一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物、制备方法及应用与流程

本发明属于抗肿瘤化合物及其制备方法和应用，具体涉及一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物、制备方法及应用。

背景技术：

肿瘤现已成为人类健康的第二大杀手，恶性肿瘤发病率约为22.1％，死亡率约为12.9％，至少每5个人中就有一个人患有癌症，每8个人中就有一个死于癌症！癌症具有发病率高、死亡率高、年轻化和区域化等特点。

尽管目前临床上已应用的抗肿瘤药物有很多种，包括化疗药物和靶向药物，但这些抗肿瘤药物普遍价格昂贵，副作用大。另外，还有一些抗肿瘤药物虽活性较好，但由于提取来源受限，仍然无法进行大范围生产和推广，如化疗药物紫杉醇，尽管其活性较好，尤其对于乳腺癌和宫颈癌，但因来源和产量有限，迄今仍无法用全合成的方法进行大规模生产，同时，天然含量又极低，致使其终端价格居高不下，使患者负担较重。因此，仍需继续研发活性好且成本低的抗肿瘤药物，尤其是副作用较低的天然抗肿瘤药物。

技术实现要素：

本发明为解决现有抗肿瘤药物虽种类较多，但仍然存在价格高昂，患者使用负担重，且副作用大，尤其是部分抗肿瘤药物的提取来源和产量有限，无法通过全合成进行大规模生产，造成量产推广困难的技术问题，提供一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物、制备方法及应用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物，其特殊之处在于，所述菲类化合物的结构式为

所述菲类化合物的分子式为c31h28o7。

本发明还公开了一种如上所述具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：

s1，从马牙七中提取获得总浸膏

取马牙七干燥根茎，通过室温下冷浸或加热回流进行多次提取，合并每一次的提取液，浓缩得到总浸膏；

s2，对总浸膏进行萃取

将经步骤s1得到的总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行至少一次萃取，分别得到有机层，减压除去石油醚和乙酸乙酯后，分别得到石油醚萃取层和乙酸乙酯萃取层；

s3，对乙酸乙酯萃取层进行柱层析分离

s3.1，将经步骤s2得到的乙酸乙酯萃取层上样于硅胶柱，以氯仿-甲醇作为洗脱液，按氯仿-甲醇的体积比为100：0～0：100进行梯度洗脱，分别收集并合并相同流份，得到第一次过柱部分；

s3.2，取经步骤s3.1得到的第一次过柱部分中极性为80:20的流份，经硅胶柱色谱进行分离，以石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，分别收集相同流份，得到第二次过柱部分；

s3.3，将经步骤s3.2得到的第二次过柱部分中极性为5:1的流份经sephadexlh-20柱色谱进行洗脱，以甲醇-水作为作为洗脱剂，得到具有抗肿瘤作用的菲类化合物。

进一步地，步骤s1中，通过加热回流进行多次提取；

所述加热回流具体为，采用甲醇或体积分数为75％～95％的乙醇作为提取剂，马牙七干燥根茎与提取剂的料液比为1kg：1～5l，加热回流提取1～5次，每次1～3h。

进一步地，步骤s1中，通过室温下冷浸进行多次提取；

所述室温下冷浸的次数为2～6次，每次8～24h。

进一步地，步骤s2中，所述将经步骤s1得到的总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行至少一次萃取，具体为：

将经步骤s1得到的总浸膏混悬于水中，再依次经石油醚和乙酸乙酯进行1～6次萃取；其中，所述总浸膏与水的体积比为1:1～1:4。

进一步地，步骤s2中，所述将经步骤s1得到的总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行至少一次萃取，具体为：

将经步骤s1得到的总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行1～6次超声波固液萃取。

进一步地，步骤s3.3中，所述以甲醇-水作为作为洗脱剂，其中，甲醇和水的体积比为100：0～98：2。

本发明中前述具有抗肿瘤作用的菲类化合物能够在制备抗肿瘤药物中应用。

另外，本发明中前述具有抗肿瘤作用的菲类化合物能够在制备抗肝癌药物中应用。

现有技术相比，本发明的有益效果是：

1.本发明具有抗肿瘤作用的菲类化合物，首次从陕西“七药”之一“马牙七”的根茎中分离得到的一种新的菲类化合物，结构为一个二氢菲的二聚体，经试验验证，具有抗肿瘤作用，对hepg2细胞具有良好的细胞毒作用，能够作为有效成分被开发为新的抗肿瘤药物；

