用于进行细胞培养的方法与流程

文档序号:20955531发布日期:2020-06-02 20:23阅读:647来源:国知局
本发明涉及通过使用经3d打印方法制备的固体细胞培养基形式进行细胞培养的方法。细胞培养基可长时间用于细胞如哺乳动物细胞、植物细胞、细菌、酵母和霉菌的生长和培养。细胞培养基可包含复杂的成分混合物,有时包含多于100种的不同成分,取决于应支持其生长和/或靶向生理状态的生物体类型。哺乳动物、昆虫或植物细胞繁殖所需的细胞培养基一般地比支持细菌、酵母或真菌生长的培养基复杂得多。开发的第一细胞培养基由不确定的成分比如血浆、血清、胚胎提取物或其他非确定的生物提取物或蛋白胨组成。因此,随着化学成分确定的培养基的发展取得了重大进展。化学成分确定的培养基通常包括(但不仅限于)氨基酸、维生素、金属盐、抗氧化剂、螯合剂、生长因子、缓冲剂、激素以及本领域技术人员已知的许多其他物质。一些细胞培养基作为无菌水性液体提供。液体细胞培养基的缺点为其保存期减少以及运输和储存困难。结果,目前许多细胞培养基作为精细研磨的干粉混合物提供。它们被制备用于溶解于水和/或水溶液中,并且被设计以溶解状态(通常与其他补充剂一起)用于供给细胞大量的营养基础,以用于所述细胞生长和/或从所述细胞产生生物药物。理想地,将细胞培养基的所有成分以固态混合以在使用之前溶解或以即用型液态混合。但这通常是不可能的。制备和使用细胞培养基的限制因素为一些成分的稳定性不佳,所述成分倾向于例如在储存期间或被高压灭菌时降解和/或氧化。抗生素和维生素通常对热敏感,并且在高压灭菌之后需要添加。一些成分具有吸湿性,这通常导致干粉培养基结块,从而导致稳定性和/或其他质量问题,从而限制其工业应用。吸湿性化合物吸收的水可能导致微生物生长加快以及附近成分降解。另外,某些成分可能显示与其他成分的交叉反应性,从而导致不需要的副反应和培养基组成的变化。产生预混合培养基的另一限制为缺少灵活性。具有基本培养基组成,然后根据需要补充某些成分可能是有利的。在所有这些情况下,一般地存在以液态或干态存在的细胞培养基础培养基,其在使用之前或在细胞培养期间的某些时间补充有包含一种或多种成分的细胞培养基补充剂,所述成分也是细胞培养所需的,但是例如由于稳定性或策略原因不是所述基础培养基的部分。添加这些培养基补充剂通常复杂且耗时。尽管基础培养基的组成固定,并且使用之前可能必须进行的唯一步骤是将干燥培养基溶解于确定量的溶剂中,但添加补充剂需要付出更多努力。也可能必须将其溶解于一定量的液体中,并且技术人员需要注意应用时间以及所添加的量和组成合适和添加到基础培养基或细胞培养物中不会引起不需要的副作用。而且,这种培养基补充剂的制备通常不方便。培养基补充剂通常为具有不同溶解度的几种化合物的混合物,并且通常通过将一种或多种单独的溶液分配到玻璃小瓶中然后冻干来制备。在使用之前,将冻干的材料重构(或使其悬浮),并随后将溶液添加到已经灭菌的培养基或细胞培养物中。补充液可根据关键性在添加之前进行过滤灭菌。根据单个补充剂的溶解度,冷冻干燥所需的液体量可能很大。某些化合物可能不易于溶于冷冻干燥可接受的溶剂中(所需的溶剂可能是乙醇或dmso)。可在许多不同的补充剂混合物中使用相同化合物,但是用于制备的基础溶液对于每次制备运行必须新鲜产生。目前,一般地仅针对500ml培养基量生产补充小瓶,这非常不方便/不适合使用培养基蒸煮器(mediacooker)自动机进行更大规模(5-20l)培养基生产。因此,找到一种使培养基补充剂的使用和生产尽可能容易并且另一方面为用户提供所有必要的灵活性的方法将是有利的。已经发现可使用3d打印技术来生成固体培养基形式。进行3d打印时,可非常精确地限定固体细胞培养基形式的组成。然后,可通过将3d打印的固体形式(如片剂)与溶剂预混合,或通过以固体形式添加到液体细胞培养物中,易于将其应用于细胞培养中。甚至有可能影响某些成分的稳定性以及释放某些成分,以例如生成持续释放的培养基。因此,本发明涉及用于通过以下培养细胞的方法:a)通过使用3d打印技术生成固体细胞培养基形式b)将所述固体形式与液体和待培养的细胞混合c)通过温育步骤b)的混合物进行细胞培养固体细胞培养基形式包含至少一种细胞培养基成分。在一个优选的实施方案中,固体形式为片剂。在另一个实施方案中,固体形式包含至少两个具有不同组成的层。在一个实施方案中,固体形式包含具有不同组成的芯和壳。在另一个实施方案中,与固体形式的另一部分相比较,固体形式的一部分溶解较慢。溶解较慢的部分一般地为芯,该芯由于其组成而提供其成分的持续释放。在一个优选的实施方案中,固体形式包含4-甲基伞花基磷酸二钠(4-methylumbilliferyl-phosphatedisodium)、吖啶黄、两性霉素b、柠檬酸铁(iii)铵、亮绿、碳酸钙、cefiximide、头孢哌酮、头孢替坦、头孢磺啶、ceftazimide、头孢噻吩(cephalotin)、西曲溴铵、硫酸多粘菌素e、环己啶(cyclohexidine)、d-环丝氨酸、磷霉素、梭链孢酸钠(fucidin)、玉洁新(irgasan)、l-α-磷脂酰肌醇、莫匹罗星锂、萘啶酸、新生霉素,牛胆汁、土霉素、硫酸多粘菌素b、亚碲酸钾、连四硫酸钾、利福平、甲氧苄啶乳酸盐或万古霉素或其组合。在另一个优选的实施方案中,固体形式包含一种或多种氨基酸和/或维生素。优选的氨基酸为半胱氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸和甲硫氨酸。优选的维生素为核黄素、硫胺素、叶酸和维生素b12。在一个实施方案中,步骤b)通过首先将所述固体形式与液体混合并然后添加细胞来进行。在这种情况下,液体可能例如为水或水性缓冲液或任何类型的液体细胞培养基。在这个阶段,还可添加其他成分,例如在添加细胞之前添加胶凝剂。细胞一般地存在于液体细胞培养基中。在一个实施方案中,步骤b)通过将所述固体形式与已经包含细胞的液体混合来进行。在这种情况下,细胞一般地已经存在于液体细胞培养基中。固体形式的添加可直接在用细胞接种液体细胞培养基之后或在液体细胞培养基中培养细胞期间的任何时间进行。在一个实施方案中,细胞培养为补料分批细胞培养。在另一个实施方案中,细胞培养为用于检测和/或计数某些细胞的细胞培养。这种类型的细胞培养一般地用于微生物学应用。在一个优选的实施方案中,步骤a)中使用的3d打印技术为非接触式3d激光打印方法。在一个非常优选的实施方案中,步骤a)中使用的打印方法包括以下步骤:(a)使包含激光能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)位于对可被激光能量源(5)激活的激光束具有渗透性的板(4)和安装板(6)之间,由此含有至少一种细胞培养基成分的复合物的层(2)位于激光能量源(5)的对面并面向安装板(6);(b)降低安装板(6),以在包含含有细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)和安装板(6)之间形成空隙(8);(c)通过来自激光能量源(5)的激光束作用,使复合物(3)的含有细胞培养基成分的层(2)转移到安装板(6)上;(d)每当需要时重复进行步骤(a)、(b)和(c),以构建固体细胞培养基形式;(e)从安装板上移除固体细胞培养基形式。在另一个非常优选的实施方案中,步骤a)中使用的打印方法包括以下步骤:(a)使包含激光能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)位于对可被激光能量源(5)激活的激光束具有渗透性的板(4)和安装板(6)之间,所述安装板(6)包含至少一个可沿相对于安装板的垂直方向(z轴)移动的区域(7),由此含有至少一种细胞培养基成分的复合物的层(2)位于激光能量源(5)的对面并面向安装板(6);(b)相对于安装板(6)降低可移动区域(7),以在包含含有细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)与安装板(6)的可移动区域(7)之间形成空隙(8’);(c)通过来自激光能量源(5)的激光束作用,将复合物(3)的含有细胞培养基成分的层(2)转移到由可移动区域(7)相对于安装板(6)垂直降低形成的空隙(8’)中;(d)每当需要时重复进行步骤(a)、(b)和(c),以构建固体细胞培养基形式;(e)从安装板上移除固体细胞培养基形式。细胞培养为其中培养细胞的任何设置。细胞培养可在任何适合于细胞培养的容器(比如培养皿、接触板、瓶、管、孔、器皿、袋、烧瓶和/或罐)中进行。一般地,在使用之前对容器进行灭菌。细胞培养一般地通过在水性细胞培养基中,于适合于细胞的生长和/或维持的条件(比如合适的温度、重量克分子渗透压浓度、通气、搅动等)下温育细胞来进行,这些条件限制来自环境的外来微生物的污染。本领域技术人员知道用于细胞培养的合适的温育条件。本发明的细胞培养基(同义使用的:培养基)为维持和/或支持细胞体外生长和/或支持或维持特定生理状态的成分的任何混合物。其也适合于预富集培养物以及用作维持培养基。其可能包含不确定的成分,比如血浆、血清、胚胎提取物或其他非确定的生物提取物或蛋白胨。其也可能是化学成分确定的培养基。细胞培养基可包含维持和/或支持细胞体外生长所必需的所有成分,或者用于与单独添加的其他成分(培养基补充剂)组合或不与之组合添加选定成分。优选地,细胞培养基为培养基补充剂。细胞培养基的成分也称为细胞培养基成分。本发明的细胞培养基和方法被设计成适合于生长或维持/支持原核细胞(如细菌细胞)以及真核细胞(如酵母、真菌、藻类、植物、昆虫和/或哺乳动物细胞)和任选地古细菌的生长。原核生物和真核生物以及任选的古细菌以下也称为微生物或细胞。其生长应通过本发明的方法和培养基维持或支持的微生物一般地存在于:-药物相关性环境监测期间的环境样品-从药物相关性的原料、中间体和/或制成品获得的样品-医院检查期间的临床样品-兽医样品-用于检查饮用水和/或废水和/或游泳池水的水样-用于检查微生物污染的食品样品-化妆品样品-用于生物药物生产的细胞培养物例如,本发明的细胞培养基可支持真核生物和原核生物(如革兰氏阳性微生物和革兰氏阴性微生物,比如人类皮肤污染物、水污染物、酵母和霉菌)的生长。通过本发明的培养基和方法维持/支持/检测其生长的细胞的实例为:大肠杆菌(escherichiacoli)/stec/ehec、沙门氏菌属(salmonellaspp)、李斯特菌属(listeriaspp)、弯曲杆菌属(campylobacterspp)、芽孢杆菌属(bacillusspp)、阪崎克罗诺杆菌(cronobactersakazakii)、弧菌属(vibriospp)、耶尔森氏菌属(yersiniaspp)、军团菌属(legionellaspp)、分枝杆菌属(mycobacteriumspp)、梭菌属(clostridiumspp)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)、假丝酵母属(candidaspp)、曲霉属(aspergillusspp)。化学成分确定的细胞培养基为包含化学成分良好表征的“确定”原料的细胞培养基。这意味着培养基中使用的所有化学品的化学组成为已知的。化学成分确定的培养基不包含化学成分不确定的物质,如化学成分不确定的酵母、动物或植物组织;其不包含蛋白胨、饲养细胞、血清、不确定的提取物或消化物或者可能对培养基造成化学成分确定不清楚的蛋白和/或肽和/或水解产物的其他成分。在一些情况下,化学成分确定的培养基可包含化学成分确定的蛋白或肽——一个实例为胰岛素(参见以下其他)。粉末状细胞培养基或干粉培养基或脱水培养基为一般地由研磨过程或冻干过程产生的细胞培养基。这意味着粉末状细胞培养基一般地为细颗粒的颗粒培养基-而不是液体培养基。术语“干粉”可与术语“粉末”互换使用;然而,除非另外指明,否则本文所用的“干粉”仅指粒状材料的大体外观,并且不意指材料完全不含复合或聚结的溶剂。