一种苄胺酰类衍生物及其在制备抗炎药物中的用途的制作方法

文档序号:17917980发布日期:2019-06-14 23:54
一种苄胺酰类衍生物及其在制备抗炎药物中的用途的制作方法

本发明涉及药物化学技术领域,具体涉及一种苄胺酰类衍生物及其在制备抗炎药物中的用途。



背景技术:

炎症作为一种重要的病理过程在人体中十分常见,它本身是作为机体对于外来的或者异体的刺激的一种自身免疫应答。而当这种应答失调或者过分应答导致机体的自损伤时,就演变成了炎症。所以大多数的疾病都伴随着炎症的介导和发生,而炎症的介导和发生又使得疾病对于机体的损伤加重,如急性肺损伤、风湿性关节炎、糖尿病合并症、癌症、动脉粥样硬化、炎性肠病等。在这些过程中,促炎因子如TNF-α、IL-6、IL-1β等都起到了重要的作用。

目前现有技术中针对炎症的治疗药物较多,使用最多的药物包括类固醇和非甾体抗炎药,但都存在着这样或那样的副作用和抗药性。例如经典抗炎药物吲哚美辛具有很好的抗炎活性,但由于其是非选择性的COX-2抑制剂,因此患者常伴有严重的胃肠道不良反应,如恶心、呕吐、腹痛、腹泻、溃疡,有时并引起胃出血及穿孔;专利US5506224报道了一种羟胺的N-酰基-衍生物,其适用于特征如下的病理状态的治疗处理:由于神经原性和/或免疫原性过度刺激导致的肥大细胞的脱颗粒(degranulation)。然而,在其中公开的化合物的施用可能会伴随被认为是不利的血液中亚硝酸盐/硝酸盐水平的增加。由此可见,开发一类具有高效、广谱抗炎效果并且不良反应少的药物,成为本领域技术人员亟待解决的技术问题。



技术实现要素:

为了解决上述问题,本发明提供了一种苄胺酰类衍生物及其在抗炎药物中的应用。

本发明提供了式A所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物:

其中:

L选自C1~2亚烷基、

R1、R2各自独立地选自H、C1~6烷基或-C(O)R4;

n为0~10的整数;

R3选自H、C1~6烷基、C1~6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基;

R4为C1~6烷基。

进一步地,

所述化合物的结构如式I所示:

其中:

R1、R2各自独立地选自H、C1~6烷基或-C(O)R4;

n为0~10的整数;

R3选自H、C1~6烷基、C1~6烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基;

R4为C1~4烷基。

进一步地,R1、R2各自独立地选自H、甲基或-C(O)CH3。

进一步地,R3选自H、甲基、异丙基或苯基。

进一步地,所述化合物结构如下:

进一步地,

所述化合物的结构如式II所示:

其中,R1、R2、n具有与权利要求1中相同的定义。

进一步地,

所述化合物的结构如下所示:

本发明还提供了上述化合物或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物的制备方法,其特征是在于:包含如下步骤:

(a)将原料A与N,N'-羰基二咪唑反应,得到化合物B;

(b)将步骤(a)所得化合物B不经分离,直接加入3,4-二甲氧基苯基伯胺进行反应,反应结束后,经乙酸乙酯萃取,硅胶柱层析分离,得到化合物C;

(c)将化合物C在冰浴下加入BBr3,室温下反应,反应结束后,反应产物经枸橼酸分解,乙酸乙酯萃取,硅胶柱层析分离,得到化合物D;

(d)将化合物D在吡啶存在条件下与乙酸酐反应,反应结束后,反应产物经乙酸乙酯萃取,经枸橼酸分解,硅胶柱层析分离,得到化合物E;

其中,所述原料A具有如下结构式:

化合物B具有如下结构式:

化合物C具有如下结构式:

化合物D具有如下结构式:

化合物E具有如下结构式:

本发明还提供了上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物在制备抗炎药物中的用途。

本发明还提供了一种抗炎药物组合物,其特征在于:它是以权利要求1~8任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物,加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

本发明中,“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。

本发明中,碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示,例如,前缀Ca~b烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基,包括直链烷基和支链烷基。因此,例如,C1~6烷基是指包含1~6个碳原子的直链烷基和支链烷基。

