一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物的制备方法与流程

1.属于生物医药材料技术领域，用于研究玻璃酸酶的固定化技术。


背景技术：

2.海藻酸钠其可与多价阳离子如钙离子形成水凝胶，且能保持良好的胶体形态，不分手渗液或收缩，机械性能良好，是一种稳定、环保、安全的新型载体。玻璃酸酶能催化透明质酸等酸性黏多糖水解，产生以丁糖为主的偶寡糖，使透明质酸的黏滞性明显下降，从而降低组织黏度，提高毛细血管和组织的通透性，加速细胞内外物质的扩散，是一种重要的药物扩散剂。
3.固定化酶技术是用物理或化学手段将游离酶封锁在固体材料或限制在一定区域内进行活跃的、特有的催化作用，并可回收长时间使用的一种技术。固定化酶技术较一般的蛋白酶具有较好的稳定性、易回收、使用方便等优点。本发明通过形成海藻酸钠与玻璃酸酶复合物，提供一种固定玻璃酸酶的方法，以冻干技术制备一种玻璃酸酶微载体，最大限度保留了酶活力。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种固定玻璃酸酶的方法，与现有技术相比，本发明以冻干技术制备一种玻璃酸酶微载体，最大限度保留了酶活力。
5.为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，包括海藻酸钠溶液，玻璃酸酶溶液，戊二醛溶液及氯化钙溶液，所述海藻酸钠溶液与玻璃酸酶溶液混合，所述戊二醛溶液加入混合液中促进载体与酶交联作用，所述氯化钙溶液加入混合液中与海藻酸钠反应形成水凝胶。
6.其中，所述海藻酸钠溶液为0.4g海藻酸钠用注射用水溶解至20ml。
7.其中，所述玻璃酸酶溶液为0.4g玻璃酸酶用生理盐水溶解至20ml。
8.其中，所述戊二醛溶液质量分数为0.8％。
9.其中，氯化钙溶液质量分数为2％。
10.另一方面，本发明提供了一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物的制备方法，包括称取0.4g玻璃酸酶，用生理盐水于2～8℃搅拌溶解后定容至20ml，得到溶液1；称取0.4g海藻酸钠，用注射用水于37℃搅拌溶解后定容至20ml，将其于2～8℃冰箱静置30min，得到溶液2；将溶液1和溶液2混匀，再加入质量分数为0.8％的戊二醛，混匀后置于2～8℃冰箱静置交联3h；用10ml注射器吸取交联后的混合液，排空注射器中空气后，以15cm左右的高度逐滴滴入质量分数为2％的氯化钙溶液中，搅拌后会形成光滑的凝胶小球；用滤纸滤出凝胶小球，将其轻轻放入新的质量分数为2％的氯化钙溶液中，置于2～8℃冰箱静置硬化2h；用滤纸滤出凝胶小球，用生理盐水洗涤干净，将其置于冷冻干燥机中冻干，并置于2～8℃冰箱保存。所述海藻酸钠广泛存在于褐藻酸中，是由β-1，4-d甘露糖醛酸和α-1，4-l古罗糖醛酸组成的二元线性聚合物，具有无毒、生物相容性好、可降解等优点。其可与多价阳离子如钙离子形成
水凝胶，且能保持良好的胶体形态，不分手渗液或收缩，机械性能良好，是一种稳定、环保、安全的新型载体。所述玻璃酸酶又名透明质酸酶，在哺乳动物的睾丸里含量很丰富，能催化透明质酸等酸性黏多糖水解，产生以丁糖为主的偶寡糖，使透明质酸的黏滞性明显下降，从而降低组织黏度，提高毛细血管和组织的通透性，加速细胞内外物质的扩散，是一种重要的药物扩散剂。
附图说明
11.为了更清楚的说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
12.图1是本发明的一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物的制备方法。
具体实施方式
13.下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的原件或具有相同或类似功能的原件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
14.一方面，本发明提供了一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，包括海藻酸钠溶液，玻璃酸酶溶液，戊二醛溶液及氯化钙溶液，所述海藻酸钠溶液与玻璃酸酶溶液混合，所述戊二醛溶液加入混合液中促进载体与酶交联作用，所述氯化钙溶液加入混合液中与海藻酸钠反应形成水凝胶。
15.第二方面，请参阅图1，本发明提供一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物的制备方法，包括：
16.s101称取0.4g玻璃酸酶，用生理盐水于2～8℃搅拌溶解后定容至20ml，得到溶液1；
17.玻璃酸酶又名透明质酸酶，在哺乳动物的睾丸里含量很丰富，能催化透明质酸等酸性黏多糖水解，产生以丁糖为主的偶寡糖，使透明质酸的黏滞性明显下降，从而降低组织黏度，提高毛细血管和组织的通透性，加速细胞内外物质的扩散，是一种重要的药物扩散剂。
18.s102称取0.4g海藻酸钠，用注射用水于37℃搅拌溶解后定容至20ml，将其于2～8℃冰箱静置30min，得到溶液2；
19.海藻酸钠广泛存在于褐藻酸中，是由β-1，4-d甘露糖醛酸和α-1，4-l古罗糖醛酸组成的二元线性聚合物，具有无毒、生物相容性好、可降解等优点。其可与多价阳离子如钙离子形成水凝胶，且能保持良好的胶体形态，不分手渗液或收缩，机械性能良好，是一种稳定、环保、安全的新型载体。
20.s103将溶液1和溶液2混匀，再加入质量分数为0.8％的戊二醛，混匀后置于2～8℃冰箱静置交联3h。
21.戊二醛是一种很好的交联剂，能与载体上的氨基、蛋白质中的氨基、巯基、酚基等发生schiff反应，再与酶发生反应，强化海藻酸钠凝胶颗粒的机械强度和固定化酶的操作
稳定性。低浓度的戊二醛可以促进载体与酶的交联作用。
22.s104用10ml注射器吸取交联后的混合液，排空注射器中空气后，以15cm左右的高度逐滴滴入质量分数为2％的氯化钙溶液中，搅拌后会形成光滑的凝胶小球。用滤纸滤出凝胶小球，将其轻轻放入新的质量分数为2％的氯化钙溶液中，置于2～8℃冰箱静置硬化2h；
23.混合液中海藻酸钠与氯化钙溶液中钙离子反应形成水凝胶，且能保持良好的胶体状态，配合冻干技术使玻璃酸酶固定，使其具有良好的机械稳定性，最大限度保留了酶活力，对温度和酸碱度具有良好的耐受性，并延长了保存期。
24.s105用滤纸滤出凝胶小球，用生理盐水洗涤干净，将其置于冷冻干燥机中冻干，并置于2～8℃冰箱保存。
25.以上所揭露的仅为发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。