粉末状细胞培养基也可为粒状细胞培养基,例如通过辊压的干法制粒或通过流化床喷雾制粒的湿法制粒的。这种培养基也可通过喷雾干燥来制备。细胞培养基的固体形式也称为固体形式或固体细胞培养基形式,是由3d打印方法产生的包含至少一种细胞培养基成分的任何确定的三维物体。其为干燥固体,然而,除非另外指明,否则本文所用的“干燥固体”仅指材料的大体外观,并且不意指材料完全不含复合或聚结的溶剂。固体形式可为多孔或无孔的。其可具有适合应用要求的任何形状,例如圆形、椭圆形、棒状、鱼雷形等。固体细胞培养基形式的实例为片剂或丸剂。用于制备液体细胞培养基的溶剂(也称为液体)一般地为水(最特别地为蒸馏水和/或去离子水或纯净水或注射用水)或水性缓冲液。溶剂还可包含提供合适ph范围(一般地在ph1-ph10之间的范围)的盐水、可溶性酸或碱离子、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和醇或其他极性有机溶剂以及用于产生半固体培养基的胶凝剂。在添加细胞之前所溶解培养基的ph一般地在ph2-12之间,更优选地在ph4-10之间,甚至更优选地在ph6-8之间,和最优选地在ph6.5-7.5之间,并且理想地在ph7.0-7.5之间。包含维持和/或支持细胞体外生长所需的所有成分的细胞培养基一般地包含至少一种或多种糖类成分、一种或多种氨基酸、一种或多种维生素或维生素前体、一种或多种盐、一种或多种缓冲剂成分、一种或多种辅因子和一种或多种核酸成分(含氮碱基)或其衍生物。它也可包含化学成分确定的生化试剂,比如重组蛋白,例如重组胰岛素、rbsa、重组转铁蛋白、重组细胞因子等。培养基还可包含丙酮酸钠、高度纯化并因此化学成分良好确定的提取物、脂肪酸和/或脂肪酸衍生物和/或pluronic产品成分(基于环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物),特别是有时称为pluronicf68的poloxamer188或者kolliphorp188或lutrolf68和/或表面活性成分(比如化学制备的非离子表面活性剂)。合适的非离子表面活性剂的一个实例为终止于伯羟基的双官能嵌段共聚物表面活性剂,也称为泊洛沙姆,例如可从德国basf以商品名pluronic®获得。将这种pluronic产品成分在下文中简称为pluronic。也可添加螯合剂、激素和/或生长因子。其可包含的其他成分为乳酸、硫代乙醇酸、硫代硫酸盐、连四硫酸盐、二氨基丁烷、肌醇、磷脂酰胆碱(卵磷脂)、鞘磷脂、含铁化合物(包括具有铁硫簇的化合物)、尿酸、氨基甲酰磷酸盐、琥珀酸、硫氧还蛋白、乳清酸、磷脂酸、多胺(比如腐胺、亚精胺、精胺和/或尸胺)、甘油三酯、类固醇(包括(但不限于)胆固醇)、金属硫蛋白、氧气、甘油、尿素、α-酮戊二酸盐、氨、甘油磷酸酯、淀粉、糖原、乙醛酸盐、类异戊二烯、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、脂质(包括(但不限于)胶束中的脂质)、三丁酸甘油酯、丁酸甘油酯、胆酸、脱氧胆酸、多聚磷酸盐、乙酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐和/或草酸盐的纯化合物、盐、缀合物和/或衍生物。糖类成分为所有单糖或二糖,如葡萄糖、半乳糖、核糖或果糖(单糖的实例)或者蔗糖、乳糖或麦芽糖(二糖的实例),或其衍生物(如糖醇)。糖类成分也可为寡糖或多糖。本发明氨基酸的实例特别地为蛋白氨基酸(尤其是必需氨基酸亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸)以及非蛋白氨基酸(比如d-氨基酸)。酪氨酸意指l-或d-酪氨酸,优选地为l-酪氨酸。半胱氨酸意指l-或d-半胱氨酸,优选地为l-半胱氨酸。还包括氨基酸前体和类似物。维生素的实例为维生素a(视黄醇、视黄醛、各种维甲酸类和4种类胡萝卜素)、维生素b1(硫胺素)、维生素b2(核黄素)、维生素b3(烟酸、烟酰胺)、维生素b5(泛酸)、维生素b6(吡多醇、吡多胺、吡多醛)、维生素b7(生物素)、维生素b9(叶酸、亚叶酸)、维生素b12(氰钴胺素、羟钴胺素、甲钴胺素)、维生素c(抗坏血酸)(包括抗坏血酸的磷酸酯)、维生素d(麦角骨化醇、胆钙化醇)、维生素e(生育酚、生育三烯酚)和维生素k(叶绿醌、甲萘醌)。还包括维生素前体和类似物。盐的实例为包含无机离子(比如碳酸氢根、钙、氯、镁、磷酸根、钾和钠)或痕量元素(比如co、cu、f、fe、mn、mo、ni、se、si、ni、bi、v和zn)的成分。实例为五水合硫酸铜(ii)(cuso4.5h2o)、氯化钠(nacl)、氯化钙(cacl2.2h2o)、氯化钾(kcl)、硫酸铁(ii)、无水磷酸二氢钠(nah2po4)、无水硫酸镁(mgso4)、无水磷酸氢二钠(na2hpo4)、六水合氯化镁(mgcl2.6h2o)、七水合硫酸锌(znso4.7h2o)。缓冲剂的实例为碳酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐、hepes、pipes、aces、bes、tes、mops和tris。辅因子的实例为硫胺素、生物素、维生素c、骨化醇、胆碱、nad/nadp(还原的和/或氧化的)、钴胺素、维生素b12、黄素单核苷酸和衍生物、黄素腺嘌呤二核苷酸和衍生物、谷胱甘肽(还原的和/或氧化的和/或作为二聚体)、血红素、氯化血红素、血红蛋白、铁蛋白、核苷酸磷酸和/或衍生物(例如磷酸腺苷)、辅酶f420、s-腺苷甲硫氨酸、辅酶b、辅酶m、辅酶q、乙酰辅酶a、钼蝶呤、吡咯并喹啉醌、四氢生物蝶呤的化合物、盐、复合物和/或衍生物。本发明的核酸成分为核碱基(如胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、胸腺嘧啶、尿嘧啶、黄嘌呤和/或次黄嘌呤)、核苷(如胞苷、尿苷、腺苷、黄苷、肌苷、鸟苷和胸苷)以及核苷酸(比如腺苷一磷酸或腺苷二磷酸或腺苷三磷酸,包括(但不限于)其脱氧和/或磷酸衍生物和/或二聚体、三聚体和/或聚合物,如rna和/或dna)。可添加改善培养基的物理化学性质,如(但不限于)提高培养基和/或其一种或多种成分的澄清度和/或溶解度,而不会在使用浓度下显著负面影响细胞生长特性的成分。这种成分包括(但不限于)螯合剂(例如edta)、抗氧化剂、去污剂、表面活性剂、乳化剂(像聚山梨酯80)、中和剂(像聚山梨酯80)、胶束形成剂、胶束抑制剂和/或聚丙二醇、聚乙烯醇和/或羧甲基纤维素。培养基一般地含有碳水化合物,比如糖和/或糖混合物和/或糖二聚体和/或糖聚合物和/或其衍生物。一般地,葡萄糖和/或乳糖和/或半乳糖可为主要的碳水化合物糖成分。葡萄糖通常以在水性培养基溶液中0.001mm-250mm,更优选地1mm-100mm,甚至更优选地5mm-50mm的浓度包含在培养基中。一般地,培养基包含每升液体培养基10mg-3g范围内,优选地每升40mg-1g范围内的每种氨基酸。培养基一般地包含维生素。培养基中维生素的典型量在每升液体培养基5µg-10mg的范围内,优选地在每升50µg-6mg的范围内。一般地,培养基包含盐。一种类型的盐的量一般地在每升液体培养基2µg-5mg的范围内,优选地在每升10µg-1.5mg的范围内。具体的盐也可以高得多的量存在;nacl的浓度例如可高达每升液体培养基30g。培养基中包含的核酸的典型量在每升液体培养基0.5-10mg的范围内,优选地在每升1-5mg的范围内。培养基一般地含有所有蛋白原性氨基酸(和/或其衍生物和/或其缀合物和/或其二聚体(纯的和/或混合的))。还可添加其他确定的成分以辅助检测或鉴定微生物(像指示剂,例如ph指示剂)。本发明的培养基可进一步包含至少一种生色或生荧光底物。生荧光底物为复杂分子,其在与微生物合成的酶接触时被裂解并变为荧光的。通过使用以uv或可见光谱辐射照射生长培养基,可在视觉上和/或用分析仪器(如分光光度计)检测发出的荧光。生荧光底物的实例为荧光素衍生物(cfa、cfda)、甲基伞形酮衍生物或aldolstm(由biosynth公司开发)。生色底物为当其例如通过微生物的特定酶修饰时改变其颜色的底物。生色底物的实例为onpg(邻硝基苯基-β-d-吡喃半乳糖苷)或x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-d-吡喃半乳糖苷)。在这种情况下,某些目标微生物生长之后的培养基颜色将改变颜色并指示这种微生物。一般地合适的液体细胞培养基的典型组成为2-50g/l,更优选地为5-30g/l。具有胶凝剂的培养基由于胶凝剂一般地具有在1-50g/l之间,更优选地在2-30g/l之间的另外重量。培养基的重量克分子渗透压浓度一般地在50mosm-1000mosm之间,更优选地在150mosm-500mosm之间。培养基补充剂为细胞培养基,其在开始细胞培养之前添加到细胞培养基础培养基中或在细胞培养期间一次或多次添加到细胞培养物中。在细胞培养期间添加的培养基补充剂一般地以液体形式添加。这通常是由于粉末在没有搅拌或搅动的情况下不易于溶解这一事实。但是在细胞培养期间可能无法进行搅拌或搅动,因为这会引起细胞分散。已经发现本发明3d打印的固体细胞培养基形式适合于以固体形式加入到甚至运行着的细胞培养物中。可设计3d打印片剂的溶出特性,例如通过使用导致快速或缓慢溶出的某些添加剂和/或通过3d打印具有一定结构的固体形式,该结构也影响固体形式的溶出行为。培养基补充剂通常用于哺乳动物细胞培养(如cho细胞培养),以产生形成生物药物基础的蛋白。使用培养基补充剂进行该应用的优势包括定制细胞的生长条件,改善细胞活力和生长以及在更长时间内保持细胞更加健康。用于哺乳动物细胞培养的培养基补充剂的实例为2-巯基乙醇、包含脂质的补充剂、包含一种或多种氨基酸的补充剂、包含一种或多种维生素的补充剂、牛血清白蛋白、pluronicf68、胆固醇、丙酮酸钠、谷氨酰胺、转铁蛋白和和胰岛素。尤其优选的是包含一种或多种氨基酸(优选地如半胱氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸和/或甲硫氨酸)和/或一种或多种维生素(如核黄素、硫胺素、叶酸和/或维生素b12)的补充剂。用于例如微生物应用的补充剂为例如支持所有或选定细胞生长的补充剂、抗生素补充剂或生色补充剂。补充剂的实例为4-甲基伞花基磷酸二钠、吖啶黄、两性霉素b、柠檬酸铁(iii)铵、亮绿、碳酸钙、cefiximide、头孢哌酮、头孢替坦、头孢磺啶、ceftazimide、头孢噻吩、西曲溴铵、硫酸多粘菌素e、环己啶、d-环丝氨酸、磷霉素、梭链孢酸钠、玉洁新、l-α-磷脂酰肌醇、莫匹罗星锂、萘啶酸、新生霉素、牛胆汁、土霉素、硫酸多粘菌素b、亚碲酸钾、连四硫酸钾、利福平、甲氧苄啶乳酸盐或万古霉素或其组合,最优选的为吖啶黄、两性霉素b、头孢哌酮、头孢磺啶、ceftazimide、西曲溴铵、环己啶、萘啶酸、新生霉素、硫酸多粘菌素b、亚碲酸钾、甲氧苄啶乳酸盐或万古霉素或其组合。补充剂可以本发明的固体形式作为单一成分或者作为一种或多种上述补充剂成分的混合物,作为与以上列出的一种或多种其他细胞培养基成分或与认为适合于细胞培养的任何其他成分的混合物存在。3d打印也称为增材制造,是指用于创建三维实体物体的过程,其中在计算机控制下,基于数字文件形成材料层以创建所述物体。3d打印物体的创建使用所谓的增材过程来实现。在增材过程中,通过放置连续的材料层直至创建了物体来创建物体。这些层中的每一层均可看作是最终物体的切成薄片的水平截面。3d打印与减材制造相反,后者为用例如研磨机将金属或塑料块切下/挖空。用于3d打印的几种技术为本领域技术人员已知的。根据要打印的成分或成分的混合物,某些3d打印技术可能比其他技术更适合。