本发明中,取代基“-C(O)R4”的结构式为

本发明中,“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。

本发明中,“溶剂合物”指本发明化合物与药学上可接受的溶剂形成溶剂合物,其中,所述药学上可接受的溶剂包括(但并不限于):水、乙醇、甲醇、异丙醇、丙二醇、四氢呋喃、二氯甲烷。

所述“药学上可接受的辅料”,它具有一定生理活性,但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位,而仅仅发挥辅助功效,这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用,是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用,仍然属于本发明保护的范围。

本发明提供了一类式I所示的苄胺酰类衍生物及其应用,该化合物能够显著抑制LPS诱导的一氧化氮(NO)产生,具有较强的抗炎能力,并且细胞毒性小,可以应用于临床上抗炎药物的制备。

显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为本发明化合物对细胞内NO的抑制率。

图2为本发明化合物的细胞毒性检测。

图3为细胞内NO与本发明化合物的浓度依赖关系,及本发明化合物的IC50值。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品,通过购买市售产品获得。

实验例1本发明化合物的合成

化合物2:

N-(3,4-dimethoxybenzyl)nonanamide(0.154g,0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL),加入三溴化硼(57μL,0.6mmol)-室温反应2h,加水30mL,乙酸乙酯50mL,枸橼酸0.5g,搅拌反应2h,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(3:1)),得化合物2(0.112g,80%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.44(s,1H),6.86(d,J=1.9Hz,1H),6.83(d,J=8.0Hz,1H),6.64(dd,J=8.0,2.0Hz,1H),6.26(s,1H,OH),6.01(s,1H,OH),4.32(d,J=5.9Hz,2H),2.32–2.17(m,2H),1.70–1.55(m,2H),1.27(q,J=7.5,6.7Hz,10H),0.89(t,J=6.9Hz,3H);13C NMR(101MHz,DMSO-D6)δ172.4,145.5,144.5,131.0,118.6,115.7,115.4,42.1,35.9,31.7,29.2,29.2,29.1,25.8,22.6,14.4。

化合物3:

合成辣椒碱(0.147g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加入加水稀释30mL,乙酸乙酯50mL,洗涤,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物3。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.98(d,J=8.1Hz,1H),6.90(d,J=1.9Hz,1H),6.84(dd,J=8.0,1.9Hz,1H),5.68(s,1H),4.42(d,J=5.7Hz,2H),3.82(s,3H),2.31(s,3H),2.21(t,J=7.6Hz,2H),1.65(q,J=7.3Hz,2H),1.28(d,J=13.1Hz,13H),0.87(t,J=6.7Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.01,169.14,151.20,139.06,137.44,122.84,120.02,112.16,55.89,43.42,36.82,31.81,29.34,29.32,29.15,25.78,22.64,20.65,14.08.

化合物4:

将化合物2(0.140g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加水稀释30mL,乙酸乙酯50mL,萃取,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物4(0.149g,82%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.23–7.17(m,2H),7.15(d,J=4.6Hz,1H),5.75(s,1H),4.46(d,J=5.8Hz,2H),2.31(s,6H),2.28–2.19(m,2H),1.72–1.62(m,2H),1.34–1.22(m,10H),0.90(td,J=6.6,4.1Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.1,168.4,168.3,142.1,141.3,137.4,126.1,123.6,122.8,42.8,36.7,31.9,29.5,29.4,29.3,25.7,22.7,20.6,20.6,14.1。

化合物5:N-(3,4-dimethoxybenzyl)-3-methylbutanamide

精密吸取CDI的无水四氢呋喃溶液(9.7mg/mL)10mL于100mL烧瓶中(CDI0.097g,0.6mmol),加入异戊酸(0.051g,0.5mmol),常温下搅拌反应3h,加入3,4-二甲氧基苄胺(0.083g,0.5mmol),搅拌反应过夜,旋蒸四氢呋喃,残渣加入乙酸乙酯40mL和水50mL萃取,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(5:1),即得化合物5(0.101g,80%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(d,J=1.0Hz,1H),6.78(s,2H),4.34(d,J=5.7Hz,2H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),2.07(s,2H),0.93(d,J=6.4Hz,6H);13CNMR(101MHz,CDCl3)δ172.7,149.1,148.3,135.2,131.1,120.0,111.1,55.9,55.8,46.1,43.3,26.3,22.5。

