基冷却至46℃时，及时将15-20ml厌氧琼脂培养基倾注平皿中，并转动平皿使其混合均匀，将平板翻转，在无氧、温度36℃±1℃是环境下，培养72h±2h。
在厌氧培养箱或厌氧罐中加入厌氧产气袋，并加入厌氧指示剂，培养过程中要确保厌氧指示剂颜色显示为无氧条件。
所述厌氧液体培养基包括以下原料：蛋白胨15.0g/l、酵母粉5.0g/l、葡萄糖5.0g/l、大豆胨5.0g/l、牛肉粉5.0g/l、氯化钠5.0g/l、可溶性淀粉3.0g/l、半胱氨酸0.5g/l、磷酸二氢钾2.5g/l、维生素k10.001g/l、氯化血红素0.005g/l，余量为水。
所述厌氧琼脂培养基包括以下原料：蛋白胨15.0g/l、琼脂粉15.0g/l、酵母粉5.0g/l、葡萄糖5.0g/l、大豆胨5.0g/l、牛肉粉5.0g/l、氯化钠5.0g/l、可溶性淀粉3.0g/l、半胱氨酸0.5g/l、磷酸二氢钾2.5g/l、维生素k10.001g/l、氯化血红素0.005g/l，余量为水。
实施例2
本发明提供了一种生禽中耐热厌氧菌的检测方法，首先，用无菌棉签涂抹鸡的表面及胸腔内部，共用5支棉签，鸡表面用3支，胸腔用2支，涂抹后的棉签放入无菌均质袋中，加入20ml灭菌的厌氧液体培养基中，用拍打机拍打1-2min，取10ml厌氧液体培养基于试管中，同时设置温度对照管，水浴温度控制在84±2℃，当对照管温度上升至84℃时，开始计时，水浴10min，每隔3min摇动试管一次，加热完毕，取出实验试管冷却，然后接种实验试管稀释液2ml于无菌平皿中，待厌氧琼脂培养基冷却至46℃时，及时将15-20ml厌氧琼脂培养基倾注平皿中，并转动平皿使其混合均匀，将平板翻转，在无氧、温度36℃±1℃是环境下，培养72h±2h。
在厌氧培养箱或厌氧罐中加入厌氧产气袋，并加入厌氧指示剂，培养过程中要确保厌氧指示剂颜色显示为无氧条件。
所述厌氧液体培养基包括以下原料：蛋白胨15.0g/l、酵母粉5.0g/l、葡萄糖5.0g/l、大豆胨5.0g/l、牛肉粉5.0g/l、氯化钠5.0g/l、可溶性淀粉3.0g/l、半胱氨酸0.5g/l、磷酸二氢钾2.5g/l、维生素k10.001g/l、氯化血红素0.005g/l，余量为水；
所述厌氧琼脂培养基包括以下原料：蛋白胨15.0g/l、琼脂粉15.0g/l、酵母粉5.0g/l、葡萄糖5.0g/l、大豆胨5.0g/l、牛肉粉5.0g/l、氯化钠5.0g/l、可溶性淀粉3.0g/l、半胱氨酸0.5g/l、磷酸二氢钾2.5g/l、维生素k10.001g/l、氯化血红素0.005g/l，余量为水。
本发明未详细说明的内容均为现有技术，本领域技术人员可以从本实施例及现有技术获得启发，进行变形得到其它实施例。因此，本发明的保护范围应该根据权利要求的保护范围来确定。