3d打印领域的技术人员可为给定组合物选择合适的3d打印技术。合适的3d打印技术的实例为熔融沉积成型、polyjet3d打印、粘合剂喷射、vat聚合或选择性激光烧结。在熔融沉积成型(也称为熔融细丝(ff)制造和糊料挤出)中,将要进行3d打印的组合物的细丝熔融并通过喷嘴分配。将组合物(一般地为聚合物股)加热并通过小尖端(一般地为50-100)挤出,并然后在构建板上固化。ff技术具有显著的成本优势(典型的系统成本在£800-2000之间)、制造空心物体的能力以及打印一系列聚合物的实用性。打印机给料为一种挤出的聚合物细丝,一般地直径为1.75-3mm。ff3dp的主要益处之一是,理论上可将化合物掺入到聚合物细丝中,使得打印的剂型装载所述化合物。关于该技术的进一步细节为本领域技术人员已知的,并且可例如在goyanesetal.intjpharm.2014年12月10日;476(1-2):88-92中找到。在polyjet3d打印(也称为多喷头3d打印)中,构建和支撑材料的液滴进行选择性喷射和通过uv辐射固化。同时使用多个喷嘴可相对于其他技术(比如粉末床3d打印和熔融沉积成型)提高该过程的打印速度。快速打印速度与在短曝光时的快速聚合的组合导致快速产生片剂。关于该技术的进一步细节为本领域技术人员已知的,并且可例如在acosta-velezetal.bioengineering(basel).2017年3月;4(1):11中找到。在粘合剂喷射(也称为粉末床和喷墨头3d打印)中,选择性地沉积液体粘合剂以粘结粉末。物体通过使用计算机辅助设计(cad)软件确定,并以描绘要通过该过程打印的每一层的详细信息片段进行数字切片。在每层沉积之后,支撑粉末床的活塞被降低,使得随后的粉末层铺展开并选择性地粘结。该过程重复数次,堆叠固化材料层,直至产生预定的3d几何形状。然后去除未粘结的过量粉末,使最终产品暴露出来,其可经受进一步处理以调整其最终机械和物理性能。关于该技术的进一步细节为本领域技术人员已知的,并且可例如在acosta-vélezgf,wubm.3dpharming:directprintingofpersonalizedpharmaceuticaltablets.polymsci.2016,1:2中找到。在vat聚合(也称为立体光刻)中,通过聚合选择性地固化液体光敏聚合物。相干光源(通常为在uv范围内发射的激光)用于引发初始液态树脂的聚合和交联。因此,产生一片结构所需的时间取决于激光束扫描的速度以及照射面积。激光束的侧面位置通常由流电扫描仪内的一对反射镜控制。与大多数其他3d打印技术一样,该过程以逐层方式执行。切片信息以一组坐标的形式呈现,该坐标确定两个反射镜的倾斜角,反射镜沿平面引导激光束的位置。理论上,通过控制激光强度,依序照射层的每个像素这一事实将允许分别调整每个像素的曝光剂量。关于该技术的进一步细节为本领域技术人员已知的,并且可例如在samuelclarkligonetal.,chemrev.2017年8月9日;117(15):10212-10290中找到。在选择性激光烧结(也称为粉末床熔融)中,聚焦热能用于通过熔化来熔融材料。选择性激光烧结(sls)三维打印目前用于塑料、金属和陶瓷物体的工业制造。sls为一种通用且实用的3d打印技术,可应用于多个
技术领域
:。关于该技术的进一步细节为本领域技术人员已知的,并且可例如在finaetal.intjpharm.2017年8月30日;529(1-2):285-293中找到。已经发现,用于3d打印的某种方法尤其适合于产生细胞培养基的3d打印固体形式。该方法为非接触式激光打印方法,其允许以灵活的方式并且符合产生细胞培养基成分所需的高质量标准来产生固体形式。该方法使用包含激光能量吸收层和含有至少一种细胞培养基成分的层的复合层。通过随后借助激光束将成分包含层转移至彼此来构建固体细胞培养基形式。借助于各种波长的激光束,可逐层连续打印和组装。打印和组装通过作用于以下的激光能量来进行:a)激光能量吸收材料本身(由于碳化、起泡而产生热量增加和体积增加的本征反应),以及b)含有至少一种细胞培养基成分的培养基,其从复合层转移到装配平台上。如果合适能量和波长的激光束(例如nd:yag激光)击中激光能量吸收材料,并在其上涂覆含有细胞培养基成分的层,则将含有细胞培养基成分的层转移(打印)到可将它固定在其上(例如通过真空)的安装板。以这种方式重复进行,提供逐层组装成3d形式(例如片剂)。打印和组装实际所需的激光能量吸收材料的量取决于激光类型、能量输出、打印速度、激光能量吸收层的层厚度、膜材料厚度和含有细胞培养基成分的层的粘附力(以及转移的力)、组装步骤的停留时间。本发明涉及一种用于制造包含至少一种细胞培养基成分的固体3d打印细胞培养基形式的方法,其包括以下步骤:(a)使包含激光能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)位于对可被激光能量源(5)激活的激光束具有渗透性的板(4)和安装板(6)之间,由此含有至少一种细胞培养基成分的复合物的层(2)位于激光能量源(5)的对面并面向安装板(6);(b)降低安装板(6),以在包含含有细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)和安装板(6)之间形成空隙(8);(c)通过来自激光能量源(5)的激光束作用,将复合物(3)的含有细胞培养基成分的层(2)转移到安装板(6)上;(d)每当需要时重复进行步骤(a)、(b)和(c),以构建固体细胞培养基形式;(e)从安装板上移除固体细胞培养基形式。在本发明的一个备选实施方案中,安装板(6)包含可沿垂直方向移动的区域。在运行步骤(b)中的过程时,不会降低整个安装板,而是仅降低可移动区域。因此,本发明还涉及用于制造包含至少一种细胞培养基成分的固体细胞培养基形式的方法,其包括以下步骤:(a)使包含激光能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)位于对可被激光能量源(5)激活的激光束具有渗透性的板(4)和包含至少一个可沿相对于安装板的垂直方向(z轴)移动的区域(7)的安装板(6)之间,由此含有至少一种细胞培养基成分的复合物的层(2)位于激光能量源(5)的对面并面向安装板(6);(b)相对于安装板(6)降低可移动区域(7),以在包含含有细胞培养基成分的层(2)的复合层(3)和安装板(6)的可移动区域(7)之间形成空隙(8’);(c)通过来自激光能量源(5)的激光束作用,将复合物(3)的含有细胞培养基成分的层(2)转移至由可移动区域(7)相对于安装板(6)垂直降低形成的空隙(8’)中;(d)每当需要时重复进行步骤(a)、(b)和(c),以构建固体细胞培养基形式;(e)从安装板上移除固体细胞培养基形式。有利地,在移除固体细胞培养基形式之前,相对于安装板的上侧将安装板(6)中的可移动区域(7)升至相同水平。本文使用的术语“复合层”意指包含至少两个彼此附着的层的层,每个所述层包含具有不同功能和组成的不同材料。根据本发明,复合层至少包含激光能量吸收层和含有至少一种细胞培养基成分的层。可作为复合层的一部分存在的其他层的实例包括如在本专利申请中定义和/或示例的一个或多个分隔层和一个或多个粘附层。本文使用的术语“激光能量吸收层”意指含有如本专利申请定义和/或示例的激光能量吸收材料的层。激光能量吸收层可为一层,其中激光能量吸收材料嵌入和/或分布在整个层上,而且还为包含含有激光能量吸收材料的层(1’’)的层组装体,层(1’’)在一侧或两侧覆盖不含激光能量吸收材料的层(1’)和/或(1’’’)(支撑层)。对激光束具有渗透性的板在转移(步骤(c))期间相对于安装板处于固定位置,并且必须具有足够的机械强度,以在由激光束触发的复合层体积膨胀时提供沿相对于激光渗透性板表面的垂直方向转移(向下)含有细胞培养基成分的层至安装板所需的后动力。该板可由对激光束具有渗透性并且具有足够的机械强度以提供转移步骤所需的后动力的任何材料组成。合适的材料包括玻璃,比如石英玻璃或硼硅酸盐玻璃。本文使用的“一(a)”或“一个(an)”应意指一个或多个。当连同词语“包含”一起使用时,本文使用的词语“一(a)”或“一个(an)”意指一个或多于一个。本文使用的“另一个”意指至少第二或更多个。此外,除非上下文另外要求,否则单数术语包括复数并且复数术语包括单数。本文使用的“约”是指数值,包括例如整数、分数和百分数,无论是否明确指明。术语“约”通常是指本领域普通技术人员将认为等同于所述值(例如具有相同功能或结果)的数值范围(例如所述值的+/-1-3%)。在一些情况下,术语“约”可包括四舍五入为最接近的有效数字的数值。通过简单地控制激光束的照射区域,可易于确定固体细胞培养基形式的形状。照射区域,即被激光束激活的复合物区域,限定通过激光激活而转移的含有细胞培养基成分的层的区域。通过控制照射区域的形状,可转移任何期望的形状(比如矩形、方形、十字形、圆形或椭圆形)的含有细胞培养基成分的层。通过组装不同形状的含有细胞培养基成分的层,可易于获得任何三维形状的固体形式。本发明的方法关于固体形式的形状提供广泛的灵活性。有利地,固体形式的形状可易于适合于各种特定需求,并且另外,允许通过常规片剂制造工艺无法获得的新形状。本发明的方法使用含有细胞培养基成分的层。由于细胞培养基成分嵌入该层中,因此不需要处理纯的细胞培养基成分,使得避免与这种处理相关的问题。含有细胞培养基成分的层可简单地彼此附着,使得避免工作环境的粉尘形成和污染,工作环境会需要防护措施,比如封闭式外壳和广泛的清洁操作。进一步地,可以简单的方式制造具有不同剂量和/或不同细胞培养基成分的固体形式。例如,具有不同剂量但具有相同细胞培养基成分的固体形式可通过简单地控制彼此附着的含有细胞培养基成分的层的数量来制造。具有相同细胞培养基成分但具有不同释放特性的固体形式,比如其中一部分细胞培养基成分以立即释放方式释放而另一部分以持续释放方式释放的给予形式,可通过组装具有立即释放特性的含有细胞培养基成分的层和具有持续释放特性的含有细胞培养基成分的层来制造。可以类似的方式,通过组装含有细胞培养基成分的层,其中不同的细胞培养基成分作为混合物存在于含有细胞培养基成分的层中和/或其中不同的细胞培养基成分存在于不同的含有细胞培养基成分的层中,来提供具有不同细胞培养基成分的固体形式。如果细胞培养基成分彼此不相容,则后者为优选的。从具有特定细胞培养基成分的固体形式的制造向具有不同细胞培养基成分的不同固体形式的转变可通过简单地将包含含有一种细胞培养基成分的层的复合层改变为包含另一种细胞培养基成分的另一种复合层而无需另外的设置时间来进行。固体形式,其中一种形式含有具有不同释放特性(比如立即释放加持续释放)的相同细胞培养基成分,或者其中存在彼此不相容的不同细胞培养基成分,也可使用本发明的方法,通过随后在该固体形式的制造中使用不同的复合层(具有不同的细胞培养基成分和/或细胞培养基成分释放特性)而易于制造。本发明的方法提供最大的灵活性,并且使得无需费时的清洁操作就能够进行快速简便操作,并且因此也适合于制造适合于以分散方式用于特定目的的特定组成的固体细胞培养基形式。根据本发明的优选实施方案,在组装期间通过真空将固体形式固定在安装板或可移动区域上。因此,本发明还涉及一种方法,其特征在于在其组装期间,经真空卡盘(9)施加真空以将固体形式保持在安装板(6)或其可移动区域(7)上。在本发明方法中使用的复合层可为片材或条带。条带为优选的,因为其可易于处理和因为其允许通过使用辊对辊传送机构易于定位(步骤(a))。因此,本发明还涉及一种方法,其特征在于复合层(3)作为条带(3’)提供,并且步骤(a)中复合层(3)的定位通过辊(11)对辊(11’)传送来实现。有利地,复合层和用于其传送的辊(11)对辊(11’)机构被集成于卡带盒(16)中,这允许易于处理复合层及其在本发明方法中的使用。