化合物6:N-(3,4-dimethoxybenzyl)pentanamide

精密吸取CDI的无水四氢呋喃溶液(9.7mg/mL)10mL于100mL烧瓶中(CDI0.097g,0.6mmol),加入正戊酸(0.052g,0.5mmol),常温下搅拌反应3h,加入3,4-二甲氧基苄胺(0.085g,0.5mmol),搅拌反应过夜,旋蒸四氢呋喃,残渣加入乙酸乙酯40mL和水50mL萃取,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(5:1),即得化合物6(0.109g,86%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.99–6.90(m,1H),6.90(s,1H),6.85(d,J=1.9Hz,1H),4.31(s,2H),3.83(d,J=4.1Hz,6H),2.25(t,J=7.5Hz,2H),1.72–1.52(m,2H),1.46–1.26(m,2H),0.95(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(101MHz,CD3OD)δ174.7,149.1,148.3,131.6,119.8,111.5,111.3,55.1,55.0,42.4,35.5,27.9,22.0,12.7。

化合物8:N-(3,4-dimethoxybenzyl)octanamide

称取CDI(0.97g,6mmol)溶于无水四氢呋喃(100mL)中,得每1mL含CDI 9.7mg四氢呋喃溶液,吸取上述溶液10mL于100mL烧瓶中,加入辛酸(0.072g,0.5mmol),常温下搅拌反应3h,加入3,4-二甲氧基苄胺(0.083g,0.5mmol),搅拌反应过夜,旋蒸四氢呋喃,残渣加入乙酸乙酯40mL和水50mL萃取,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(5:1),即得化合物8(0.125g,85%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.79(s,3H),5.83(s,1H),4.34(d,J=5.7Hz,2H),3.84(s,6H),2.25–2.12(m,2H),1.69–1.57(m,2H),1.26(dd,J=11.3,4.7Hz,8H),0.93–0.77(m,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.0,149.1,148.4,131.1,120.1,111.2,111.1,55.9,55.9,43.4,36.8,31.7,29.3,29.0,25.8,22.6,14.1。

化合物9:N-(3,4-dimethoxybenzyl)decanamide

精密吸取CDI的无水四氢呋喃溶液(9.7mg/mL)10mL于100mL烧瓶中(CDI0.097g,0.6mmol),加入正葵酸(0.086g,0.5mmol),常温下搅拌反应3h,加入3,4-二甲氧基苄胺(0.083g,0.5mmol),搅拌反应过夜,旋蒸四氢呋喃,残渣加入乙酸乙酯60mL和水50mL萃取,滤过,滤饼用乙酸乙酯溶解,用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(5:1),即得化合物9(0.142g,88%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.80(s,3H),4.36(d,J=5.7Hz,2H),3.86(s,6H),2.30–2.11(m,2H),1.68–1.57(m,2H),1.26(d,J=15.5Hz,12H),0.86(t,J=6.9Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.0,149.1,148.5,131.1,120.1,111.2,111.1,56.0,55.9,43.4,36.9,31.9,29.5,29.4,29.3,29.3,25.8,22.7,14.1。

化合物10:N-(3,4-dimethoxybenzyl)-5-phenylpentanamide

精密吸取CDI的无水四氢呋喃溶液(9.7mg/mL)10mL于100mL烧瓶中(CDI0.097g,0.6mmol),加入苯戊酸(0.089g,0.5mmol),常温下搅拌反应3h,加入3,4-二甲氧基苄胺(0.084g,0.5mmol),搅拌反应过夜,旋蒸四氢呋喃,残渣加入乙酸乙酯40mL和水50mL萃取,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(5:1),即得化合物10(0.137g,83%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.26(t,J=7.3Hz,2H),7.22–6.95(m,3H),6.79(d,J=2.9Hz,3H),5.72(s,1H),4.35(d,J=5.7Hz,2H),3.86(s,3H),3.82(s,3H),2.62(t,J=7.3Hz,2H),2.21(t,J=7.2Hz,2H),1.80–1.47(m,4H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ172.6,149.2,148.5,142.2,131.0,128.4,128.3,125.8,120.1,111.2,56.0,55.9,43.4,36.7,35.7,31.1,25.4。

