一种联苯胺类化合物及其应用的制作方法

文档序号:17918033发布日期:2019-06-14 23:54
本发明属于化学医药
技术领域
,具体涉及一种联苯胺类化合物及其应用。
背景技术
:维甲酸受体相关孤儿受体(Retinoicacidreceptor-relatedorphanreceptor,ROR)是核受体家族中一类重要的孤儿受体。该受体家族包括3个亚型,RORα,RORβ和RORγ。RORα在肝脏、骨骼肌、皮肤、肺、脂肪细胞组织、肾、胸腺以及脑中广泛表达。而RORβ表达部位非常有限,只在中枢神经系统中表达。RORγ在肝、骨骼肌、和脂肪细胞组织,特别是在免疫系统中的关键细胞中表达。过去几年里,RORα和RORγ因其在辅助性T细胞17(TH17)的分化、发展中发挥着重要作用而引起了广泛关注。研究发现TH17细胞是免疫病理学的关键调节因子,因此调节TH17细胞分化能够调节免疫系统响应。白细胞介素17(IL-17)是炎症发展和各种自身免疫疾病的关键促炎细胞因子,与多发性硬化症(MultipleSclerosis,MS),类风湿性关节炎(RheumatoidArthritis,RA)等密切相关。RORα和RORγ直接调控IL-17细胞因子的生成和分泌水平,是TH17细胞发展的一个关键因子。抑制RORγ家族蛋白将有效抑制TH17细胞分化,从而调控免疫系统应答,对多发性硬化症,风湿性关节炎,牛皮癣,克隆疾病,哮喘,炎症性肠道疾病,肺部疾病等疾病药物研发具有重大意义。RORγ是一种配体依赖性转录因子,通过结合内含子上的响应原件(RORE)介导AR基因招募共激活因子SRC-1和SRC-3,从而调控AR基因表达。RORγ选择性拮抗剂SR2211在基因转录水平可显著抑制AR和AR-V7的表达。RORγ抑制剂不仅可以抑制CRPC细胞的生长,而且对二代药物恩杂鲁胺耐药的细胞上仍表现出好的抑制效果。综上所述,靶向RORγ有望从根本上解决前列腺癌及其临床耐药的难题。通过抑制新颖靶标RORγ可以干扰AR基因表达及下游信号通路,有望为从源头上克服前列腺癌的治疗耐药提供新型药物。RORγ的天然配体一直存在较大争议。类固醇和类固醇硫酸酯等甾醇类化合物是最早期发现的RORγ激动剂。天然产物地高辛被发现是RORγ抑制剂,可抑制辅助性T细胞17(Th17)的分化,然而因其具有毒副作用(提高细胞内钙与ATPas相互作用)限制了其应用。天然产物熊果酸也能够与RORγ结合,抑制Th17细胞分化,缓解类风湿性关节炎的症状。然而熊果酸同时能够激活糖皮质激素受体(GR),因此不可避免地会产生副作用。自从肝X受体(LXR)激动剂T0901317被鉴定为RORγ抑制剂以来,不同类型的RORγ小分子抑制剂陆续被报道。基于T0901317的结构开发的一系列小分子RORγ抑制剂,如选择性拮抗剂SR2211和SR1555,其活性有待于提高。一类双苯基酰胺类化合物,如GSK-805可显著抑制Th17细胞的分化,在自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,该化合物可显著降低存在于中枢神经系统中的IL-17+T细胞。RORγ小分子抑制剂GNE-3500可抑制RORγ招募共激活因子,其表现出良好的代谢稳定性且在小鼠炎症模型中抑制IL-17的表达。RORγ的研究近年来在国内外得到了广泛关注,但是现有技术中的RORγ抑制剂的结构类型总体而言较少。虽然有一些化合物进入临床,但是具体成药性数据尚未公布。另外,这些小分子抑制剂大多是在治疗炎症方面具有良好效果,但在治疗前列腺癌等癌症方面没有良好效果。因此,合成一种化合物作为RORγ的选择性抑制剂,特别是其在制备抗炎类药物和抗肿瘤类药物中的应用具有很大的潜在价值。技术实现要素:针对现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种联苯胺类化合物及其应用。为达到此发明目的,本发明采用以下技术方案:本发明的目的在于提供一种联苯胺类化合物及其应用。为达到此发明目的,本发明采用以下技术方案:一方面,本发明提供一种联苯胺类化合物,其特征在于,所述联苯胺类化合物具有如下式I所示结构:其中X为R1选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳基烷基;R2选自H、卤素、取代或未取代的烷基、氰基或-COH(CF3)2;R3和R4独立地选自H、卤素或取代或未取代的烷基。本文所用术语“烷基”意指包括具有特定碳原子数目的支链的和直链的饱和脂肪烃基。例如,“C1-C6烷基”中“C1-C6”的定义包括以直链或支链排列的具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团。例如,“C1-C6烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、已基。本文中所用术语“卤素”意指包括氟、氯、溴和碘。优选地,R1选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苄基-C1-C6烷基。优选地,R2选自H、取代或未取代的C1-C6烷基或-COH(CF3)2。优选地,R2选自-COH(CF3)2。优选地,所述取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苄基-C1-C6烷基,苄基中取代基选自硝基、酰胺基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、N-甲基酰胺基、甲酯基、羧基、三氟甲基、氨基、苯基或环己烷基。优选地,所述联苯胺类化合物具有如下式II或式III所示结构:其中R为取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苄基-C1-C6烷基,其中苄基取代基选自硝基、酰胺基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、N-甲基酰胺基、甲酯基、羧基或氨基。