用于产生苄基异喹啉生物碱(BIA)的重组宿主细胞和苄基异喹啉生物碱(BIA)的新的制造方法

文档序号:25541876发布日期:2021-06-18 20:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于产生苄基异喹啉生物碱(bia)的重组宿主细胞,其表达了异种的芳香族醛合成酶(aas)、芳香族氨基酸脱羧酶(aaad)的野生型或突变体。

2.根据权利要求1所述的重组宿主细胞,其中,苄基异喹啉生物碱(bia)为四氢罂粟林(thp)、去甲乌药碱、3-羟基乌药碱、3-羟基-n-甲基乌药碱和/或网脉番荔枝碱。

3.根据权利要求1或2所述的重组宿主细胞,其中,所述异种的种属为昆虫、植物或微生物。

4.根据权利要求3所述的重组宿主细胞,其中,所述异种的种属为选自由家蚕、佛罗里达弓背蚁、西方蜜蜂、埃及伊蚊、及黑腹果蝇组成的组中的昆虫、罂粟或恶臭假单胞菌。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组宿主细胞,其中,宿主细胞为大肠杆菌。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的重组宿主细胞,其中,芳香族醛合成酶(aas)为3,4-二羟基苯基乙醛合成酶(dhpaas)、4-羟基苯基乙醛合成酶(4-hpaas)。

7.根据权利要求6所述的重组宿主细胞,其中,芳香族醛合成酶(aas)为昆虫来源,且芳香族醛合成酶(aas)的突变体中的突变为选自由asn192his、phe79tyr和tyr80phe组成的组中的至少1个。

8.根据权利要求6所述的重组宿主细胞,其中,芳香族氨基酸脱羧酶(aaad)为植物来源的酪氨酸脱羧酶(tydc),且酪氨酸脱羧酶(tydc)的突变体中的突变为选自由leu205asn、phe99tyr和tyr98phe组成的组中的至少1个,或为选自由his203asn、phe101tyr和tyr100phe组成的组中的至少1个。

9.根据权利要求6所述的重组宿主细胞,其中,芳香族氨基酸脱羧酶(aaad)为微生物来源的多巴脱羧酶(ddc),且多巴脱羧酶(ddc)的突变体中的突变为选自由tyr79phe、phe80tyr和his181asn组成的组中的至少1个。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的重组宿主细胞,其还表达了去甲乌药碱合成酶(ncs)。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的重组宿主细胞,其还表达了选自由去甲乌药碱6-o-甲基转移酶(6’omt)、3’-羟基-n-甲基-(s)-乌药碱-4’-o-甲基转移酶(4’omt)、乌药碱-n-甲基转移酶(cnmt)、及n-甲基乌药碱3-羟化酶组成的组中的至少1种酶。

12.一种苄基异喹啉生物碱(bia)的制造方法,其包括在含有l-多巴或酪氨酸的培养基中培养权利要求1至11中任一项所述的重组宿主细胞的工序。

13.一种苄基异喹啉生物碱(bia)的制造方法,其包括在无细胞体系中使芳香族醛合成酶(aas)、芳香族氨基酸脱羧酶(aaad)的野生型或突变体作用于l-多巴或酪氨酸的工序。

14.根据权利要求13所述的制造方法,其特征在于,芳香族醛合成酶(aas)、芳香族氨基酸脱羧酶(aaad)的野生型或突变体是由权利要求1至11中任一项所述的重组宿主细胞得到的酶。


技术总结
本发明的目的在于,提供能够高效地且容易地生产苄基异喹啉生物碱(BIA)、尤其是四氢罂粟林、3‑羟基乌药碱、3‑羟基‑N‑甲基乌药碱和/或网脉番荔枝碱的重组宿主细胞,并且提供使用该宿主细胞高效地且容易地制造它们的方法。本发明为表达芳香族醛合成酶(AAS)、芳香族氨基酸脱羧酶(AAAD)的野生型或突变体的、用于产生苄基异喹啉生物碱(BIA)、其中特别是四氢罂粟林(THP)、3‑羟基乌药碱、3‑羟基‑N‑甲基乌药碱和/或网脉番荔枝碱的重组宿主细胞。

技术研发人员:吴风;莲沼诚久;荒木通启;近藤昭彦
受保护的技术使用者:国立大学法人神户大学
技术研发日:2019.10.30
技术公布日:2021.06.18
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