化合物11:N-(3,4-dihydroxybenzyl)-3-methylbutanamide

化合物5(0.125g,0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL),冰浴下加入三溴化硼(57μL,0.6mmol)-室温反应2h,加水30mL,乙酸乙酯50mL,枸橼酸0.5g,搅拌反应2h,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(3:1)),得化合物16(0.087g,78%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.79–6.66(m,2H),6.65–6.57(m,1H),4.22(d,J=3.8Hz,2H),2.10(d,J=2.1Hz,2H),1.07–0.83(m,6H);13C NMR(101MHz,CD3OD)δ173.86,145.0,144.2,130.1,118.9,114.8,114.6,50.8,45.0,42.4,26.1,21.3;HRMSESI:[M+Na]+,found 246.10953,C12H17NO3Na,246.11061requires。

化合物12:N-(3,4-dihydroxybenzyl)pentanamide

化合物6(0.126g,0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL),冰浴下加入三溴化硼(57μL,0.6mmol)-室温反应2h,加水30mL,乙酸乙酯50mL,枸橼酸0.5g,搅拌反应2h,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(3:1)),得化合物12(0.092g,82%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.92(s,1H),6.81–6.67(m,2H),6.61(dd,J=8.1,2.0Hz,1H),4.21(s,2H),2.23(t,J=7.5Hz,2H),1.62(dd,J=8.8,6.5Hz,2H),1.46–1.31(m,2H),0.95(t,J=7.4Hz,3H);13C NMR(101MHz,CD3OD)δ174.6,145.0,144.2,130.1,118.8,114.8,114.6,42.4,35.5,27.9,22.0,12.7。

化合物14:N-(3,4-dihydroxybenzyl)octanamide

化合物8(0.146g,0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL),冰浴下加入三溴化硼(57μL,0.6mmol)-室温反应2h,加水30mL,乙酸乙酯50mL,枸橼酸0.5g,搅拌反应2h,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(3:1)),得化合物14(0.108g,81%)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.78–6.69(m,1H),6.61(dd,J=8.1,2.1Hz,1H),4.21(s,1H),2.22(t,J=7.5Hz,1H),1.64(d,J=7.2Hz,1H),1.38–1.27(m,8H),0.91(d,J=7.1Hz,1H);13C NMR(101MHz,CD3OD)δ174.6,145.0,144.2,130.1,118.8,114.8,114.6,42.4,35.7,31.5,28.9,28.7,25.7,22.3,13.0。

化合物15:N-(3,4-dihydroxybenzyl)decanamide

化合物9(0.161g,0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL),冰浴下加入三溴化硼(57μL,0.6mmol)-室温反应2h,加水30mL,乙酸乙酯50mL,枸橼酸0.5g,搅拌反应2h,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(3:1)),得化合物15(0.121g,82%)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.81(s,2H),8.13(t,J=5.7Hz,1H),6.65(d,J=8.0Hz,2H),6.48(dd,J=8.0,1.9Hz,1H),4.07(d,J=5.8Hz,2H),2.09(t,J=7.4Hz,2H),1.57–1.43(m,2H),1.25(s,12H),0.87(t,J=6.8Hz,3H);13C NMR(101MHz,DMSO-D6)δ172.3,145.5,144.5,131.0,118.6,115.7,115.4,42.1,35.8,31.8,29.4,29.3,29.2,29.2,25.8,22.6,14.45。

化合物16:N-(3,4-dihydroxybenzyl)-5-phenylpentanamide

化合物10(0.163g,0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL),冰浴下加入三溴化硼(57μL,0.6mmol)-室温反应2h,加水30mL,乙酸乙酯50mL,枸橼酸0.5g,搅拌反应2h,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(3:1)),得化合物16(0.117g,78%)。1H NMR(400MHz,DMSO-D6)δ8.84(s,1H,OH),8.75(s,1H,OH),8.16(t,J=5.8Hz,1H),7.38–7.23(m,2H),7.18(d,J=6.8Hz,3H),6.65(dd,J=5.0,3.0Hz,2H),6.49(dd,J=8.0,2.0Hz,1H),4.08(d,J=5.8Hz,2H),2.57(t,J=7.0Hz,2H),2.14(t,J=6.8Hz,2H),1.55(t,J=3.5Hz,4H);13C NMR(101MHz,DMSO-D6)δ172.2,145.5,144.5,142.6,131.0,128.7,126.1,118.6,115.7,115.4,42.2,35.7,35.4,31.1,25.5。

化合物17:

6-苯基己二酮(0.528g,3mmol)溶于10mL四氢呋喃中,加入吡咯烷100μL和冰醋酸60μL,常温搅拌10min后,加入3,4-二羟基苯甲醛(0.138g,1mmol),在氮气保护下,50℃反应20h,加入水80mL,用乙酸乙酯80mL萃取2次,合并乙酸乙酯层,乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥,减压回收乙酸乙酯层,硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(4:1)洗脱,减压回收乙酸乙酯层,得化合物17。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.49(d,J=16.1Hz,1H),7.29(t,J=3.6Hz,2H+CHCl3),7.24–7.12(m,4H),7.03(dd,J=8.2,2.0Hz,1H),6.91(d,J=8.3Hz,1H),6.59(d,J=16.1Hz,1H),2.68(dt,J=10.0,6.6Hz,4H),1.72(dt,J=10.4,3.5Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ201.86,146.98,144.07,143.71,142.16,128.40,128.33,127.32,125.78,123.84,122.96,115.50,114.45,40.40,35.73,31.04,24.18.

化合物18:4-((3-methylbutanamido)methyl)-1,2-phenylene diacetate

化合物11(0.111g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加入水30mL,乙酸乙酯50mL,萃取,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物18(0.122g,79%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.15(d,J=3.7Hz,2H),7.12(d,J=2.7Hz,1H),4.41(d,J=5.8Hz,2H),2.29(s,6H),2.20–1.88(m,2H),1.27(m,1H),1.06–0.85(m,6H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ172.6,168.4,168.3,142.1,141.3,137.5,126.0,123.6,122.9,46.0,42.7,26.2,22.5,20.6;.

化合物19:4-(pentanamidomethyl)-1,2-phenylene diacetate

化合物12(0.111g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加水稀释30mL,乙酸乙酯50mL,萃取,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物19(0.129g,84%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19–7.11(m,2H),7.09(d,J=4.8Hz,1H),5.96(s,1H),4.38(d,J=5.8Hz,2H),2.27(d,J=4.0Hz,6H),2.23–2.11(m,2H),1.62(q,J=7.1Hz,2H),1.42–1.22(m,2H),0.90(t,J=7.3Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.1,168.4,168.3,142.1,141.3,137.5,126.0,123.6,122.9,42.7,36.4,27.8,22.4,20.6,13.8;HRMSESI:[M+Na]+,found 330.13226,C16H21NO5Na,330.13174,requires。

化合物21:4-(octanamidomethyl)-1,2-phenylene diacetate

化合物14(0.133g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加水稀释30mL,乙酸乙酯50mL,萃取,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物18(0.139g,80%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.22–7.17(m,2H),7.16–7.12(m,1H),5.74(s,1H),4.46(d,J=5.7Hz,2H),2.31(s,6H),2.28–2.14(m,2H),1.67(d,J=7.5Hz,2H),1.31(d,J=10.5Hz,2H),0.89(d,J=7.0Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.1,168.3,168.3,142.1,141.3,137.5,126.1,123.6,122.9,42.7,36.8,36.7,31.7,29.3,29.0,25.7,22.6,20.6,14.1。

化合物22:4-(decanamidomethyl)-1,2-phenylene diacetate

化合物15(0.147g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加入加水稀释30mL,乙酸乙酯50mL,洗涤,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物22(0.151g,80%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19–7.13(m,2H),7.13–7.10(m,1H),5.75(s,1H),4.42(d,J=5.8Hz,2H),2.28(s,6H),2.24–2.11(m,2H),1.63(dd,J=14.6,7.0Hz,2H),1.40–1.18(m,12H),0.87(d,J=7.0Hz,3H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ173.2,168.3,168.3,142.1,141.3,137.4,126.1,123.6,123.0,42.8,36.7,31.8,29.7,29.4,29.3,29.3,25.7,22.7,20.6,20.6,14.1;HRMSESI:[M+Na]+,found400.20990,C21H31NO5Na,400.20999requires。

化合物23:4-((5-phenylpentanamido)methyl)-1,2-phenylene diacetate

化合物16(0.150g,0.5mmol)溶于无水吡啶(5mL),加入醋酐1.0mL,反应过夜,加水稀释30mL,乙酸乙酯50mL,萃取,乙酸乙酯层用2%枸橼酸水溶液洗涤,弃去水液,乙酸乙酯溶液用无水硫酸钠脱水,回收乙酸乙酯,残渣用硅胶柱层析(石油醚-乙酸乙酯(4:1)),即得化合物23(0.158g,82%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30–7.23(m,2H),7.17(t,J=6.9Hz,3H),7.12(s,2H),7.09(s,1H),5.84(s,1H),4.38(d,J=5.8Hz,2H),2.63(t,J=7.1Hz,2H),2.27(d,J=3.7Hz,6H),2.21(t,J=7.1Hz,2H),1.67(dt,J=10.2,6.4Hz,4H);13C NMR(101MHz,CDCl3)δ172.8,168.3,168.3,142.2,142.1,141.3,137.4,128.4,128.3,126.1,125.8,123.6,123.0,42.8,36.5,35.7,31.1,25.3,20.6;HRMSESI:[M+H]+,found 384.18030,C22H26NO5,384.18110requires。