R'选自取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的苄基、取代或未取代的苄基-C1-C6烷基,其中苄基取代基选自硝基、酰胺基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、N-甲基酰胺基、甲酯基、羧基或氨基。。优选地,R'选自取代或未取代的苄基,其中苄基取代基选自氨基、硝基、甲基磺酰基或乙基磺酰基。优选地,R'选自优选地,所述联苯胺类化合物为如下化合物中的任意一种或至少两种的组合:N-(2'-氟-4'–(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺;2-(4-(乙基磺酰基)苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,11,1'-联苯基]-4-基)乙酰胺;N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-硝基苯基)乙酰胺;N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(2-硝基苯基)乙酰胺;2-(4-氨基苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酰胺;2-(2-氨基苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酰胺;N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯基]-4-基)苯胺。第二方面,本发明提供如上所述的联苯胺类化合物的药学上可接受的盐、异构体、外消旋体、前体药物共结晶复合物或溶剂合物。本发明可通过常规化学方法自含有碱性部分或酸性部分的本发明化合物合成本发明的药学上可接受的盐。通常,通过和适当的无机或有机酸在适当溶剂或多种溶剂的组合中反应制备碱性化合物的盐。类似的,通过和适当的无机或有机碱反应形成酸性化合物的盐。因此,本发明化合物的药学上可接受的盐包括通过碱性本发明化合物和无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸)或有机酸(例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、扑酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸)反应形成的本发明化合物的常规无毒盐。如果本发明化合物为酸性的,则包括通过药学上可接受的无毒碱包括无机碱(包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐)及有机碱(伯胺、仲胺和叔胺的盐)制备的盐。第三方面,本发明提供如上所述的联苯胺类化合物在制备RORγ受体拮抗剂中的应用。第四方面,本发明提供如上所述的联苯胺类化合物在制备治疗炎症、免疫疾病、癌症和神经类疾病的药物中的应用。优选地,所述免疫疾病为脑脊髓炎、胶原诱导性关节炎、多发性硬化症、风湿性关节炎、牛皮癣、克隆疾病或哮喘。优选地,所述癌症为前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、急性白血病、非小细胞肺癌、骨肉瘤、肺癌、宫颈癌或肾癌。RORγ受体抑制剂制备的药物,以及所述药物组合物可治疗的癌症包括肾上腺肿瘤、听神经瘤、肢端黑色素瘤、肢端汗腺瘤、急性嗜酸性白血病、急性红色的白血病、急性淋巴母细胞性白血病、急性巨核细胞白血病、急性单核细胞的白血病、急性早幼粒细胞性白血病、腺癌、腺样囊性癌、脂肪组织肿瘤、肾上腺皮质癌、成人T细胞白血病/淋巴瘤、艾滋病相关淋巴瘤、肺泡横纹肌肉瘤、肺泡软肉瘤、成釉细胞的纤维瘤、间变性大细胞淋巴瘤、未分化甲状腺癌、血管肌脂肪瘤、血管肉瘤、星形细胞瘤、非典型畸形杆状的肿瘤、B细胞慢性淋巴细胞白血病、B细胞前淋巴细胞白血病、B细胞淋巴瘤、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、胚细胞瘤、骨肿瘤、棕色肿瘤、伯基特淋巴瘤、乳腺癌、脑癌、原位癌、软骨瘤、牙骨质瘤、髓系肉瘤、软骨瘤、脊索瘤、绒毛膜癌、脉络丛乳头状瘤、肾透明细胞肉瘤、颅咽管瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、宫颈癌、结肠癌、小圆细胞肿瘤、细胞弥漫型B细胞淋巴瘤、神经上皮的肿瘤、无性细胞瘤、胚胎性癌内分泌腺肿瘤、内胚层窦肿瘤、食道癌、纤维瘤、纤维肉瘤、滤泡淋巴瘤、滤泡星形胶质细胞瘤、甲状腺癌胃肠道癌症、生殖细胞肿瘤、妊娠期绒毛膜癌、巨细胞成纤维细胞瘤、骨巨细胞瘤、神经胶质细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、神经胶质瘤、颗粒细胞瘤、男性细胞瘤、胆囊癌症、胃癌、成血管细胞瘤、头部和颈部癌症、血管外皮细胞瘤恶性肿瘤、肝母细胞癌、细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、浸润性小叶癌、肠道癌症、肾癌、喉癌、致命的中线癌、白血病、睾丸间质细胞瘤、脂肪肉瘤、肺癌、淋巴管瘤、淋巴上皮瘤、淋巴瘤、急性淋巴管肉瘤,淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、肝癌,小细胞肺癌、非小细胞肺癌、麦芽淋巴瘤、恶性纤维组织细胞瘤、恶性周围神经鞘瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、肥大细胞白血病、纵隔生殖细胞肿瘤、乳腺髓样癌、髓样甲状腺癌、成神经管细胞瘤、黑色素瘤、脑膜瘤、默克尔细胞癌症、间皮瘤、转移性细胞癌、混合缪氏肿瘤、粘液性肿瘤、多发性骨髓瘤、肌肉组织肿瘤、蕈样黏液样脂肪肉瘤、粘液瘤、粘液肉瘤、鼻咽癌、神经母细胞瘤、神经纤维瘤、神经瘤、眼部癌症、嗜酸性、视神经鞘脑膜瘤、肿瘤、口腔癌、骨肉瘤、卵巢癌、乳头状甲状腺癌、肿瘤副神经节瘤、成松果体细胞瘤、垂体细胞瘤、前体T-淋巴母细胞性淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤,腹膜癌、前列腺癌、胰腺癌、咽癌、肾细胞癌、肾髓样癌、成视网膜细胞瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、肉瘤、精原细胞瘤、滋养细胞肿瘤、皮肤癌、小圆细胞肿瘤、小细胞癌、软组织肉瘤、生长抑素瘤、脊髓肿瘤、脾边缘带淋巴瘤、鳞状细胞癌、滑膜肉瘤、小肠癌症、鳞状细胞癌、胃癌、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、甲状腺癌症、移行细胞癌、喉癌、脐尿管癌、泌尿生殖癌症、子宫癌症、疣状癌、视觉途径神经胶质瘤、外阴癌或阴道癌等。