因此,本发明还涉及一种具有辊(11)对辊(11’)传送机构的卡带盒(16),其中这种辊(11)对辊(11’)传送机构配备有复合层(3)。优选地,卡带盒包含定位辊(4’)、(4’’),其可沿垂直方向(z轴)上下移动。这允许根据其操作状态将复合层(3)压/按压到安装板(6)上。在本发明的另一优选实施方案中,安装板被保护带覆盖,该保护带在完成固体形式的制造之后沿安装板移动(x轴)以提供用于组装新固体形式的空位置。因此,本发明进一步涉及一种方法,其特征在于安装板被保护带(10)覆盖,并且这种保护带(10)在完成固体形式之后沿安装板(6)移动(x轴)以提供用于组装新固体形式的空位置。有利地,当制造过程从一种固体形式变为另一种含有不同细胞培养基成分和/或助剂的固体形式时,可易于将保护带替换(更换)成新的,以避免材料,尤其是细胞培养基成分的交叉污染。保护带可由可制成条带,并且提供保护安装板免受来自复合层,尤其是含有细胞培养基成分的层的材料污染的任何材料制成。优选地,保护材料对空气具有渗透性,使得可通过经其下面的卡盘施加真空来固定置于其上的固体形式。用于保护带的合适材料为白纸。如果如上所述使用保护带,则当将本发明的方法从一种固体形式的制造转换为含有不同细胞培养基成分的另一种固体形式时不需要清洁操作。根据本发明的优选实施方案,通过使用辊对辊传送机构来移动保护带。因此,本发明还涉及本发明的方法,其特征在于保护带(10)通过辊(12)对辊(12’)传送来移动。本发明的方法需要包含激光能量吸收层和含有至少一种细胞培养基成分的层的复合层。因此,本发明还涉及可用于本发明方法的包含激光能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的复合层。根据本发明的实施方案,复合层的激光能量吸收层包含激光能量吸收材料,该材料在一侧或两侧覆盖塑料材料的支撑层。塑料材料将激光能量吸收材料与环境和含有细胞培养基成分的层隔开,并且防止尤其是成分包含层和组装的固体细胞培养基形式的污染。因此,本发明进一步涉及一种复合层,其特征在于激光能量吸收层(1)包含含有激光能量吸收材料的层(1’’),层(1’’)在一侧或两侧覆盖塑料材料的支撑层(1’)、(1’’’)。在这种实施方案中,支撑层(1’)和/或(1’’’)和含有激光能量吸收材料的层(1’’)作为一个单元彼此粘合在一起。支撑层可由塑料材料制成,其中层(1’)的材料和/或厚度可与层(1’’’)相同或不同。在本发明的一个备选实施方案中,激光能量吸收材料嵌入塑料材料中并分布在整个能量吸收层上。通过将激光能量吸收材料嵌入塑料材料中,可防止环境和细胞培养基成分层被其污染。因此,本发明进一步涉及一种复合层,其特征在于能量吸收层(1)由一层组成,其中激光能量吸收材料分布在塑料材料内。适合于存在于激光能量吸收层中的激光能量吸收材料的覆盖和/或嵌入的塑料材料包括来自以下的组的聚合物:聚乙烯(pe)、聚丙烯(pp)、聚氯乙烯(pvc)、聚苯乙烯(ps)、聚四氟乙烯(ptfe)、聚甲基丙烯酸甲酯(pmma)、聚丙烯腈(pan)、聚丙烯酰胺(paa)、聚酰胺(pa)、芳酰胺(聚芳酰胺)(ppta,kevlar®,twaron®)、聚对苯二甲酰间苯二胺(pmpi,nomex®,teijinconex®)、聚酮类如聚醚酮(pek)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(pet,pete)、聚碳酸酯(pc)、聚乙二醇(peg)、聚氨基甲酸酯(pu)、kaptonk和kaptonhn(聚(4,4’-氧二亚苯基-均苯四甲酰亚胺(pyromellitimide)))、聚(有机)硅氧烷、三聚氰胺树脂(mf)。因此,本发明还涉及一种复合层,其特征在于塑料材料选自以下的聚合物:聚乙烯(pe)、聚丙烯(pp)、聚氯乙烯(pvc)、聚苯乙烯(ps)、聚四氟乙烯(ptfe)、聚甲基丙烯酸甲酯(pmma)、聚丙烯腈(pan)、聚丙烯酰胺(paa)、聚酰胺(pa)、芳酰胺(聚芳酰胺)(ppta,kevlar®,twaron®)、聚对苯二甲酰间苯二胺(pmpi,nomex®,teijinconex®)、聚酮类如聚醚酮(pek)、聚对苯二甲酸乙二醇酯(pet,pete)、聚碳酸酯(pc)、聚乙二醇(peg)、聚氨基甲酸酯(pu)、kaptonk和kaptonhn(聚(4,4’-氧二亚苯基-均苯四甲酰亚胺))、聚(有机)硅氧烷、三聚氰胺树脂(mf)。可使用本领域已知的方法,比如通过聚合物挤出、铸造、压延和吹塑将塑料材料加工成层。使用这种方法,可制备没有激光能量吸收材料的层(支撑层)以及含有激光能量吸收材料的层并使其可用。本文使用的术语“激光能量吸收材料”意指吸收激光并一定程度上将其转化成热量的任何材料。理论上,在本发明中可使用任何激光能量吸收材料。尤其适合于本发明的激光能量吸收材料为氧化铟、氧化铟锡(ito)、氧化锑锡(ato)、氧化锑、氧化锡、氧化锌、氧化铝锌(azo)、金属氧化物的混合物、硫化锌、硫化锡、炭黑、石墨、金属氧化物、硅酸盐、金属氧化物涂覆的云母或sio2薄片、导电颜料、硫化物、磷酸盐、bioci、蒽、苝、二萘嵌苯类(rylene)、季戊四醇或其两种或更多种材料的混合物。因此,本发明还涉及一种复合层,其特征在于激光能量吸收材料为氧化铟、氧化铟锡(ito)、氧化锑锡(ato)、氧化锑、氧化锡、氧化锌、氧化铝锌(azo)、金属氧化物的混合物、硫化锌、硫化锡、炭黑、石墨、金属氧化物、硅酸盐、金属氧化物涂覆的云母或sio2薄片、导电颜料、硫化物、磷酸盐、bioci、蒽、苝、二萘嵌苯类、季戊四醇或其两种或更多种材料的混合物。激光能量吸收材料可以任何粒度存在于激光能量吸收层中,所述粒度是可加工的并且提供适合于运行该方法的热量产生和分布。根据本发明的优选实施方案,复合层的特征在于存在于能量吸收层中的激光能量吸收材料具有约50nm-约150nm的平均粒径。激光能量吸收材料可以足以提供适合于运行该方法的热量的任何量存在于激光能量吸收层中。根据本发明的优选实施方案,复合层的特征在于激光能量吸收层(1)按重量计占激光能量吸收材料的0.01-20%。本发明的方法基于由于激光束的激活所致的激光能量吸收层的体积膨胀和激光能量吸收材料的热量产生,这两者均导致含有细胞培养基成分的层转移到安装板或安装板的可移动区域。体积膨胀由存在于激光能量吸收层中的塑料材料起泡以及随后冷却时产生的泡沫的冻结引起,起泡由塑料材料中热量和气体形成,尤其是碳化(co2形成)引起。乙烯/丙烯酸乙烯酯共聚物、环氧树脂、聚酯、聚异丁烯、聚酰胺、聚苯乙烯、丙烯酸类聚合物、聚酰胺、聚酰亚胺、三聚氰胺、氨基甲酸酯、苯并鸟嘌呤和酚醛树脂、硅酮树脂、微粉纤维素、氟化聚合物(尤其是ptfe、pvdf)和微粉蜡作为填充剂或其混合物(其分解并且由于起泡、气体释放和冻结而增加体积)的存在,可促进体积增加。因此,本发明进一步涉及一种复合层,其特征在于激光能量吸收层(1)含有乙烯/丙烯酸乙烯酯共聚物、环氧树脂、聚酯、聚异丁烯、聚酰胺、聚苯乙烯、丙烯酸类聚合物、聚酰胺、聚酰亚胺、三聚氰胺、氨基甲酸酯、苯并鸟嘌呤和酚醛树脂、硅酮树脂、微粉纤维素、氟化聚合物(尤其是ptfe、pvdf)和微粉蜡作为填充剂或其混合物。将用于促进体积增加的聚合物混合到用于嵌入激光能量吸收材料的塑料材料中。其可例如通过熔融挤出溶解于塑料材料中,以与用于嵌入激光能量吸收材料的塑料材料形成均质材料,或者作为颗粒混合并保持在这种塑料材料中。如果作为颗粒混合并保持,则用于促进体积增加的聚合物优选地具有约10nm-约20μm范围内的平均粒度。尽管存在于能量吸收层中的塑料材料将激光能量吸收材料与含有细胞培养基成分的层隔开和/或嵌入激光能量吸收材料,并防止其被激光能量吸收材料污染,但还是可期望使能量吸收层与含有细胞培养基成分的层进一步分隔。除了另外防止含有细胞培养基成分的层被污染之外,分隔能量吸收层与含有细胞培养基成分的层的层可改善其用于本发明方法所需的复合层的性能。例如,其可改善在转移步骤(步骤(c))时含有细胞培养基成分的层与复合层的分离特性。因此,本发明还涉及一种复合层,其特征在于其包含位于能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)之间的分隔层(13)。分隔层可由可被加工成层并且可被附着于激光能量吸收层和含有细胞培养基成分的层并且提供所需的特性比如合适的分离特性的任何材料制成。合适的材料包括糖,如二糖比如蔗糖或乳糖、多糖比如淀粉、纤维素或其衍生物、改性纤维素(比如微晶纤维素和纤维素醚,比如羟丙基纤维素(hpc)、交联羧甲基纤维素钠);糖醇(比如木糖醇、山梨醇或麦芽糖醇)、葡萄糖;蛋白(比如明胶);合成聚合物(比如聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、交联聚乙烯基n-吡咯烷酮或聚乙二醇(peg));泊洛沙姆;黄蓍胶;阿拉伯胶;低熔点蜡(比如蜂蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、微晶蜡(ceresinewax)、微晶蜡(microcrystallinewax)、地蜡、硬脂酸镁、石蜡)及其组合,优选的为二糖(比如蔗糖或乳糖)、多糖(比如淀粉、纤维素)、糖醇(比如木糖醇、山梨醇或麦芽糖醇)、阿拉伯胶、石蜡及其组合,尤其优选的为糖醇(如比木糖醇、山梨醇或麦芽糖醇)和石蜡;及其组合。因此,本发明还涉及一种复合层,其特征在于分隔层(13)至少包含糖,其可为二糖(比如蔗糖或乳糖)、多糖(比如淀粉、纤维素或其衍生物)、改性纤维素(比如微晶纤维素或纤维素醚,比如羟丙基纤维素(hpc)、交联羧甲基纤维素钠)、糖醇(比如木糖醇、山梨醇或麦芽糖醇)、葡萄糖;蛋白(比如明胶);合成聚合物(比如聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、交联聚乙烯基n-吡咯烷酮或聚乙二醇(peg));泊洛沙姆;黄蓍胶;阿拉伯胶;低熔点蜡比如蜂蜡、小烛树蜡、巴西棕榈蜡、微晶蜡(ceresinewax)、微晶蜡(microcrystallinewax)、硬脂酸镁、地蜡或石蜡;及其组合。分隔层的厚度可为2μm-150μm,优选地为5μm-100μm,更优选地为10μm-30μm,和最优选地为10μm-20μm,尤其是为约17μm。取决于存在于含有细胞培养基成分的层中的细胞培养基成分的要求和固体细胞培养基形式的期望的释放特性,在一些情况下可能难以提供具有在本发明方法的组装期间使含有细胞培养基成分的层彼此足够附着所需的理化特性,尤其是粘附特性的含有细胞培养基成分的层。在这种情况下,可将具有粘附特性的额外层,即粘附层,置于含有细胞培养基成分的层上,位于复合物的能量吸收层外部并与之相对。因此,本发明还涉及一种复合层,其特征在于其包含粘附层(14),后者位于能量吸收层(1)的外部并与之相对。在转移步骤(步骤(c))中,使粘附层与激光能量吸收层分离,并与含有细胞培养基成分的层一起转移到安装板或其上的可移动区域。可用于粘附层的材料可为对细胞培养没有不利影响并且提供所需粘附特性的任何材料。可用于粘附层的材料包括甲基纤维素、液体葡萄糖、黄蓍胶、乙基纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、淀粉糊、羟丙基纤维素、预胶凝淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇(peg)及其组合。优选的为甲基纤维素、液体葡萄糖、黄蓍胶、明胶、淀粉糊、羧甲基纤维素钠、海藻酸、纤维素、阿拉伯胶及其组合,尤其优选的为明胶、淀粉糊和海藻酸。因此,本发明进一步涉及一种复合层,其特征在于粘附层(14)包含甲基纤维素、液体葡萄糖、黄蓍胶、乙基纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、淀粉糊、羟丙基纤维素、预胶凝淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇(peg)或其组合。