以下通过实验例证明本发明的有益效果。

实验例1抗炎活性检测

1、实验方法:

(1)实验细胞的培养

将含有10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素的DMEM高糖培养基(完全培养基)和PBS溶液分别置于37℃水浴预热至37℃,从液氮罐中取出细胞,立即置于37℃中水浴3min,向培养皿中加入配制的9mL的完全培养基和冻存的细胞悬浊液1mL,在饱和湿度、5%CO2、37℃标准环境下静置孵育至少24h。次日换液并检查细胞状态。

由于RAW264.7细胞新陈代谢旺盛,生长较快,每日需用PBS清洗细胞2-3次,细胞铺满培养皿达80%时进行传代。传代前弃原培养基,用预温PBS清洗2次,加入完全培养基3mL直接轻轻吹打细胞,取10μL细胞悬液与0.4w/v%胎盘蓝1:1体积混合进行细胞计数,保证细胞成活率>85%。

(2)抗炎活性检测方法

通过测定细胞中NO浓度检测本发明化合物的抗炎活性,采用Griess reagent法测定NO的浓度。将RAW264.7细胞以6X 104cells/well的密度接种于24孔细胞培养板内,每组设3个复孔,培养过夜。用1μg/mL LPS诱导,24h后分别提取各组的细胞上清,NO溶解于水后可以形成亚硝酸盐,通过测定上清液中亚硝酸盐(NO2-)的含量,即可以间接反应细胞上清培养液中NO的含量。

用Griess reagent试剂测量各组上清液中亚硝酸盐(NO2-)的浓度的具体操作步骤如下:预先20min将Griess reagent I和Griess reagent II从4℃冰箱中取出,以恢复室温,注意避光。为绘制NO标准曲线,将标准品亚硝酸盐C nitrite)梯度稀释(如:100,50,25,12.5,6.25,3.125,1.563μmol/mL)。在暗环境下,在96孔板每个反应孔中加入50μl稀释的标准品或待测样本,每个反应孔均设3个复孔,然后每个反应孔加入Griess reagent I,再加入Griess reagent II 50μL/well,设定酶标仪激发波长为540nm,吸收波长为670nm,在30min内测定各个反应孔的吸收光值(OD值)。根据标准品的浓度和相应的OD值绘制NO标准曲线,根据标准曲线计算样本中的NO含量。

2、实验结果:

实验结果如图1所示,可以看出本发明化合物能够有效抑制LPS诱导的NO产生,其中化合物3、4、15、17、23抑制效果最为显著,说明本发明化合物具有较强的抗炎能力。

此外,通过图2所示细胞中NO含量与本发明化合物的浓度依赖关系图,计算出本发明化合物对NO的半抑制浓度(IC50),可以看出,本发明化合物的IC50值为1.73~20.51μM,进一步证明其能够有效抑制LPS诱导的NO产生,说明本发明化合物具有较强的抗炎能力。

实验例2细胞毒性检测

1、实验方法:

在实验例2采用Griess reagent法测定NO的浓度过程中,提取各组的细胞上清后,用100μL含有10%的amblue的培养基换掉96孔板实验孔的旧培养基,然后放回细胞培养箱孵育30min,当新培养基颜色由靛青蓝开始变成粉红色时使用荧光酶标仪进行检测,激发光波长在530-560nm之间,发射光波长为590nm,记录相对荧光单位(RFU)。

2、实验结果:

实验结果如图2所示,可以看出本发明化合物未见明显细胞毒性,说明本发明提供的苄胺酰类衍生物毒性很小,生物安全性良好。

综上所述,本发明提供了一类式I所示的苄胺酰类衍生物,该化合物能够显著抑制LPS诱导的NO产生,具有较强的抗炎能力,并且细胞毒性小,可以应用于临床上抗炎药物的制备。

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