RORγ受体抑制剂制备的药物,以及所述药物组合物可治疗的炎症疾病包括炎症盆腔疾病、尿道炎、皮肤晒伤、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、胃炎、肠炎、皮炎、牙龈炎、胰腺炎、牛皮癣、过敏、克罗恩氏病、肠道综合症、溃疡性结肠炎、组织移植排斥、器官移植排斥、哮喘、过敏性鼻炎、慢性阻塞性肺疾病、自身免疫性疾病、自身免疫性脱发、贫血、肾小球肾炎、皮肌炎、多发性硬化症、硬皮病、血管炎、自身免疫性溶血性和血小板减少、肺出血肾炎综合征、动脉粥样硬化、阿狄森氏病、帕金森氏症、阿尔茨海默氏症、糖尿病、感染性休克、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、骨关节炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、重症肌无力、桥本甲状腺炎、过敏性皮肤炎、退化性关节疾病、格林-巴利综合征、蕈样真菌病或急性炎症反应等。RORγ受体抑制剂制备的药物,以及所述药物组合物可治疗的病毒感染包括人类乳头瘤病毒、疱疹病毒、巴尔病毒、人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染等。RORγ受体抑制剂制备的药物,以及所述药物组合物可治疗的神经性衰退性疾病包括阿兹海默病、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细血管扩张症、牛海绵状脑病、克雅二氏病、亨廷顿氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、帕金森氏病、原发性侧索硬化或脊髓性肌萎缩症等。RORγ受体抑制剂制备的药物,以及所述药物组合物可适用于各种给药途径,所述给药途径典型但非限制性实例有:口服、颊、吸入、舌下、直肠、阴道、脑池内的或鞘内、通过腰椎穿刺、经尿道、经皮肤或肠外(包括静脉注射、肌肉注射、皮下、行皮内注射、腹腔内、鞘内、手术植入)等。本申请所述的药物组合物可以是液体、半液体或固体形式,按照适合于所用的给药途径的方式配制。本申请所述的组合物可以按照下列给药方式给药:口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、口腔、鼻内、脂质体等方式。口服的药物组合物可以是固体、凝胶或液体。固体制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。这些制剂可以选择地含有粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂和矫味剂等。粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊;润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸;稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇、磷酸二钙;助流剂的实例包括但不限于二氧化硅;崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。以肠胃外给予本申请所述药物组合物,一般以注射为主,包括皮下、肌内或静脉内注射。注射剂可以被制成任何常规形式,如液体溶液或悬液、适合于在注射之前溶解或悬浮在液体中的固体形式或者乳剂。可用于本申请注射剂的药学上可接收的载体的实例包括但不限于水性载体、非水性载体、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、悬浮与分散剂、乳化剂、螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性载体的实例包括氯化钠注射液、林格式注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖与乳酸化林格氏注射液;非水性载体的实例包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油;抗微生物剂的实例包括间甲酚、苄醇、氯丁醇、苯扎氯铵等;等渗剂的实例包括氯化钠和葡萄糖;缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。发明所述药物组合物还可以制备成无菌的冻干粉针剂,将化合物溶于磷酸钠缓冲溶液,其中含有葡萄糖或其他适合的赋形剂,随后在本领域技术人员已知的标准条件下将溶液无菌过滤,继之以冷冻干燥,得到所需的制剂。相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:本发明提供了一种全新结构的联苯胺类化合物,该类化合物对RORγ蛋白具有非常好的抑制作用,可用于开发新的RORγ蛋白抑制剂;该类化合物可用于制备治疗炎症、免疫疾病、癌症或神经类疾病的药物;且该类化合物的制备方法简单,适合大规模工业化生产。具体实施方式为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果,以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案,但本发明并非局限在实施例范围内。