本文使用的术语“含有至少一种细胞培养基成分的层”和“含有细胞培养基成分的层”同义使用,并且两者均意指含有至少一种细胞培养基成分的层。除了细胞培养基成分之外,层中可存在合适的助剂,以提供用于细胞培养基成分分布的基质和提供用于制造含有细胞培养基成分的层、其在本发明方法中使用以及在固体形式为基础培养基的情况下将固体形式应用于溶剂、在固体形式为培养基补充剂的情况下应用液体细胞培养基础培养基或细胞培养物之后细胞培养基成分的稳定性和释放特性所需的骨架和特性。含有至少一种细胞培养基成分的层通常为连续的不间断层。然而,备选地,含有至少一种细胞培养基成分的层也包含以下层,其中该层分成许多具有确定几何形状(2’)、(19e)-(19i)、(20a)-(20h)(例如正方形、矩形、六边形等)的块,其彼此被另一层(比如激光能量吸收层(1)或支撑层(1’’’))分隔。可通过首先提供具有刻制腔体(1’’’’)(具有确定的几何形状以形成块的几何形状)的激光能量吸收层(1)并且随后例如通过使用刮刀用构成含有细胞培养基成分的层的材料填充能量吸收层中的腔体来提供含有细胞培养基成分的层,其中该层分成许多块。含有细胞培养基成分的层的厚度可为5μm-1000μm,优选地为10μm-500μm,更优选地为30μm-200μm,和最优选地为50μm-100μm,尤其是为约70μm。如果在本发明的方法中使用包含形成为连续的不间断层的含有细胞培养基成分的层(2)的复合层(3),则制造由连续的均匀物体组成的固体形式。如果使用复合层,其中含有至少一种细胞培养基成分的层分成许多块,则可制造分别如图22和23所示具有封闭结构或具有开放的多孔结构的固体形式。细胞培养基成分从固体形式的溶出和释放取决于其几何形状以及应用之后暴露于环境的表面。因此,通过使用复合层(其包含含有至少一种细胞培养基成分的层,该层分成许多块)和通过在将含有细胞培养基成分的层组装成固体形式期间变化其排列来改变在其应用之后暴露于溶解的固体形式的形状和表面积,提供使固体形式的溶出/释放特性适应需要的良好机会。因此,本发明还涉及一种复合层,其特征在于含有至少一种细胞培养基成分的该层分成许多块(2’)。本文使用的术语“许多”或“多个”意指每cm2至少9个块。根据合适的实施方案,将含有至少一种细胞培养基成分的层分成每cm210-20、20-1000或1000-10000个块。根据本发明另一适当的实施方案,含有至少一种细胞培养基成分的分成许多块(2’)的层图案化为正方形和/或矩形和/或圆形和/或椭圆形。根据本发明另一适当的实施方案,含有至少一种细胞培养基成分的分成许多块(2’)的层由边长10μm至多达2500μm的许多正方形或直径为10µm至多达3000µm的许多圆点和与相邻正方形10µm至多达2000µm的间隙组成。本发明的方法也可用于制造固体细胞培养基形式,其包含含有细胞培养基成分的层,该层被不含细胞培养基成分的层包围,从而形成芯-壳结构。在这种实施方案中,含有细胞培养基成分的层分成许多块(2’),并且不含细胞培养基成分的层也分成许多块(2’’)。在备选的实施方案中,壳含有不同量(较高剂量)的相同细胞培养基成分(其由于在液体细胞培养基中建立初始高水平的(外部)壳首先溶解而在固体形式给予之后快速释放,之后从芯释放相同的细胞培养基成分)或不同的细胞培养基成分(其由于(外部)壳首先溶解而在固体形式给予之后首先释放,并且之后释放芯中存在的(不同)细胞培养基成分,从而实现不同细胞培养基成分的随后和时间控制释放)。具有这种芯壳结构的固体形式的实施方案如图30-33所示。芯-壳结构的细胞培养基成分的溶出和释放曲线可根据需要在宽的范围内变化。例如,可通过仔细选择构成系统壳的材料(例如肠溶衣(比如eudragitl100-55或聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯)或非肠溶衣(比如羟乙基纤维素))和/或壳材料的厚度来进行溶出曲线的调节。本发明的方法还允许制造更复杂的系统,比如具有多于一个壳的芯-壳结构,其中芯-壳结构被彼此附着的一个或多个另外的壳包围。根据需要,内部壳以及外部壳可含有一种或多种细胞培养基成分,籍此细胞培养基成分可以相同或不同。通过应用该原理,可提供各种固体形式,根据特定需要以预定方式从中释放一种或多种细胞培养基成分。这尤其适合于补料分批细胞培养,其中目前复杂的补料策略需要在方法期间的时间点添加不同的培养基补充剂(在补料分批中也称为补料培养基)。这可通过使用本发明的固体形式来简化,该固体形式具有例如导致所选细胞培养基成分的直接和/或持续释放的芯-壳结构。本发明的方法还允许将通信装置精确地置于固体形式内。可在固体细胞培养基形式中使用通信装置,以提供有关细胞培养中复合层的状况的信息。例如,可给出关于复合层崩解和细胞培养基成分释放的时间的信息。有了该信息,可进行进一步优化例如补料策略和要在分批补料过程中添加的固体形式的组成。可以固体形式放置的通信装置的实例为rfid(射频识别)标签、电磁信号发出装置、磁性装置、红外发射装置或超声装置。优选地,通信装置为rfid标签。根据要提供的信息,可将通信装置置于固体形式的每一层的任何位置。在以下中显示一些实施方案,其中一个或多个rfid标签(2’’’)置于作为芯壳系统布置的固体形式中(图31-33)。当然,rfid标签也可置于相应布置内的任何其他位置。可用作含有细胞培养基成分的层的材料的合适助剂为本领域已知的所有助剂,其提供必要的结构和特性,并且适合作为用于例如压片的助剂。这种助剂包括例如基质构建聚合物(比如聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素)、崩解剂(比如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂(比如苯扎氯铵或西曲溴铵)、粘着剂(比如聚甲基丙烯酸酯)、增粘剂(比如聚β-蒎烯)等。举例来说,用于含有细胞培养基成分的层的材料可为细胞培养基成分的高浓缩混合物、来自以下列表的粘合剂、填充剂和粘着剂的混合物:talkum、碳酸镁、甲基纤维素、液体葡萄糖、黄蓍胶、乙基纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、淀粉糊、羟丙基纤维素、预胶凝淀粉、羧甲基纤维素钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇(peg)、泊洛沙姆。在一个优选的实施方案中,由于细胞培养基成分具有所有必要的特性,因此不需要另外的助剂。例如,如果细胞培养基成分之一为泊洛沙姆,就是这种情况。根据本发明的一个适当的实施方案,存在于复合层中的含有至少一种细胞培养基成分的层包含按重量计0.1%-100%的量的细胞培养基成分。优选地,固体形式包含尽可能少的助剂或不包含助剂。根据本发明的一个适当的实施方案,存在于复合层中的含有至少一种细胞培养基成分的层包含不超过25%的水分。如上所述,复合层优选地以条带的形式用于本发明的方法中,条带可在使用辊对辊传送系统的方法中易于处理。为了在该方法中改善和简化复合层的处理,可以重卷形式在辊式分配器中提供复合层。如果在分配器中重卷,则保护复合层免受物理损坏和其他有害环境影响,并且其可易于运输和储存。当需要在方法中使用复合层时,其可以易于获得,例如通过使用将分配器与制造设备连接起来的简单对接机构。因此,本发明还涉及本发明的复合层,其特征在于其以重卷形式提供在辊式分配器(11’’)中。可使用多个工艺步骤来制备复合层(3),所述工艺步骤包括混合和涂覆步骤,并且包括本领域已知的各种技术,比如挤出和/或层压技术。例如,可通过使用适当的研磨机(比如高速混合机或辊式混合机)进行包含在一层中的材料的混合(例如激光能量吸收材料和塑料材料或者激光能量吸收材料、塑料材料和构成激光能量吸收层的在通过激光束激活时促进体积增加的聚合物或含有细胞培养基成分的层、粘附层或分隔层中含有的成分)。理论上,通过将一层连续地施加于另一层上直至形成最终复合物,来制备复合层。例如,通过将含有细胞培养基成分的层(1)施加于激光能量吸收层(2)上来制造图4或5的复合层,和通过首先将分隔层(13)施加于激光能量吸收层(2)上,然后将含有细胞培养基成分的层(1)施加于分隔层上,并最后施加粘附层(14)来制备图8的复合层。可用于将一层施加于另一层的技术可为本领域已知的任何方法,比如使用刮刀的涂覆技术、熔融挤出涂覆和各种印刷技术,例如网目印刷、模版印刷、丝网印刷、移印、邮票印刷、凹版印刷、微型喷墨印刷和喷墨印刷。根据技术的不同,可能还需要其他步骤,比如用刮刀涂覆之后的干燥步骤或熔融挤出之后的冷却步骤。网目印刷、丝网印刷、移印、邮票印刷、凹版印刷、微型喷墨印刷和喷墨印刷为用于将一层施加于另一层以形成复合层(3)的优选方法。通常,复合物的制造从提供激光能量吸收层(1)开始。这种激光能量吸收层可通过在塑料材料中均匀分布激光能量吸收材料(例如炭黑、ato)并随后通过挤出(例如吹膜挤出)进行膜制造来制备。如果激光能量吸收层(1)含有一个或两个支撑层(1’)和/或(1’’),则可通过层压,例如通过使用辊式层压机将这些层施加于其上。在一个实例中,复合层(3)的制备包括多个工艺步骤,这些步骤从用于激光能量吸收材料的混合过程开始。例如,用高速溶解器和/或三辊式研磨机,在所选原料的混合步骤期间实现均匀分布。用刮刀技术或印刷工艺将激光能量吸收层以确定厚度涂覆到聚合物膜上是可行的。将对流烘箱或带式炉用于干燥涂覆的基材。由于第二聚合物膜层压在上面,干燥的激光能量吸收层将被完全包封。用高速溶解器和三辊式研磨机将另一混合步骤用于细胞培养基成分媒介物。用印刷工艺(例如网目印刷或模版印刷)将细胞培养基成分层以确定的厚度和图案涂覆到复合层(1)上是可行的。本发明以附图进行说明。图1a-1d显示使用复合层(3)的权利要求1的本发明方法的配置和工艺步骤(a)、(b)和(c)。该配置不同于图2的配置,因为其不包含安装板(6)的可移动区域。而是整个安装板可向下移动(沿z轴)。进一步地,其包括保护带(10),后者布置在复合层(3)的下方,并且可通过辊对辊系统(12)、(12’)移动。使复合层(3)位于安装板(6)上,并用玻璃板(4)固定于安装板(6)上面(步骤(a))。向下(z方向)移动安装板(6)以提供与含有细胞培养基成分的层具有相同厚度的间隙(8)(图1a)。程控激光器(5)激活将含有至少一种细胞培养基成分的层(2)转移到安装板(6)上的转移步骤(步骤(c))(图1b)。在将含有至少一种细胞培养基成分的第一层(2)转移到安装板(6)上之后,将复合层(3)沿x轴和/或y轴移动以在安装板(6)上的(第一)层上面提供新的含有细胞培养基成分的层并重复步骤(b)和(c)(图1c和d)。每当需要时重复使新的包含细胞培养基成分的复合层(3)位于安装板上的组装层上面(步骤(a))以及步骤(b)和(c),以组装固体形式。可通过在真空卡盘(9)上施加真空来支持一个或多个含有细胞培养基成分的层在安装板(6)上的粘附。在完成固体形式组装之后,可通过经激活辊对辊系统(12)、(12’)沿x轴移动保护带(10)来移动它,并将其移除(步骤(e))。图2a-2d显示使用复合层(3)的权利要求2的本发明方法的配置和步骤(a)、(b)和(c)。使复合层(3)位于安装板(6)的可移动区域(7)上,并用玻璃板(4)固定于上面(步骤(a))。向下移动安装板(6)的区域,以提供与含有细胞培养基成分的层具有相同厚度的间隙(8’)(步骤(b))(图2a)。程控激光器(5)激活将含有至少一种细胞培养基成分的层(2)转移到安装板(6)的可移动区域(7)上的转移步骤(步骤(c))(图2b)。