技术特征：
1.一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，其特征在于，包括海藻酸钠溶液，玻璃酸酶溶液，戊二醛溶液及氯化钙溶液，所述海藻酸钠溶液与玻璃酸酶溶液混合，所述戊二醛溶液加入混合液中促进载体与酶交联作用，所述氯化钙溶液加入混合液中与海藻酸钠反应形成水凝胶。2.如权利要求1所述的一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，其特征在于，所述海藻酸钠溶液为0.4g海藻酸钠用注射用水溶解至20ml。3.如权利要求1所述的一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，其特征在于，所述玻璃酸酶溶液为0.4g玻璃酸酶用生理盐水溶解至20ml。4.如权利要求1所述的一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，其特征在于，所述戊二醛溶液质量分数为0.8％。5.如权利要求1所述的一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物，其特征在于，所述氯化钙溶液质量分数为2％。6.一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物的制备方法，其特征在于，包括：称取0.4g玻璃酸酶，用生理盐水于2～8℃搅拌溶解后定容至20ml，得到溶液1。称取0.4g海藻酸钠，用注射用水于37℃搅拌溶解后定容至20ml，将其于2～8℃冰箱静置30min，得到溶液2。将溶液1和溶液2混匀，再加入质量分数为0.8％的戊二醛，混匀后置于2～8℃冰箱静置交联3h。用10ml注射器吸取交联后的混合液，排空注射器中空气后，以15cm左右的高度逐滴滴入质量分数为2％的氯化钙溶液中，搅拌后会形成光滑的凝胶小球。用滤纸滤出凝胶小球，将其轻轻放入新的质量分数为2％的氯化钙溶液中，置于2～8℃冰箱静置硬化2h。用滤纸滤出凝胶小球，用生理盐水洗涤干净，将其置于冷冻干燥机中冻干，并置于2～8℃冰箱保存。

技术总结
本发明公开了一种海藻酸钠-玻璃酸酶复合物的制备方法，玻璃酸酶在哺乳动物的睾丸里含量丰富，能催化透明质酸等酸性黏多糖水解，产生以丁糖为主的偶寡糖，使透明质酸的黏滞性明显下降，从而降低组织黏度，提高毛细血管和组织的通透性，加速细胞内外物质的扩散，是一种重要的药物扩散剂。海藻酸钠广泛存在于褐藻酸中，具有无毒、生物相容性好、可降解等优点。其可与多价阳离子如钙离子形成水凝胶，且能保持良好的胶体形态，不分手渗液或收缩，机械性能良好，是一种稳定、环保、安全的新型载体。所述海藻酸钠与玻璃酸酶混合后通过冻干技术形成玻璃酸酶微载体对其加以固定，最大限度保留了酶活力，对温度和酸碱度具有良好的耐受性，并延长了保存期。延长了保存期。


技术研发人员：吴娟
受保护的技术使用者：苏州良辰生物医药科技有限公司
技术研发日：2020.11.23
技术公布日：2022/5/25