实施例1本实施例提供一种联苯胺类化合物:N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺,其制备方法包括如下步骤:(1)制备如下式结构的2-(4-氨基-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇:取二氟苯胺(6.0g,54mmol),六氟丙酮三水合物(12.5g,56.7mmol)和对甲苯磺酸(0.85g,5.4mmol)置于压力容器中。抽真空后用氩气保护加热至90℃,反应过夜。冷却到室温,用饱和碳酸氢钠洗一次,乙酸乙酯萃取三次(3×50mL)。合并有机层,用饱和氯化钠洗一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=10:1)得到白色固体4.45g(产率90%)。MS(ESI)质谱表征结果为:计算值:277.14,实验值:278.0。(2)制备如下式结构的2-(4-碘-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇:取化合物2-(4-氨基-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(4.45g,16.1mmol)溶于DMF(50mL)中,在0℃下向该溶液中加入浓HCl(18mL,73mmol),搅拌5分钟,然后继续向溶液中加入亚硝酸钠(1.7g,24mmol)水溶液(20mL),将反应混合物在0℃下搅拌30分钟,然后分批加入碘化钾(4.0g,24mmol),然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=50:1)得到产物6.2g(产率90%)。核磁表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.31(d,J=8.4Hz,1H),7.48(d,J=1.6Hz,9.2Hz,1H),8.05(dd,J=6.8Hz,8.4Hz,1H),9.07(s,1H)。(3)制备如下式结构的叔丁酯-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联二苯]-4-基)氨基甲酸:取化合物2-(4-碘-3-氟苯基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(6.2g,16mmol)溶于1,4-二恶烷(100mL)和水(20mL)中,向该溶液中加入4-(N-BOC-氨基)苯硼酸(4.2g,17.6mmol),碳酸钾(6.6g,48mmol)和Pd(PPh3)4(0.9g,0.78mmol),氩气保护,回流过夜。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=20:1)得到产物5.4g(产率74%)。核磁表征结果为:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.54-7.44(m,6H),7.40(d,J=8.4Hz,1H),6.57(s,1H),3.82(s,1H),1.53(d,J=3.2Hz,9H)。(4)制备如下式结构的2-(4'-氨基-2-氟-[1,1'-联二苯]-4-基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇:取化合物叔丁酯-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联二苯]-4-基)氨基甲酸(5.35g,11.8mmol),用50mL的DCM溶解,在0℃下滴入三氟乙酸(7mL,96mmol),室温反应三小时。TLC监测反应,反应结束后将混合物减压浓缩,然后在石油醚/乙酸乙酯中进行重结晶,得到产物3.8g(产率91%)。核磁表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,1H),7.61(t,J=8.4Hz,1H),7.50-7.47(m,2H),7.30(d,J=7.2Hz,2H),6.65(d,J=8.4Hz,2H),5.41(s,2H)。(5)制备如下式结构的N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酰胺:将化合物2-(4-(甲基磺酰基)苯基)乙酸(66mg,0.31mmol),二异丙基乙胺(0.5mL)和HATU(646.4mg,1.70mmol)溶于20mLDCM。将反应混合物在室温下搅拌5分钟,然后加入化合物2-(4'-氨基-2-氟-[1,1'-联二苯]-4-基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(100mg,0.28mmol),并将所得混合物在室温下搅拌3小时。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=5:1)得到白色固体73mg(产率43%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.43(s,1H),9.00(s,1H),7.89(d,J=8.4Hz,2H),7.77–7.66(m,3H),7.66–7.32(m,6H),3.83(s,2H),3.19(s,3H)。碳谱表征结果为:13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ168.4,159.7,157.7,141.8,139.3,139.2,131.6,130.9,130.2,129.7,129.6,129.3,129.3,128.6,127.0,123.2,119.2,115.0,114.8,43.6,43.0。MS(ESI)质谱表征结果为:C24H18F7NO4S([M-1]–)计算值:549.46,实验值:547.9。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为7.26min,99.51%。