在将含有至少一种细胞培养基成分的第一层(2)转移到安装板(6)的可移动区域(7)上之后,将复合层(3)沿x轴和/或y轴移动以在安装板(6)的可移动区域(7)上的(第一)层上面提供新的含有细胞培养基成分的层并重复进行步骤(b)和(c)(图2c和d)。每当需要时重复使新的包含细胞培养基成分的复合层(3)位于安装板(6)的可移动区域(7)上的组装层上面(步骤(a))以及步骤(b)和(c),以组装固体形式。可通过在真空卡盘(9)上施加真空来支持一个或多个含有细胞培养基成分的层在安装板(6)的可移动区域(7)上的粘附。在完成组装之后,将形式移除(步骤(e))。有利地,在将固体形式移除之前,将安装板(6)中的可移动区域(7)相对于安装板的上侧升高至相同的水平。图3显示可用于本发明方法的有利配置,其中复合层(3)作为条带(3’)提供并通过辊对辊分配系统(11)、(11’)传送。安装板(6)可沿z方向移动,并由保护带(10)覆盖,该保护带可通过激活另一辊对辊系统(12)、(12’)沿x轴移动。程控激光器(5)激活将细胞培养基成分印制到安装板(6)上的印制步骤。在组装期间,固体形式通过真空卡盘(9)固定。图4显示由激光能量吸收层(1)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)组成的复合层(3),其中激光能量吸收层(1)包含含有激光能量吸收材料的层(1’’),层(1’’)在两侧覆盖不含激光能量吸收材料并且对激光透明且稳定的支撑层(1’)和(1’’’)。图5显示由能量吸收层(1)(由含有激光能量吸收材料的一层组成)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)组成的复合层(3)。图6显示如图4中的复合层(3),其中在支撑层(1’’’)与含有至少一种细胞培养基成分的层(2)之间存在分隔层(13)。图7显示如图5中的复合层(3),其中在激光能量吸收层(1)与含有至少一种细胞培养基成分的层(2)之间存在分隔层(13)。图8显示如图6中的复合层(3),其中在含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的底侧存在粘附层(14)。图9显示如图7中的复合层(3),其中在含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的底侧存在粘附层(14)。图10显示如图4中的复合层(3),其中在含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的底侧存在粘附层(14)。图11显示如图5中的复合层(3),其中在含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的底侧存在粘附层(14)。图12显示由激光能量吸收层(1)(由具有激光能量吸收材料的层(1’’)和支撑层(1’’’)组成)、分隔层(13)和含有至少一种细胞培养基成分的层(2)组成的复合层(3)。图13显示如图12中的复合层(3),其中在含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的底侧存在粘附层(14)。图14显示如图12中的复合层(3),但没有分隔层(13)。图15显示如图14中的复合层(3),其中在含有至少一种细胞培养基成分的层(2)的底侧存在粘附层(14)。图16显示由支撑层(1’)、包含激光能量吸收材料的层(1’’)和在底侧含有至少一种细胞培养基成分的层(2)组成的复合层(3)。图17显示如图16中的复合层(3),其中在包含激光能量吸收材料的层(1’’)与含有至少一种细胞培养基成分的层(2)之间存在分隔层(13)。图18a显示复合层的高级变体,其包含由支撑层(1’)、包含激光能量吸收材料的层(1’’)和支撑层(1’’’)组成的激光能量吸收层(1),其中支撑层(1’’’)具有刻制腔体(1’’’’),腔体可填充有含有至少一种细胞培养基成分的材料,并构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’)。图18b显示这种复合层(3),其中腔体(1’’’’)填充有含有至少一种细胞培养基成分的材料,并构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’)。含有至少一种细胞培养基成分的层分成许多块(2’)。腔体尺寸深度可为50µm至多达500µm(18a)。腔体尺寸直径可为50µm至多达5mm。图19显示复合层(3)的底侧,其具有排列成5个不同行的正方形大小的腔体,其中这种腔体填充或压印有含有至少一种细胞培养基成分的材料,并构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’),并且其中每个不同的行(19e)、(19f)、(19g)、(19h)、(19i)均含有具有不同于其他的细胞培养基成分的材料。含有至少一种细胞培养基成分的分成许多块(2’)的层中可存在各种细胞培养基成分。腔体/块之间的间隙可为约50μm-约1mm(19a,19d)。细胞培养基成分腔体或印制层的边长可为50µm至多达5mm(19b,19c)。图20显示刻制或压印在支撑材料(1’’’)中的腔体(1’’’’)形状的不同选项,即正方形(20a)、矩形(20b)、椭圆形(20c)、十字形(20d)、三角形(20e)、六边形(20f)、五边形(20g)、圆盘形(20h),其可填充有含有至少一种细胞培养基成分的材料。图21显示通过使用本发明的方法和图19中公开的复合层依序形成的固体形式的截面图。图22和23显示可使用本发明方法和图18b所示的复合层制备的固体形式的横截面图。存在于一层中的包含至少一种细胞培养基成分的材料块(2’)相对于存在于该层顶部的层中的含有至少一种细胞培养基成分的材料块(2’)处于偏移位置。图22显示一种固体形式,其中存在于层中的包含至少一种细胞培养基成分的每个材料块(2’)彼此相邻布置,从而形成固体形式的封闭结构。图23显示一种固体形式,其中存在于层中的包含至少一种细胞培养基成分的每个材料块(2’)彼此分开布置,从而形成固体形式的开放结构。与图22所示的提供有限的细胞培养基成分(2)溶出速率的高密度布置相比较,图23所示的低密度布置提供细胞培养基成分(2)的提高的溶出速率。图24显示如图4中的复合层,其中支撑层(1’’’)被刻制并且包括腔体,腔体填充有包含至少一种细胞培养基成分的材料,其构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’)。腔体例如填充有压缩的细胞培养基成分、粘性或者甚至液体细胞培养基成分(由于另外的膜层而用于封闭腔体的选项)。图25显示如图5中的复合层,其中能量吸收层(1)具有刻制腔体,腔体填充有包含至少一种细胞培养基成分的材料,其构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’)。图26显示如图6中的复合层,其中支撑层(1’’’)和分隔层(13)具有刻制腔体,腔体填充有包含至少一种细胞培养基成分的材料,其构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’)。图27显示如图7中的复合层,其中激光能量吸收层(1)和分隔层(13)具有刻制腔体,腔体填充有包含至少一种细胞培养基成分的材料,其构成包含至少一种细胞培养基成分的层的块(2’)。图28显示如图26中的复合层,其中粘附层(14)附着于分成块(2’)的含有细胞培养基成分的层的底侧。图29显示如图27中的复合层,其中粘附层(14)附着于分成块(2’)的含有细胞培养基成分的层的底侧。图30显示布置为芯-壳系统的固体形式,其中芯由许多含有细胞培养基成分的块(2’)制成,其被由许多不含细胞培养基成分的块(2’’)制成的壳包围。芯和壳彼此相邻布置,从而形成固体形式的封闭结构。图31显示如图30中的固体形式,其中rfid标签(2’’’)置于由许多不含细胞培养基成分的块(2’’)制成的壳中。由于几何布置,在固体形式溶解时,首先释放rfid标签(2’’’),同时溶解壳,然后溶解并释放细胞培养基成分(2’)。图32显示如图30中的固体形式,其中rfid标签(2’’’)置于由许多含有细胞培养基成分的块(2’)制成的芯中。由于几何布置,在固体形式溶解时,rfid标签(2’’’)和细胞培养基成分(2’)暴露和释放于液体被延迟,因为首先溶解包围芯的壳。图33显示如图30中的固体形式,其含有3个置于外表面中的由许多不含细胞培养基成分的块(2’’)制成的壳和由许多含有细胞培养基成分的块(2’)制成的芯中间中的rfid标签(2’’’)。通过集成多于一个rfid标签,调查(跟踪)期得以延长,使得可从溶解开始直至其最终崩解和/或溶出监测固体形式的行为。图34显示一种复合层,其中在激光能量吸收层(1)和含有细胞培养基成分的层之间存在分隔层(13),含有细胞培养基成分的层分成在中心具有针孔(15)的正方形块(2’),其中粘附层(14)附着于所述含有细胞培养基成分的层的底侧。图35显示如图34中的复合层的俯视图,其将相同的复合层显示为横截面图。图36显示可用于本发明方法的优选配置,其中复合层(3)作为条带(3’)提供并通过辊对辊分配系统(11)、(11’)在卡带盒(16)中传送。卡带盒系统为可更换的。定位辊(4’)、(4’’)可沿垂直方向移动,从而允许根据其操作状态将复合层(3)压/按压到安装板(6)上。安装板(6)可沿z方向移动,并由保护带(10)覆盖。激光器(5)激活将细胞培养基成分印制到安装板(6)上的印制步骤。在组装期间,固体形式通过真空卡盘(9)固定。图37作为三维视图显示与图35所示相同的配置。图38为显示实施例13的细胞培养测定结果的表格。本发明进一步涉及用于培养细胞的方法,其中使用3d打印的固体细胞培养基形式。因此,本发明涉及用于通过以下方式培养细胞的方法:a)通过使用3d打印技术生成固体细胞培养基形式b)将所述固体形式与液体和待培养细胞混合c)通过温育步骤b)的混合物进行细胞培养在一个实施方案中,细胞培养基的固体形式或固体细胞培养基形式为基础培养基。在这种情况下,将固体形式溶解于合适的溶剂如水或水性缓冲液中。可以添加其他成分,如胶凝剂。然后加入待培养的细胞。细胞通过在合适的条件下将其在细胞培养基中温育来培养。固体细胞培养基形式适合作为基础培养基,尤其是用于其中应测试基础培养基的不同组成的应用中。由于3d打印,可根据需要精确地限定和变化固体细胞培养基形式的组成。例如,可通过用不同量的某种成分印制几种固体形式来测试所述成分的量变化的影响。另外,一种成分可被另一种代替。也可并且优选使用固体形式作为具有持续释放特性的基础培养基。易于溶解的外壳包含开始细胞培养需要存在的所有成分。内芯包含应在细胞培养的后期释放的细胞培养基成分。也可并且优选使用固体细胞培养基形式作为开始细胞培养的基础培养基或作为培养基补充剂,其包含至少两层,后者包含不同组成的细胞培养基成分。如上所述,某些细胞培养基成分彼此相互作用,并且一般地需要分别添加到细胞培养物中,例如通过在基础培养基中包含一种成分和在培养基补充剂中包含一种成分。通过使用本发明3d打印的固体形式,不再需要以培养基补充剂形式添加成分之一。两种成分可存在于固体形式的不同层中,使得它们不能彼此相互作用,但是仍然可在一步中施用。在另一个实施方案中,固体细胞培养基形式包含至少两个不同的层。其可用作基础培养基或培养基补充剂。至少两层具有不同的组成。一些细胞培养基成分具有非常不同的溶出特性。尽管一些成分易溶于水,但其他成分几乎不溶于水,但易溶于其他溶剂,例如乙醇或dmso。通过制备具有两层或更多层的固体细胞培养基形式,可将具有相似溶解度的所有成分置于一层中。与其中将所有成分溶解于大量单一类型溶剂中的方法相比较,用这种方法可显著减少溶剂的量。