本发明涉及药物合成领域，具体地，本发明涉及一种腺苷的纯化方法。
背景技术：
：腺苷即腺嘌呤核苷，是腺嘌呤的n-9与d-核糖的c-1通过β糖苷键连接而成的化合物。腺苷是一种内源性核苷，广泛存在于所有类型的细胞中，也是体内重要的活性成分之一。腺苷可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量，可用于治疗心绞痛、心机梗塞、动脉硬化、原发性高血压、中风后遗症等病症。同时，它还是重要的药物中间体，可用于合成三磷酸腺苷(atp)、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷等。因此，腺苷具有广阔的市场开发和应用前景。腺苷作为一种原料药，用于腺苷注射液和腺苷钴胺等相关产品。因此对产品的质量要求较高，其中含量应不少于99.0％，有关物质已知杂质应不得超过0.1％，未知杂质应不得超过0.1％，总杂质不得超过0.3％，铵盐不得超过4ppm。现有文献或专利方法中制备的腺苷存在较多杂质，纯度较低，不能符合药用级腺苷的相关要求。专利“发酵生产腺苷的分离纯化方法”(cn111171097a)公开了一种了发酵生产腺苷的分离纯化方法，该方法采用微滤分离技术去除发酵液中的菌体，再用超滤分离去除微滤液中的大分子蛋白等杂质，然后用大孔树脂吸附超滤液中的腺苷，并用酸洗脱，串联阴离子交换树脂去除杂质并中和ph，最后浓缩、脱色、结晶分离得到腺苷成品。该方法步骤较为复杂，且未考虑未知杂质和铵盐情况。采用该方法处理发酵腺苷时，产品的最大单杂超出药典规定限度要求，且铵盐大于4ppm。其它目前常用的纯化方法，如凝胶柱或氧化铝柱纯化方法，纯化后欲达到较高的纯品标准，需要添加大量的填料，由于其填料本身成本较高，方法不适用于大规模工业生产。因此，目前急需解决的问题是寻找一种产品纯度和收率提高且适合工业化生产及符合药用级要求的腺苷纯化新方法。技术实现要素：本发明克服了现有技术中存在的不足，提供了一种腺苷的纯化方法。本发明提供的纯化方法采用特定的洗脱液进行洗脱，实现了腺苷粗品的有效纯化，制得的腺苷产品纯度和收率均显著提高，并且采用刺激性小的碱性溶液，特别是氢氧化钠水溶液或碳酸钠水溶液作为洗脱液也更适合工业化生产。本发明是通过以下技术方案实现的：本发明提供了一种腺苷的纯化方法，所述方法包括将腺苷粗品进行活性炭柱层析，得到腺苷。本发明的活性炭柱层析，是指以活性炭为填料的层析柱。在一个实施方案中，活性炭与腺苷粗品的质量比为1:2至1:20；优选地，活性炭与腺苷粗品的质量比为1:2至1:10；最优选地，活性炭与腺苷粗品的质量比为1:3。在一个实施方案中，所述活性炭柱层析包括采用碱性溶液作为洗脱剂进行洗脱。在一个实施方案中，所述活性炭柱层析包括采用碱性溶液作为洗脱剂进行洗脱，之后依次用水和乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱。在一个实施方案中，所述碱性溶液中碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钡、碳酸钠、碳酸钾、氨水、碳酸铵、三乙胺，乙二胺中的一种或多种；优选地，所述碱为氢氧化钠和/或碳酸钠；更优选地，所述碱为氢氧化钠；在一个实施方案中，所述碱性溶液中溶剂选自水、乙醇、甲醇、异丙醇、正丙醇中的一种或多种；优选的地，所述碱性溶液中溶剂为水；在一个优选的实施方案中，所述碱性溶液为碱性水溶液；优选地，所述碱性水溶液选自氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、氢氧化钡水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸钾水溶液、氨水、碳酸铵水溶液中的一种或多种；更优选地，所述碱性水溶液为氢氧化钠水溶液和/或碳酸钠水溶液；最优选地，所述碱性水溶液为氢氧化钠水溶液。在一个实施方案中，所述碱性溶液的浓度为0.005mol/l～5mol/l；优选地，所述碱性溶液的浓度为0.1mol/l～1mol/l。在一个实施方案中，所述碱性溶液与腺苷粗品的质量之比为10～300倍，优选为10～100倍。在一个实施方案中，所述水与腺苷粗品的质量之比为20～400倍，优选为50～100倍。在一个实施方案中，所述乙醇溶液浓度为20％～80％，优选为30％～70％，更优选为40％～60％。在一个实施方案中，所述乙醇溶液与腺苷粗品的质量之比为20～400倍，优选20～100倍，更优选50倍。本发明具有以下优点和积极效果：现有制备腺苷的方法中，无论是化学合成法，生物发酵法还是提取法，产品中都会有铵盐的残留，并且根据药典标准，铵盐的残留的标准为不大于4ppm。