实施例2本实施例提供一种联苯胺类化合物:2-(4-(乙基磺酰基)苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,11,1'-联苯基]-4-基)乙酰胺,其制备方法包括如下步骤:步骤(1)-(4)与实施例1保持一致,再进行步骤(5)。(5)制备如下式结构的2-(4-(乙基磺酰基)苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,11,1'-联苯基]-4-基)乙酰胺:将化合物2-(4-(乙基磺酰基)苯基)乙酸(70.7mg,0.31mmol),二异丙基乙胺(0.5mL)和HATU(646.4mg,1.70mmol)溶于20mLDCM。将反应混合物在室温下搅拌5分钟,然后加入化合物2-(4'-氨基-2-氟-[1,1'-联二苯]-4-基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(100mg,0.28mmol),并将所得混合物在室温下搅拌3小时。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=3:1)得到白色固体78.9mg(产率50%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),9.00(s,1H),7.85(d,J=8.4Hz,2H),7.76–7.65(m,3H),7.62(d,J=8.4Hz,2H),7.59–7.48(m,4H),3.82(d,J=12.4Hz,2H),3.27(q,J=14.8,7.2Hz,2H),1.09(t,J=7.2Hz,3H)。碳谱表征结果为:13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ168.90,160.15,158.19,142.50,139.75,137.35,132.20,131.36,130.69,130.16,129.82,129.79,129.14,128.32,123.67,119.70,115.51,115.31,49.72,43.43,7.61。MS(ESI)质谱表征结果为:C25H20F7NO4S([M-1]–)计算值:563.49,实验值:562.2。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为7.92min,99.71%。实施例3本实施例提供一种联苯胺类化合物:N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-硝基苯基)乙酰胺,其制备方法包括如下步骤:步骤(1)-(4)与实施例1保持一致,再进行步骤(5)。(5)制备如下式结构的N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-硝基苯基)乙酰胺:将化合物2-(4-硝基苯基)乙酸(56.2mg,0.31mmol),二异丙基乙胺(0.5mL)和HATU(646.4mg,1.70mmol)溶于20mLDCM。将反应混合物在室温下搅拌5分钟,然后加入化合物2-(4'-氨基-2-氟-[1,1'-联二苯]-4-基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(100mg,0.28mmol),并将所得混合物在室温下搅拌3小时。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=3:1)得到白色固体67.9mg(产率47%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(d,J=8.0Hz,2H),7.61–7.45(m,8H),7.35(s,1H),4.29(s,1H),3.85(s,2H)。碳谱表征结果为:13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ168.17,164.56,159.64,157.68,146.40,143.82,139.21,131.70,130.83,130.57,129.66,129.32,129.30,128.66,123.35,123.16,119.21,115.01,114.81,38.20。MS(ESI)质谱表征结果为:C23H15F7N2O4([M+1]+)计算值:516.37,实验值:517.0。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为12.23min,纯度96.63%。实施例4本实施例提供一种联苯胺类化合物:N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(2-硝基苯基)乙酰胺,其制备方法包括如下步骤:步骤(1)-(4)与实施例1保持一致,再进行步骤(5)。(5)制备如下式结构的N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(2-硝基苯基)乙酰胺:将化合物2-(2-硝基苯基)乙酸(56.2mg,0.31mmol),二异丙基乙胺(0.5mL)和HATU(646.4mg,1.70mmol)溶于20mLDCM。将反应混合物在室温下搅拌5分钟,然后加入化合物2-(4'-氨基-2-氟-[1,1'-联二苯]-4-基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(100mg,0.28mmol),并将所得混合物在室温下搅拌3小时。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=4:1)得到白色固体47.7mg(产率33%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(d,J=8.4Hz,1H),7.94(s,1H),7.66(t,J=7.2Hz,1H),7.53(qd,J=16.4,8.4Hz,9H),4.26(s,1H),4.03(s,2H)。