在另一个尤其优选的实施方案中,固体细胞培养基形式优选地为培养基补充剂。可将培养基补充剂首先与液体基础培养基或液体和干粉或固体形式基础培养基混合,或者可在细胞培养期间的任何时间将其添加到细胞培养物中。在一个实施方案中,培养基补充剂包含一般地难以以限定量添加的细胞培养基成分。通过以3d打印的固体形式提供培养基补充剂,可精确地限定成分的量。仅将固体形式添加到基础培养基或细胞培养物中对于用户而言是非常容易的。这种成分的实例为微量元素。在另一个实施方案中,培养基补充剂包含至少一种不稳定,难以溶解或具有其他需要注意的特定特性的成分。如果成分不稳定或具有吸湿性,则固体形式可包含不含所述成分但保护包含所述成分的芯免受环境影响的壳。一旦固体形式与水溶液接触,壳将溶解并释放芯。在另一个实施方案中,培养基补充剂包含需要调节其溶出特性的成分。如果作为粉末或颗粒施用时不能充分溶解并且一般地需要分别预溶解的成分可作为固体形式加入,其中固体形式包括支持所述成分溶解的结构和/或组成。这种成分的实例为某些氨基酸如半胱氨酸和酪氨酸以及支链氨基酸(如缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)。在另一个优选的实施方案中,固体形式的培养基补充剂至少包含具有不同组成的芯和壳。其也可包含多于一个壳层。这种结构能够控制成分的释放。外层中的细胞培养基成分首先释放。内层和/或芯中的成分的释放由其组成和结构控制。通过添加包含芯壳结构的3d打印固体形式的培养基补充剂一次,由于所有单剂量均包含在一种固体形式中,因此可覆盖数个单剂量的相同或不同培养基补充剂的添加。这使得补料或补充细胞培养物的策略容易得多,因为理想地可添加一种固体细胞培养基形式而不是几剂常规培养基补充剂。这种方法对于补料分批过程以及微生物应用都很有价值。例如,为了根据fda-bam方法检测食品和环境样品中的单核细胞增生李斯特菌(listeriamonocytogenes),以及通过mpn计数食品样品中的单核细胞增生李斯特菌,一般地在开始细胞培养之后约4小时之后添加选择剂。为此,添加培养基补充剂。通过在开始细胞培养时使用包含含有选择剂的持续释放芯的本发明固体形式基础培养基,或通过在开始细胞培养时添加包含含有选择剂的持续释放芯的固体形式培养基补充剂,可以省略4小时之后添加选择剂的另外步骤。关于食品和环境样品中单核细胞增生李斯特菌检测以及食品样品中单核细胞增生李斯特菌计数的过程的详细信息可在fdabacteriologicalanalyticalmanual第10章“detectionoflisteriamonocytogenesinfoodsandenvironmentalsamples,andenumerationoflisteriamonocytogenesinfoods”,作者:anthonyd.hitchins(ret.)和karenjinneman和yichen,修订日期:2017年3月中找到。进行细胞培养为本领域技术人员已知的。一般地,将培养基置于合适的容器中,并用细胞或可能包含所述细胞的样品接种。合适的容器在上面定义。样品可为可与细胞培养基接触的任何液体、气体或固体实体。样品可为例如与包含细胞培养基的接触板接触的表面。例如,其可为与细胞培养基或置于培养基中或之上的任何液体或固体接触的交换物(swap)。允许细胞生长的培养基的温育温度一般地在0℃-100℃之间,更一般地在15℃-50℃之间,仍然更一般地在20-45℃之间。细胞培养物可例如在室温(约20℃)或约32.5℃下温育。通常,接种之后,将培养基温育一段时间以使得细胞能够进行一些生长。对于旨在检测或计数细胞的应用,该时间范围可从最少几小时到几周不等。通常,温育时间在约1-14天之间。对于生物药物生产中的应用,一般地进行补料分批细胞培养。这也可能持续数周。生物药物生产的目标一般地为开发高滴度细胞培养工艺,以满足不断增长的市场需求并降低制造成本。除了使用高性能重组细胞系之外,还需要改善细胞培养基和工艺参数,以实现最大生产潜力。在补料分批过程中,基础培养基支持初始生长和产生,并且在细胞培养期间一次或多次添加培养基补充剂(也称为补料培养基)防止营养耗尽和维持生产阶段。选择培养基以适应不同生产阶段期间不同的代谢需求。工艺参数设置(包括补料策略和控制参数)限定了适合于细胞生长和蛋白产生的化学和物理环境。首次使用本发明的固体形式培养基补充剂为所有类型的细胞培养提供备选的细胞培养基策略。可针对培养基的组成对其进行非常特别设计。当组合具有不同溶解度的某些成分或者以其他方式不能组合在固体形式的不同层中的某些成分时,其提供更大的灵活性。包括持续释放方法在内为补料策略提供新的可能性。另外,固体形式可以所需的任何剂量和组成产生。需要较高剂量的用户可简单地产生较大的固体形式或者添加两个或更多个固体形式,这比打开两个或更多个小瓶并添加两剂或更多剂的液体容易得多。通过以下实施例进一步说明本发明,但不限于此。上文和下文引用的所有申请、专利和公开,尤其是2017年10月26日提交的欧洲专利申请ep17198564.1的全部公开特此通过参考结合。实施例1(含有激光能量吸收材料的层(1)或(1’’)的产生)195g乙酸丁酯16gpvb(聚乙烯醇缩丁醛,pioloform,wacker)11gvestosint20703gaerosil20030gsn(sb)o~(d50值<1.1µm)(dupont)将聚乙烯醇缩丁醛溶解于最初引入的溶剂乙酸丁酯中,并充分搅拌。随后搅拌激光能量吸收材料sn(sb)o2,并制备均匀糊料。激光能量吸收材料的量取决于能量吸收,并应对其进行设置。使用30μm刮刀(手动涂布机)将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250μm,优选地为23μm)并干燥。可例如在约140℃下使用涂覆有pe(聚乙烯)的聚丙烯膜(来自piitz的waloten膜)进行热层压。实施例2(含有激光能量吸收材料的层(1)或(1’’)的产生)200g乙酸丁酯20gpvb(聚乙烯醇缩丁醛,pioloform,wacker)8gvestosint20703gaerosil20025g气黑(d50值&17nm)(来自degussa的specialblack)如工作实施例1进行处理。所采用的激光能量吸收材料为气黑。使用90µm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250µm)并干燥。可通过热层压将另一聚酯膜或聚丙烯膜施加于吸收层上(如工作实施例1所述)。实施例3(含有激光能量吸收材料的层(1)或(1’’)的产生)200gε-己内酰胺5gpvp(聚乙烯吡咯烷酮)10gnatrosol250gr15gvestosint20703gaerosil20025g炭黑粉如实施例1进行处理。使用90µm手动涂布机或丝网印刷机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250µm),丝网印刷机使用250目/英寸的不锈钢筛网,丝径为25µm,乳液厚度为25µm。并且最后在对流烘箱中于50℃下干燥1小时。可通过热层压将另一聚酯膜或聚丙烯膜施加于吸收层上(如工作实施例1所述)。实施例4(含有激光能量吸收材料的层(1)或(1’’)的产生)200gmasterblend50(sicpa-aarbergag)10giriodinlazerflair825(粒度20µm)(merckkgaa)100g乙酸乙酯/乙醇(1:1)5gvestosint2070将激光能量吸收材料iriodinlazerflair825在温和条件下掺入到masterblend50中,并通过凹版印刷印制到聚酯膜(厚度为5-250µm,优选地为23µm)。可使用乙酸乙酯/乙醇混合溶剂来设置期望的粘度。施加率为0.5-1g/cm。实施例5(含有激光能量吸收材料的层(1)或(1’’)的产生)该层通过将300g粒度<1µm的sn(sb)o2(dupont)添加到聚酯母料(10kg)中,由已经含有激光能量吸收材料的聚酯产生。随后产生具有5-200μm层厚度的膜。成品膜含有按重量计0.05-10%的激光能量吸收材料,具体取决于层厚度。实施例6(含有激光能量吸收材料的层(1)或(1’’)的产生)该层通过将330g粒度<0.5µm的炭黑添加到聚酯母料(10kg)中,由已经含有激光能量吸收材料的聚酯产生。随后产生具有5-200μm层厚度的膜。成品膜含有按重量计0.05-10%的激光能量吸收材料,具体取决于层厚度。实施例7(制备具有含有细胞培养基成分的层(2)的条带,在这种情况下为mccd琼脂补充剂)将2.1gsoluplus®、3g头孢哌酮钠盐、1g两性霉素b和43gpeg6000依序加入到45g水和15g乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,得到均匀糊料。使用100微米手动涂布机将该糊料涂布于pet膜上,然后在对流烘箱中于50℃和1013毫巴下干燥10分钟。实施例8(制备具有含有细胞培养基成分的层(2)的条带,在这种情况下为bolton肉汤选择性补充剂)将2.1gsoluplus®、2g头孢哌酮钠盐、2g盐酸万古霉素、2g甲氧苄啶乳酸盐、1g两性霉素b和43gpeg6000依序加入到45g水和15g乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,得到均匀糊料。使用100微米手动涂布机将该糊料涂布于pet膜上,然后在对流烘箱中于50℃和1013毫巴下干燥10分钟。实施例9(制备具有含有细胞培养基成分的层(2)的条带,在这种情况下为preston肉汤选择性补充剂)将2.1gsoluplus®、2500iu的硫酸多粘菌素b、1g利福平、1g甲氧苄啶乳酸盐、1g两性霉素b和43gpeg6000依序加入到45g水和15g乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,得到均匀糊料。使用100微米手动涂布机将该糊料涂布于pet膜上,然后在对流烘箱中于50℃和1013毫巴下干燥10分钟。待补充实施例8和9的补充剂的肉汤通常以225ml体积使用,并且在使用之前立即加入补充剂(以液体混悬液的形式)。因此,针对225ml(或225ml的倍数)确定大小的片剂比小瓶更方便。利福平和两性霉素b不溶于水,这使得需要使用有机溶剂(例如乙醇)来制备常规液体补充剂。当使用本发明的3d打印技术时,不会出现这种溶解度问题。实施例10(具有包含多粘菌素的含有细胞培养基成分的层(2)的条带的制备)将3.2gsoluplus®、0.1g硫酸多粘菌素b、8.5gpeg6000、8.5gpeg2000、0.5g硬脂酸镁和0.5gsio2依序加入到14g水和0.5g乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,得到均匀糊料。使用100微米手动涂布机将该糊料涂布于pet膜上,然后在对流烘箱中于50℃和1013毫巴下干燥10分钟。用条带制备一片需要100层。每层的层厚度为30µm,矩形面积为1.2cm²(1.7cmx0.7cm)。通过nd-yag激光器已经实现了将每层转移到构建平台上。实施例11(液体培养基的制备)为了比较常规液体补充剂和本发明补充剂的性能,制备两种补充剂和最终培养基:1.myp+卵黄乳液+蜡样芽孢杆菌(bacilluscereus)选择性补充剂(根据现有技术)将21.5gmypdcm溶解于450ml软化水中。在沸水中加热,在121℃下高压灭菌15分钟,在水浴中冷却至47-50℃,加入50ml卵黄乳液(无菌),混合(磁力搅拌器),加一小瓶(5mg)蜡样芽孢杆菌选择性补充剂(溶于1ml无菌软化水中)。混合。手动制备板。