本发明人意外地发现采用活性炭层析纯化腺苷粗品，腺苷产品的收率和纯度均得到显著的提高。本方法对比专利cn111171097a的方法，获得的腺苷纯度高且收率高，尤其是铵盐残留量可达到4ppm以下，达到了药用级要求。相较于其它纯化方法如凝胶及氧化铝柱，本方法纯化效果好，获得的腺苷纯品纯度高，总杂质和铵盐控制标准严格；并且本方法相较于以上两种纯化方法，具有成本低廉的优势，适合于大规模工业生产，进而能大大降低产品成本。而且，采用碱性溶液，如氢氧化钠水溶液或碳酸钠水溶液作为洗脱剂，更加适用于工业化生产。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细的描述，根据下述实施例可以更好地理解本发明。然而，本领域技术人员应容易理解的是，以下实施例只是描述性的，不意味着将本发明局限于这些具体实施方式。本领域技术人员应该意识到，本发明涵盖了权利要求书范围内可能包括的所有改进方案、备选方案和等效方案。本发明使用的腺苷粗品可以为使用任何现有技术方法制备的腺苷粗品。实施例1腺苷的纯化称取活性炭30.0g，加入到层析柱中，加入纯化水洗脱活性炭，使活性炭被压实。称取腺苷粗品15g，用水溶解，然后缓慢加入到层析柱中，待样品全部进入到活性炭中，开始用0.1mol/l的naoh水溶液150g进行洗脱；再用纯化水750g进行洗脱；最后用乙醇水溶液(30％)750g进行洗脱。将接收的产品洗脱液合并，然后将溶剂减压蒸除，得到灰白色固体13.7g。收率91.3％，含量100.7％，已知杂质未检出，最大未知杂质0.02％，总杂0.03％，铵盐小于4ppm。实施例2腺苷的纯化称取活性炭30.0g，加入到层析柱中，加入纯化水洗脱活性炭，使活性炭被压实。称取腺苷粗品10g，用水溶解，然后缓慢加入到层析柱中，待样品全部进入到活性炭中，开始用5mol/l的氨水溶液200g进行洗脱，再用纯化水200g进行洗脱；最后用乙醇水溶液(80％)4000g进行洗脱。将接收的产品洗脱液合并，然后将溶剂减压蒸除，得到灰白色固体9.4g。收率94.0％，含量100.9％，已知杂质未检出，最大未知杂质0.01％，总杂0.01％，铵盐小于4ppm。实施例3腺苷的纯化称取活性炭30.0g，加入到层析柱中，加入纯化水洗脱活性炭，使活性炭被压实。称取腺苷粗品1.5g，用水溶解，然后缓慢加入到层析柱中，待样品全部进入到活性炭中，0.005mol/l的na2co3水溶液450g进行洗脱，再用纯化水300g进行洗脱；最后用乙醇水溶液(20％)300g进行洗脱。将接收的产品洗脱液合并，然后将溶剂减压蒸除，得到灰白色固体1.4g。收率93.3％，含量100.8％，已知杂质未检出，未知杂质未检出，铵盐小于4ppm。实施例4腺苷的纯化称取活性炭30.0g，加入到层析柱中，加入纯化水洗脱活性炭，使活性炭被压实。称取腺苷粗品10g，用水溶解，然后缓慢加入到层析柱中，待样品全部进入到活性炭中，开始用0.5mol/l的koh水溶液1000g进行洗脱；再用纯化水4000g进行洗脱；最后用乙醇水溶液(60％)200g进行洗脱，。将接收的产品洗脱液合并，然后将溶剂减压蒸除，得到灰白色固体9.2g。收率92.0％，含量101.0％，已知杂质0.01％，最大未知杂质0.01％，总杂0.02％，铵盐小于4ppm。实施例5实验参数的研究在实施例1的基础上，对不同纯化条件下获得的终产品收率和腺苷产品质量进行研究，即，除表中要进行考察的反应条件变化外，其余条件参数均与实施例1相同，结果列在所示下表中。备注：铵盐合格标准为4ppm。由上表的实验结果可以得出以下结论：1、腺苷粗品与活性炭的质量比当低于1:2时，产品铵盐不合格，当高于1:30时，收率明显下降。2、表中几种碱性溶液作为洗脱液均可达到较高的纯度、收率且铵盐残留检测均合格。3、腺苷粗品与碱性溶液的质量比低于1:10时，产品未知杂质和有关物质不合格，当质量比高于1:300时，收率明显降低。实验例6对照试验将本发明实施例1的纯化方法与公开号cn111171097a的纯化方法获得的腺苷纯品进行对比，结果如下表：项目cn111171097a方法实施例1方法最大单杂0.16％0.02％总杂0.4％0.05％含量99.6％99.9％铵盐不合格合格本发明实施例1纯化方法获得的腺苷纯品与对照方法相比，产品纯度明显高于对照方法，且铵盐含量检测合格，而对照方法铵盐检测不合格。说明本发明方法优于对照方法。尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。当前第1页12