碳谱表征结果为:13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ167.82,159.65,157.69,149.03,139.33,133.73,133.52,131.69,130.84,130.50,129.70,129.60,129.31,129.29,128.41,124.55,123.86,123.16,121.56,119.07,115.01,114.80,40.73。MS(ESI)质谱表征结果为:C23H15F7N2O4([M+1]+)计算值:516.37,实验值:517.0。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为9.83min,纯度99.45%。实施例5本实施例提供一种如下式所示的联苯胺类化合物:2-(4-氨基苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酰胺,其制备方法包括如下步骤:将化合物N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(4-硝基苯基)乙酰胺(80mg,0.15mmol),10%钯碳(约含水55%)(15mg),加入到甲醇(10mL)溶剂中,并在氢气环境中于室温下反应5小时。结束后,使用硅藻土助滤,将混合物抽滤,并将滤液浓缩,得到产物62mg(产率85%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.20(s,1H),9.00(s,1H),7.82–7.62(m,3H),7.62–7.41(m,4H),6.99(d,J=8.4Hz,2H),6.55–6.41(m,2H),4.94(s,2H),3.45(s,2H)。碳谱表征结果为:13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ170.17,157.68,147.22,139.62,130.81,129.74,129.63,129.42,129.22,129.20,123.84,123.13,122.66,119.06,114.99,114.77,113.84,99.49,42.69。MS(ESI)质谱表征结果为:C23H17F7N2O2([M-1]–)计算值:486.39,实验值:485.0。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为7.47min,纯度99.17%。实施例6本实施例提供一种如下式所示的联苯胺类化合物:2-(2-氨基苯基)-N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)乙酰胺,其制备方法包括如下步骤:将化合物N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯]-4-基)-2-(2-硝基苯基)乙酰胺(80mg,0.15mmol),10%钯碳(约含水55%)(15mg),加入到甲醇(10mL)溶剂中,并在氢气环境中于室温下反应5小时。结束后,使用硅藻土助滤,将混合物抽滤,并将滤液浓缩,得到粗产物,硅胶柱层析分离(PE:EA=2:1,v/v),得到目标化合物为白色固体(64.2mg,产率:88%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),9.00(s,1H),7.76-7.65(m,3H),7.61–7.49(m,4H),7.06(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),6.95(td,J=7.9,1.5Hz,1H),6.67(dd,J=7.9,1.0Hz,1H),6.54(td,J=7.4,1.1Hz,1H),5.09(s,2H),3.52(s,2H)。MS(ESI)质谱表征结果为:C23H17F7N2O2([M-1]–)计算值:486.39,实验值:485.0。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为7.44min,纯度98.86%。实施例7本实施例提供一种如下式所示的N-(2'-氟-4'-(1,1,1,3,3,3-六氟-2-羟基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯基]-4-基)苯胺,其制备方法包括如下步骤:步骤(1)-(4)与实施例1保持一致,再进行步骤(5)。(5)将化合物正戊酸(31.7mg,0.31mmol),二异丙基乙胺(0.5mL)和HATU(646.4mg,1.70mmol)溶于20mLDCM。将反应混合物在室温下搅拌5分钟,然后加入化合物2-(4'-氨基-2-氟-[1,1'-联二苯]-4-基)-1,1,1,3,3,3-六氟代-2-丙醇(100mg,0.28mmol),并将所得混合物在室温下搅拌3小时。TLC监测反应,反应结束后加入水,用乙酸乙酯萃取(3×50mL),有机相用饱和食盐水洗涤一次,无水硫酸钠干燥,真空旋干有机相。粗产物经硅胶柱分离柱(PE:EA=8:1)得到白色固体31.7mg(产率72%)。氢谱表征结果为:1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),9.13(s,1H),7.71-7.66(m,3H),7.57-7.50(m,4H),2.32(t,J=7.2Hz,2H),1.59-1.53(m,2H),1.36-1.27(m,2H),0.88(t,J=7.2Hz,3H)。碳谱表征结果为:13CNMR(125MHz,DMSO-d6)δ170.20,159.65,157.69,139.48,130.84,129.78,129.68,129.20,129.17,128.24,123.15,119.17,115.00,114.79,49.62,30.84,29.57。MS(ESI)质谱表征结果为:C20H18F7NO2([M+1]+)计算值:437.36,实验值:438.1。液相表征结果为:流动相使用甲醇:H2O(80:20),出峰时间为16.78min,纯度99.95%。