“马牙七”是陕西“七药”的一种，是兰科虾脊兰属植物流苏虾脊兰的假鳞茎和全草，主要分布于陕南山区，在海拔1500-3500米的山地林下及草坡上分布较广，因此，可以在一定程度上降低使用成本，也有利于大规模生产推广。

2.本发明具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，提取分离方法简单易行，简便有效，成本低廉；经实验验证，采用本发明制备方法的到的菲类化合物纯度高；同时，本发明的制备方法易于推广使用，能够进行大规模生产，使本发明具有抗肿瘤作用的菲类化合物的推广更加可行。

3.本发明的制备方法中，对马牙七干燥根茎的提取可采用加热回流的方法，也可采用室温冷浸的方法；同时，对总浸膏的萃取，可采用混悬于水后进行萃取的方法，也可采用固液萃取的方法。均提供了多种具体的制备方法，便于在实际生产中根据使用需要进行选择。

4.本发明具有抗肿瘤作用的菲类化合物，经试验验证，在抗肿瘤方面，尤其是抗肝癌方面具有较好的作用，因此，能够被应用于抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌药物。

附图说明

图1为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的¹h-nmr图谱；

图2为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的¹³c-nmr图谱；

图3为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的dept图谱；

图4为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的¹h-¹hcosy图谱；

图5为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的hsqc图谱；

图6为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的hmbc图谱；

图7为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的noesy图谱；

图8为本发明实施例一得到的具有抗肿瘤作用的菲类化合物的hr-esi-ms图谱

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例和附图，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例并非对本发明的限制。

陕西“七药”主要来源于陕西及周边地区的植物药，为我国民间药的重要组成部分，是秦巴山区人民经过数百年的重复与验证以及在治病实践中逐步明确的具有确切疗效的民间草药，“七药”中的“七”是“奇”的变音，意思就是具有奇特疗效的草药。陕西“七药”是我国珍贵的医药文化遗产，应该得到继承和发扬。

“马牙七”作为陕西“七药”的一种，是兰科虾脊兰属植物流苏虾脊兰(calanthefimbriatafranch)的假鳞茎和全草，主要分布于陕南山区，常生长于海拔1500-3500米的山地林下及草坡上。其味淡，微辛、苦，性凉。有小毒。归胃、肝、肺经。具有清热解毒，消肿止痛，散瘀等功效，民间主要用于肝炎、咽炎和胃溃疡的治疗。其传统应用中并无抗肿瘤治疗的报道，在对其进行化学成分和生物活性的研究过程中发现其中一个新的菲类化合物具有很好的细胞毒活性，极具开发为抗肿瘤药物或先导化合物的潜力。

目前，国内外对整个虾脊兰属植物的研究主要集中于观赏价值、栽培技术以及育种方法等方面，对其有效成分及药理活性的研究报道十分有限。

本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体如下：

s1，取一定质量的马牙七干燥根茎，用体积为马牙七干燥根茎质量1～5倍量的甲醇或体积分数为75～95％的乙醇，在各自沸点附近加热回流提取1～6次，每次1～3小时；

或者室温下冷浸通过室温下冷浸2～6次进行提取，每次8～24h；

合并每一次的提取液，浓缩得到总浸膏；

s2，将经步骤s1得到的总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行至少一次萃取；

可以液液萃取，即将总浸膏混悬于水中，总浸膏和水的体积比为1:1～1:4，得到浸膏液，依次用等体积的有机溶剂萃取，其中，第一次萃取时用石油醚对浸膏液进行等体积萃取，之后每次萃取均是分离出上一次萃取后的有机层，将剩余的水层用有机溶剂等体积进行下一次萃取；每种溶剂各萃取1～6次，合并萃取液，常压或减压蒸馏除去有机溶剂，分别得到各萃取层和水层。有机溶剂包括石油醚和乙酸乙酯等，且萃取次序为先用极性小的溶剂，再用极性大的有机溶剂；

或者，可以固液萃取，将总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行1～6次超声波固液萃取；

分别得到有机层，减压除去石油醚和乙酸乙酯后，分别得到石油醚萃取层和乙酸乙酯萃取层；

s3，取乙酸乙酯萃取层，通过采用柱层析纯化等分离方法，得到本发明的菲类化合物。

柱层析纯化包括以下三个阶段：

第一阶段：将乙酸乙酯萃取层上样于硅胶柱，以氯仿-甲醇系统作为洗脱液，按体积比(100:0)～(0:100)进行梯度洗脱，收集并合并相同流份后，共得到33个流分，编号ea-1～ea-33，此部分为第一次过柱部分；