2.myp+卵黄乳液+硫酸多粘菌素b片剂(根据实施例10制备)将5.57gmypdcm溶解于116.64ml软化水中。在沸水中加热,在121℃下高压灭菌15分钟,在水浴中冷却至47-50℃,加入一片(1.296mg)硫酸多粘菌素b,将烧瓶保持在47-50℃的水浴中并永久混合,在片剂溶解之后,加入12.96ml卵黄乳液。混合。手动制备板。成分/培养基来源:myp意指dcmmyp琼脂基础(甘露醇卵黄多粘菌素)acc.iso7932;iso21871和fda-bam(merck,germany,产品编号1.05267.0500)卵黄乳液(merck,germany,产品编号1.03784.0001)蜡样芽孢杆菌选择性补充剂(merck,germany,产品编号1.09875.0010)用于制备片剂的硫酸多粘菌素b(xelliapharmaceut.,产品编号2.77426.0000)两种培养基的外观和ph值(目标ph值为7.2±0.2):高压灭菌之后的dcm基础myp琼脂+多粘菌素最终myp琼脂(包括卵黄乳液)最终ph1.透明至弱乳白色透明至弱乳白色不透明,浅粉色7.2702.透明至弱乳白色强烈浑浊,可见片剂中的一些颗粒不透明,浅粉色7.235施例12(细菌的制备)细菌菌株的预培养在5mltsb中进行。使用以下菌株:-蜡样芽孢杆菌atcc11778预期结果:生长和回收>50%-枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)atcc6633预期结果:生长和回收没有限制-大肠杆菌atcc8739预期结果:完全抑制-大肠杆菌atcc25922预期结果:完全抑制实施例13(细胞培养测定的性能和结果)实施例12的细胞预培养的接种如下进行:蜡样芽孢杆菌atcc11778:用spiralplater将来自-4和-5倍稀释液的50µl接种到琼脂平板上枯草芽孢杆菌atcc6633:从初始预培养物制备1:100稀释液,并用10µl环铺展到琼脂平板上大肠杆菌atcc8739:用10µl环从初始预培养物铺展到琼脂平板上大肠杆菌atcc25922:用10µl环从初始预培养物铺展到琼脂平板上稀释培养基:氯化钠蛋白胨肉汤(缓冲的)将板在31℃下有氧温育44小时。详细结果如图38所示。可以看到,与现有技术的液体补充剂相比较,用本发明的培养基片剂制备的补充剂表现相同。实施例14(用于分隔层(13)的介质的制备)125g1,2-丙二醇1gpeg40015g巴西棕榈蜡5gwitepsole8534g乳糖1g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机(treerollmill)均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例15(用于分隔层(13)的介质的制备)125g1,2-丙二醇1gpeg40015g巴西棕榈蜡34g乳糖1g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物最后通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例16(用于分隔层(13)的介质的制备)125g1,2-丙二醇1gpeg40020g巴西棕榈蜡5gwitepsolh3734g乳糖1g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例17(用于分隔层(13)的介质的制备)125g1,2-丙二醇1gpeg40025g巴西棕榈蜡10gwitepsolh3134g乳糖1g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例18(用于分隔层(13)的介质的制备)150g1,2-丙二醇1gpeg40015g巴西棕榈蜡5gwitepsole8534g乳糖5g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例19(用于粘附层(14)的介质的制备)150g1,2-丙二醇1gpeg40015g巴西棕榈蜡34g乳糖6g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例20(用于粘附层(14)的介质的制备)150g1,2-丙二醇1gpeg40020g巴西棕榈蜡5gwitepsolh3734g乳糖7g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例21(用于粘附层(14)的介质的制备)150g1,2-丙二醇1gpeg40025g巴西棕榈蜡10gwitepsolh3134g乳糖7g聚维酮k9013g羧甲基纤维素0.7g硬脂酸镁0.5g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到1,2-丙二醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。糊状混合物通过树辊磨机均质化。使用90pm手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-250pm),并在对流烘箱中于10毫巴(干燥室内部压力)下干燥1小时。实施例22(复合层(3)(图4)的产生)将支撑膜(1’)和激光能量吸收层(1’’)(实施例1-6)与支撑膜(1’’’)放置在一起,并借助于热层压机层压在一起。在此将可加热辊设置为140-175℃的温度。热层压之后,两层膜彼此牢固粘合。如果使用pe涂覆的聚丙烯膜(来自putz的waloten膜),则可在约140℃下进行层压。最后,将含有细胞培养基成分的层(2)施加(实施例7-13)于层压支撑膜(1’’’)的下侧。实施例23(复合层(3)(图6)的产生)将支撑膜(1’)和激光能量吸收层(1’’)(实施例1-6)与支撑膜(1’’’)放置在一起,并借助于热层压机层压在一起。在此将可加热辊设置为140-175℃的温度。热层压之后,两层膜彼此牢固粘合。如果使用pe涂覆的聚丙烯膜(来自putz的waloten膜),则可在约140℃下进行层压。将分隔层(13)施加(实施例14-17)于层压支撑膜(1’’’)的下侧。将含有细胞培养基成分的层(2)(实施例7-13)施加于分隔层。最后,将粘附层(14)施加(实施例18-21)于含有细胞培养基成分的层(2)。实施例24(复合层(3)(图5)的产生)将用于含有细胞培养基成分的层(2)(实施例7-13)的介质以层厚度为225μm施加于激光能量吸收层(1)(实施例5-6)并进行干燥。实施例25(复合层(3)(图14)的产生)将用于含有细胞培养基成分的层(2)(实施例7-13)的介质以层厚度为10μm至多达500μm(厚度:5、12、15、19、23、36、50和200μm)施加于pet膜的下侧,并且激光能量吸收层(实施例1-6)以层厚度为0.7-15μm印制到激光器侧(上侧)。实施例26(用于分隔层(13)的介质的制备)15g水5g乙醇10g聚维酮6g聚乙二醇60006gkolliphorp1880.2g硬脂酸镁0.1g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到水/乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。使用30微米手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为5-100微米),并在对流烘箱中于50℃和10毫巴(干燥室内部压力)下干燥5分钟。实施例28(可用于本发明方法的装置的优选实施方案的操作的详细描述(图36))步骤1在包括如图7所示的复合层(3)的条带(3’)的3d打印机设备中实施卡带盒系统。步骤2将保护带(10)置于安装板(6)上。步骤3将安装板(6)调整到零水平用于起始位置。步骤4通过步进引擎将复合层(3)转到起始位置。步骤5定位辊(4’)和(4’’)下降以将复合层(3)压到安装板(6)上。步骤6将两个辊(11)和(11’)之间的复合层张力调整为适当的张力并开启真空泵(9)。步骤7激光扫描限定的区域,从而将含有细胞培养基成分的层(2)转移到安装板(6)上。步骤8定位辊(4’)和(4’’)向上移动,以完全提起细胞培养基成分层(2)。步骤9复合层(3)(作为条带(3’)提供)通过步进电机向前卷动,从而使新的(完整的)复合层(3)位于扫描区域。步骤10以等于细胞培养基成分层(2)的厚度的高度向下移动安装板(6)。步骤11定位辊(4’)和(4’’)下降以将复合层(3)压到安装板(6)上。步骤12每当需要时重复工艺步骤6-11以构建固体细胞培养基形式;步骤13关闭真空泵(9),并从安装板(6)上移除固体细胞培养基形式。实施例29(实施例28的固体形式的产生)从产生复合层(3)(图7)开始步骤1用于分隔层(13)的介质的制备15g水5g乙醇10g聚维酮6g聚乙二醇60006gkolliphorp1880.1g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到水/乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。使用30微米手动涂布机将糊料涂布于聚酯膜(厚度为50微米),并在对流烘箱中于50℃和1013毫巴下干燥5分钟。步骤2用于含有细胞培养基成分的层(2)的介质的制备45g水15g乙醇9g聚维酮12g山梨醇24g甲氧苄啶乳酸盐9g硬脂酸镁0.1g二氧化硅(aerosil200pharma)将这些物质连续加入到水/乙醇的液体混合物中,并用高速溶解器充分搅拌,从而制备均匀糊料。使用200微米手动涂布机将用于含有细胞培养基成分的层(2)的糊料涂布于分隔层(厚度为70微米),并在对流烘箱中于50℃和1013毫巴下干燥10分钟。步骤3将复合层(3)切成2cm宽的条,从而获得在芯辊(11)上卷起的条带(3’)。步骤4将芯辊(11)组装在卡带盒系统(16)中,并将其与重卷辊(11’)连接。步骤5将卡带盒系统(16)实现为图36所示的配置。其他步骤进行实施例28所述的步骤2-13。结果获得总重量为400mg,含有39%(w/w)布洛芬的固体形式。实验条件借助以下激光器类型和参数,将具有分隔层(13)、含有细胞培养基成分的层(2)和粘附层(14)的复合层(1)(图4-17和24-29)用于本发明的方法中:a)nd:yag(cw模式)12瓦激光器trumpf激光器nd:yag(1064和532nm)激光强度:10-100%,cw模式速度:100-5000mm/s线宽:0.1mm线隙:0.05mmb)nd:yvoa激光器(cw模式,脉冲)b)nd:yvoa激光器(连续模式,脉冲)16瓦激光器rofinsinarnd:yvo4(1064nm)激光强度:20-90%,cw模式,脉冲脉冲频率:10-100khz速度:400-2000mm/sc)nd:yag激光器(脉冲)60瓦激光器baaselnd:yag(1064nm)d)nd:yag(脉冲模式)12瓦激光器trumpf激光器nd:yag(1064nm)激光强度:10-100%,脉冲模式速度:100-5000mm/s脉冲频率:5khz线宽:0.1mm线隙:0.05mm灯电流16a,脉冲模式脉冲频率:20.000hz速度:200mm/s摇摆器(wobbler)频率:16hz脉冲持续时间:0.05ms与以小型结构的cw模式的打印(线宽<1mm或点直径<1mm)相比较,以脉冲模式的最终3d打印结果的区别在于在激光打印点处更高的边缘清晰度和更平滑的表面。当前第1页12当前第1页12
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