实施例8体外活性实验:本实施例采用AlphaScreen检测技术测定本发明化合物对RORγ蛋白的抑制活性。实验材料:目的蛋白RORγ终浓度是200nM;实验缓冲液(10×)MOPS(500mM)PH7.4,CHAPS(0.5mM),NaF(500mM),BSA(1mg/ml);试剂盒中供体微珠终浓度5μg/mL,受体微珠终浓度5μg/mL;RORγ的共激动因子,短肽bSRC1-4(Biotin-QKPTSGPQTPQAQQKSLLQQLLTE)终浓度50nM。150μL反应体系中:RORγ15μL,实验缓冲液15μL,去离子水60μL,小分子化合物15μL,供体微珠15μL,受体微珠15μL;阳性抑制剂T0901317,UA。实验方法:将蛋白、共激动因子(b-SRC1-4)、10×AlphaScreen缓冲液及超纯水按终体积依次是15μL、15μL、15μL和60μL配制成混合溶液(蛋白与共激动因子的终浓度比为200:50nM)。在96孔透光板中,每个待测样品加入混合溶液105μL。若测试化合物的单点抑制率,则将化合物稀释成终浓度50μM,每个样品中加15μL;若测试化合物的IC50值,则将化合物倍比稀释(200~0.075μM)后,每个样品中加15μL(一般情况,为了节省人力、物力,一批新的化合物先做单点初筛实验,抑制率在50%左右的化合物再做IC50曲线实验)。5000μg/mL的供体微珠和受体微珠需配成终浓度5μg/mL,在绿光的环境中,每孔加两种微珠的混合溶液共30μL。室温离心1000rpm,1min,使体系充分混合。锡纸包裹后,避光孵育1.5h。之后转384孔白色不透光板中,放入EnSpireAlpha2390多功能酶标仪检测化合物的抑制活性。实验结果:本发明实施例1-7制备得到的化合物对RORγ蛋白的抑制活性数据如表1所示。表1实验结果表明:本发明化合物对RORγ蛋白具有非常好的抑制作用,特别是化合物1、2对RORγ蛋白的抑制活性比对照药T0901317高。实施例9体外活性实验:本发明采用Luciferase检测技术验证本发明化合物对核受体RORγ细胞水平的抑制活性。实验材料:人肾上皮细胞系293T细胞;含有10%胎牛血清的DMEM培养基;96孔板透明板;双报告基因检测试剂盒;Opti-MEM试剂;Lipo-fectamine2000转染试剂;重组质粒:Gal4-RORγLBD:25ng,RORE_Luc:25ng,pG5-luc、Renilla;阳性抑制剂:T0901317、UA。实验方法:用含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养人肾上皮细胞系293T细胞,转染前一天将细胞培养于96孔板中,细胞密度为1.5x104个/孔。贴壁生长24小时后进行瞬时转染,采用双报告基因共转染的方法,转染试剂为Lipo-fectamine2000,用Opti-MEM试剂分别稀释转染试剂和质粒。Gal4-RORγLBD每孔25ng;pG5-luc基因每孔25ng;Renilla每孔5ng,共转染24小时后加入不同浓度的化合物,孵育24小时后,采用Luciferase双报告基因检测试剂盒,检测发光信号,每个样品3个复孔。通过多功能检测酶标仪(激发波长680nm,发射波长520-620nm)检测读数,利用软件计算IC50值(半抑制浓度)。实验结果:本发明化合物1-7对RORγ细胞水平的抑制活性如表2所示。表2序号名称IC50(μM)1实施例1制得的化合物0.12±0.032实施例2制得的化合物0.03±0.013实施例3制得的化合物1.49±0.54实施例4制得的化合物0.19±0.025实施例5制得的化合物4.16±2.266实施例6制得的化合物0.96±0.467实施例7制得的化合物4.17±2.108阳性抑制剂T09013171.7±0.059阳性抑制剂UA0.68±0.1实验结果表明:本发明化合物对RORγ细胞水平测试发现,其具有非常好的抑制作用,特别是实施例1、2、4制得的化合物对RORγ蛋白的抑制活性比对照药UA活性更好。实施例3制得的化合物对RORγ蛋白的抑制活性与对照药T0901317活性相当。实施例10体外活性实验:本实施例采用TSA检测技术测定本发明化合物对RORγ蛋白的抑制活性。实验材料:hRORγ蛋白、荧光染料SyproOrange、10p缓冲液、超纯水、HSP-96孔反应板。实验方法:将稀释好的蛋白(终浓度10μM)、荧光染料(终浓度5×)、10×TSA缓冲液及双蒸水按各组分终体积分别为1μL、1μL、1μL和2μL配成混合溶液。转入HSP-96孔反应板,每个孔5μL;加配体小分子化合物每孔5μL,终浓度200μM。室温离心1000rpm,1min,使体系充分混合。弱光冰浴30min以上,方可放入RT-PCR仪测试。设置温度从30℃到80℃,每升高0.5℃检测一次,每5s检测一次。实验结果:本发明实施例1-7制备得到的化合物对RORγ蛋白活性的影响数据如表3所示。表3序号名称ΔTm(℃)1实施例1制得的化合物7.82实施例2制得的化合物10.13实施例3制得的化合物64实施例4制得的化合物4.25实施例5制得的化合物1.56实施例6制得的化合物1.57实施例7制得的化合物6.38阳性抑制剂T09013177.79阳性抑制剂UA7.0实验结果表明:本发明化合物对RORγ蛋白具有很好的稳定作用,特别是实施例1、2制得的化合物对RORγ蛋白的稳定作用比对照药T0901317更好。实施例11本实施例评价实施例1、实施例2、实施例4制得的化合物在细胞中对RORγ以及其同源蛋白的特异性。实验材料:人肾上皮细胞系293T细胞;含有10%胎牛血清的DMEM培养基;96孔板透明板;双报告基因检测试剂盒;Opti-MEM试剂;Lipo-fectamine2000转染试剂;重组质粒:Gal4-RORγLBD:25ng,RORE_Luc:25ng,pG5-luc、Renilla;阳性抑制剂:T0901317。实验方法:人肾上皮细胞系293T细胞,用含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养。转染前一天将细胞制备与96孔板中,细胞密度为1.5x104个/孔。