第二阶段：将第一次过柱部分所得到的ea-11流份经硅胶柱色谱进行分离，以石油醚-乙酸乙酯(5:1，3:1，v/v)进行梯度洗脱，得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)，此部分为第二次过柱部分；

第三阶段：将第二次过柱部分的ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱得到菲类化合物。

其中，在第三阶段sephadexlh-20柱色谱中以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，甲醇-水系统中甲醇和水的体积比为100:0～98:2。

实施例一

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，用体积量为马牙七干燥根茎质量5倍的甲醇加热回流提取3次，每次3小时，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏混悬于4倍量的水中，先用石油醚萃取4次，再用乙酸乙酯等体积萃取4次，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份，33个流份分别记做ea-1、ea-2……ea-33。

4)其中第11个流份，即ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5:1，3:1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到菲类化合物。

实施例二

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，用体积量为马牙七干燥根茎质量3倍的乙醇加热回流提取5次，每次1小时，其中，乙醇的体积分数为75％，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏混悬于3倍量的水中，先用石油醚萃取5次，再用乙酸乙酯等体积萃取5次，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第12个流份ea-12再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5:1，3:1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为98:2，得到菲类化合物。

实施例三

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，用体积量为马牙七干燥根茎质量1倍的乙醇加热回流提取4次，每次3小时，其中，乙醇的体积分数为95％，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行进行6次超声波固液萃取，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第11个流份ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5:1，3:1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为99:1，得到菲类化合物。

实施例四

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，用体积量为马牙七干燥根茎质量5倍的乙醇加热回流提取1次，每次2小时，其中，乙醇的体积分数为85％，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行进行1次超声波固液萃取，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第10个流份ea-10再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5：1，3：1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为99：1，得到菲类化合物。

实施例五

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，用体积量为马牙七干燥根茎质量3倍的甲醇加热回流提取4次，每次2小时，合并提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏混悬于4倍量的水中，先用石油醚萃取2次，再用乙酸乙酯等体积萃取2次，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第11个流份ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5：1，3：1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为98：2，得到菲类化合物。

实施例六

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，在室温下冷浸6次提取，每次18h，合并每次的提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏混悬于1倍量的水中，先用石油醚萃取5次，再用乙酸乙酯等体积萃取5次，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第11个流份ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5：1，3：1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为100:1，得到菲类化合物。

实施例七

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，在室温下冷浸2次提取，每次24h，合并每次的提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行进行4次超声波固液萃取，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第11个流份ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5:1，3:1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到菲类化合物。

实施例八

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，在室温下冷浸4次提取，每次8h，合并每次的提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏混悬于3倍量的水中，先用石油醚萃取6次，再用乙酸乙酯等体积萃取6次，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第11个流份ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5：1，3：1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为98.5:1.5，得到菲类化合物。

实施例九

一种具有抗肿瘤作用的菲类化合物的制备方法，具体方法如下：

1)取马牙七干燥根茎10kg，在室温下冷浸5次提取，每次12h，合并每次的提取液减压回收溶剂，得总浸膏；

2)将总浸膏依次经石油醚和乙酸乙酯进行进行3次超声波固液萃取，萃取层减压除去有机溶剂后分别得到石油醚层和乙酸乙酯层。

3)取乙酸乙酯萃取层100g，首先通过采用硅胶柱色谱，氯仿/甲醇按体积比(v/v)为100:0～0:100进行梯度洗脱，每400ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后共得到33个流份(ea-1～ea-33)。

4)其中第11个流份ea-11再一次经硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(5：1，3：1，v/v)进行梯度洗脱，每300ml收集一个流份，经tlc检识合并相同流份后得到4个流份(ea-11-1～ea-11-4)。

5)其中第2个流份ea-11-2经sephadexlh-20柱色谱，以甲醇-水为洗脱剂进行洗脱，其中，甲醇和水的体积比为98：2，得到菲类化合物。

需要说明的是，上述实施例一至实施例九中，步骤3)中，取乙酸乙酯萃取层，通过采用硅胶柱色谱进行洗脱，得到33个流份；步骤4)中，将第10或11或12个流份再一次经硅胶柱色谱分离；步骤5)中，将第2个流份经sephadexlh-20柱色谱洗脱。其中涉及的个数均为试验验证中的记录，实际应用中，判断上述个数均是以极性为判断标准。

本发明经上述制备方法，制得具有抗肿瘤作用的菲类化合物，以实施例一获得的菲类化合物为例，通过理化常数和波谱技术(hr-esi-ms，1d-nmr，2d-nmr)确定了该化合物的结构：

得到的化合物性状：棕色粉末，易溶于甲醇。

波谱结果：如图8，根据hr-esi-ms图谱显示，其准分子离子峰为m/z535.17282[m+na]⁺(calcdfor535.17272)，确定其分子式为c31h28o7，不饱和度为18。

如图1和图2，在¹h-nmr和¹³c-nmr图谱中，质子信号δh6.60(1h,s)，δh6.83(1h,d,j＝8.1hz)，δh7.04(1h,t,j＝7.4hz)，δh6.77(1h,d,j＝7.3hz)，δh6.20(1h,s)，δh7.94(1h,s)，δh6.39(1h,s)，δh6.26(1h,s)，δh2.48-2.60(6h,m)，δh2.36-2.43(2h,m)和24个不饱和碳信号及4个亚甲基信号，表明该化合物基本骨架为一个二氢菲的二聚体，且两个二氢菲共有8个位置被取代，由δh3.75(3h,s)，δh3.92(3h,s)，δh3.85(3h,s)可知，其中三个位置被甲氧基取代，通过碳谱化学位移推测其余三个取代基均为羟基。如图7，在noesy谱中，h-9′和h-8′相关，h-8′和羟基质子相关可确定c-7′上的取代基为羟基，h-6′和甲氧基上的质子相关，表明5′位的取代基为甲氧基，h-4′除了与5′-och3上的质子相关，还与另一个甲氧基上的质子相关，表明3′位的取代基为甲氧基，则2′位为两个二氢菲的连接位置。在noesy谱中，h-9和h-8相关，且8位，7位，6位相连，再结合图6所示的hmbc图谱，h-6和h-7均和c-5相关，表明5位的取代基为羟基。在noesy谱中，5-oh质子与另一活泼质子相关，表明4位取代基为羟基，4-oh质子与h-3相关，h-3与甲氧基上的质子相关，表明2位为甲氧基，因此，确定1位和2′通过氧原子连接。再结合本发明图3至图5中的图谱，最终确定该化合物的结构式为：

将其命名为4,5,7-三羟基-2,3,5-三甲氧基二氢菲二聚体。是一种未见公开的新化合物。

其核磁数据如表1所示：

表1本发明的菲类化合物的¹h-nmr和¹³c-nmr数据

本发明的菲类化合物，在抗肿瘤，尤其是抗肝癌方面具有较好的应用前景，如下是对获得的菲类化合物进行细胞毒实验：

具体实验方法为：

将hepg2细胞以2×10⁵个细胞/孔的密度接种于96孔板中，37℃下培养24h后分别加入不同浓度的样品，包括本发明的菲类化合物和阳性药物多柔比星，空白组加入等体积dmso，培养48小时后，每孔加入20μlmtt溶液，继续培养4小时，然后吸去培养基，每孔加入150μldmso溶解产生的甲臜，震荡摇匀后用酶标仪测定在490nm波长下的od值，利用下列公式计算抑制率，并用spss软件计算被测试样品的半数抑制浓度(ic50值，μm)。

抑制率(％)＝[1–(样品组od值/空白组od值)]×100％。

细胞毒实验结果如表2：

表2本发明的菲类化合物对hepg2细胞的抑制作用结果表

细胞毒实验结果分析：表2的数据表明，本发明的菲类化合物具有很好的细胞毒性作用，其半数抑制浓度ic50为8.3±0.6μm，具有制备成抗肿瘤药物或作为抗肿瘤药物先导化合物的潜力，尤其是针对肝癌具有较好的应用前景。

对于实施例二至实施例九中的制备方法，均得到了具有抗肿瘤作用的菲类化合物，均经过了相应的图谱分析和细胞毒实验，得到了与实施例一相一致的结果。

以上所述仅为本发明的实施例，并非对本发明保护范围的限制，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明的专利保护范围内。