贴壁生长24小时后进行瞬时转染,采用双报告基因共转染的方法,转染试剂为Lipo-fectamine2000,用Opti-MEM试剂分别稀释转染试剂和质粒。Gal4-RORγLBD每孔25ng;pG5-luc基因每孔25ng;Renilla每孔5ng,共转染24小时后加入不同浓度的化合物,孵育24小时后,采用Luciferase双报告基因检测试剂盒,检测发光信号,每个样品3个复孔,利用软件计算IC50值(半抑制浓度)。实验结果:本发明实施例1、实施例2、实施例4制得的化合物在细胞中对RORγ以及其同源蛋白的特异性表征数据如表4所示。表4实验结果表明:本发明化合物对RORγ具有特异的选择性,特别是实施例1、2制得的化合物选择性更优(表格中NA表示无抑制作用),实施例4制得的化合物对RORα的抑制率为37%。实施例12本实施例采用ITC检测技术测定本发明化合物与蛋白结合的活性实验。实验材料:测定热量变化的仪器为ITC200(Microcal,GEHealthcare公司生产);稀释试剂所使用的缓冲溶液配比为:50mMHEPES、150mMNaCl、0.5mMTCEP和pH7.5。实验方法:所有实验均在25℃下进行,同时在1000rpm下搅拌ITC缓冲液(50mMHEPES,150mMNaCl,0.5mMTCEP和pH7.5)。使用0.5μL的初始注射进行所有配体的RORγ注蛋白滴定,然后进行20次相同的2μL相注射,每次注射持续4秒,注射间隔180秒。将配体和RORγ配蛋白的储备溶液用ITC缓冲液稀释成化合物滴定前浓度30μM,蛋白质浓度为300μM。反应缓冲液中DMSO的最终浓度小于总体积的0.25%。在所有情况下,采用单一结合位点模式(n=1),并使用非线性的最小二乘算法来获得化学计量(n)、焓变(ΔH)和结合常数(Kd)的最佳拟合值。随后利用公式ΔG=ΔH-TΔS=-RTlnK计算热力学参数,其中ΔG,ΔH,ΔS,T和R分别是自由能变化、焓变、熵变、实验温度、气体常数。采用MicroCalTMOrigin7软件用收集和处理数据。实验结果:本发明实施例1、实施例2、实施例4制得的化合物与蛋白结合的活性实验数据如表5所示。表5实验结果表明:本发明所述化合物对RORγ具有很好的结合作用。实施例13本实施例评价实施例1、实施例2、实施例4制得的化合物和RORγ拮抗剂SR2211和药物恩杂鲁胺对不同细胞系的抑制作用。实验材料:荧光信号检测仪器EnSpireAlpha2390多功能酶标仪(PerkinElmer公司生产);384孔底透微孔板;Cell-TiterGLO发光试剂;测试的癌细胞;细胞培养所需的培养基和胎牛血清。实验方法:在384孔底透微孔板中铺入20μL介质的500-1000个/孔的待测细胞(实际细胞数量的选取与细胞周期和细胞自身体积有关)。12小时后,每孔加入10μL含有化合物(化合物浓度由5nM到100nM)的培养介质。与化合物孵育72-144h小时后,每孔加入Cell-TiterGLO试剂25-T,震板20min,使细胞裂解。孵育10min后,离心1min,测定luminescence384信号值。使用GraphPadPrism软件拟合抑制曲线,获得IC50。实验结果:本发明实施例1、实施例2制得的化合物和RORγ拮抗剂SR2211和药物恩杂鲁胺对以下各肿瘤细胞系的抑制数据如表6和表7所示。表6表7实验结果表明:本发明化合物对前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、急性白血病、肺癌、骨肉瘤、宫颈癌细胞都有不同程度的抑制作用(表中NA表示无抑制效果;~标记的数值为估值;括号中的数值为抑制率)。实施例14本实施例对实施例1、实施例2和实施例4制得的化合物进行药物代谢动力学评价。实验材料:药代动力学分析由上海的MedicilonCorporation公司分析。12只Sprague和Dawley大鼠由上海Super--B&KlaboratoryanimalCorp.Ltd提供。实验方法:将化合物溶解于DMSO:PEG400:20%HP-400(5:40:55,v:v:v)中作为储备溶液(0.4mg/mL,静脉注射;1mg/mL,口服)。将储备溶液以10mg/kg的剂量口服给予3只SD大鼠,并以2mg/kg的单剂量静脉内给予3只SD大鼠。在口服给药前和口服给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时,从颈静脉采集血液。在静脉注射给药前和在静脉注射给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时,从颈静脉采集血液。将约200μL血液样品收集到肝素化管中,然后立即以8000转/分钟离心6分钟,获得的血浆储存-80℃直至分析。实验结果:实施例1、实施例2和实施例4制得的化合物的各项药物代谢动力学数据如表8所示:表8实验结果表明:本发明化合物具有较好的药代动力学性质,化合物1和2口服生物利用度优于化合物4(表中-表示无测定数值)。申请人声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的联苯胺类化合物及其应用,但本发明并不局限于上述实施例,即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属
技术领域
的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。以上详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于上述实施方式中的具体细节,在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本发明的保护范围。另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合,为了避免不必要的重复,本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。当前第1页1 2 3 
再多了解一些
当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1