用于治疗KIT和PDGFRA介导的疾病的组合物和方法与流程

用于治疗kit和pdgfra介导的疾病的组合物和方法
1.本技术要求2019年4月12日提交的美国临时申请号62/833,529、2019年10月4日提交的美国临时申请号62/911,016和2019年11月4日提交的美国临时申请号62/930,240的优先权。每个上述申请的全部内容通过引用并入本文。
2.本公开涉及新型吡咯并三嗪化合物及其作为激活的kit和pdgfrα突变蛋白激酶的选择性抑制剂的用途。本文公开的化合物可用于药物组合物，例如，用于治疗慢性疾病。kit受体属于iii类受体酪氨酸激酶家族，该家族还包括结构相关蛋白pdgfrα。通常，干细胞因子通过诱导二聚化和自身磷酸化与kit结合并激活，从而诱导下游信号传导的启动。然而，在几种肿瘤类型中，kit中的体细胞激活突变驱动非配体依赖性的组成型致癌活性，包括例如急性髓性白血病、黑色素瘤、颅间生殖细胞肿瘤、纵隔b细胞淋巴瘤、精原细胞瘤和胃肠道间质瘤等肿瘤类型。已知突变型kit也在肥大细胞激活中发挥作用，这是常见的并且可能是维持所必需的。当肥大细胞病理性过度产生时或者它们的激活与感知的体内平衡威胁不成比例时，就会发生肥大细胞激活紊乱。肥大细胞活化综合征是指一组由多种病因引起的疾病，这些病因表现为肥大细胞介质释放而出现间歇性多系统症状。肥大细胞增多症是肥大细胞活化综合征的一种。世界卫生组织(who)将肥大细胞增多症分为7个不同的类别：皮肤肥大细胞增多症、惰性系统性肥大细胞增多症(ism)、冒烟型系统性肥大细胞增多症(ssm)、伴有相关血液肿瘤的肥大细胞增多症(sm-ahn)、侵袭性系统性肥大细胞增多症(asm)、肥大细胞白血病(mcl)和肥大细胞肉瘤。
3.系统性肥大细胞增多症是一种肥大细胞克隆性疾病，其特征是通过肿瘤性肥大细胞在皮肤、骨髓、脾脏、肝脏、胃肠道和其他器官的局灶性和/或弥漫性浸润，增加了肥大细胞的负荷并增加了肥大细胞介质释放量。系统性肥大细胞增多症(sm)包括5个亚型肥大细胞增多症：惰性sm(ism)、冒烟型sm(ssm)、伴有非mc谱系相关血液肿瘤的肥大细胞增多症sm(sm-ahn)、侵袭性sm(asm)和mc白血病(mcl)。后三个子分类与降低的总生存率相关，并被归为晚期sm(advsm)。ism是一种与正常或接近正常预期寿命相关的慢性疾病，并且ssm的预后为中度。ism和ssm被归为非晚期sm(non-adv sm)。
4.在所有sm亚型和大多数患有该疾病的患者中，肿瘤性肥大细胞在kit外显子17的d816位置显示为突变，这导致了kit激酶活性的非配体依赖性激活。野生型肥大细胞的分化和存活需要kit活性，因此，通过d816v突变对kit的组成性激活被认为是sm的致病驱动因素。具体而言，在90％至98％的sm患者中发现kit d816v突变，并发现了罕见的kit d816y、d816f和d816h突变体。基于这些发现，kit d816v被认为是sm的主要治疗靶点。
5.慢性疾病(惰性sm和ssm)以严重症状为特征，包括瘙痒、潮红、胃肠道痉挛、腹泻、过敏反应、骨痛和骨质疏松症。这些症状会严重损害健康，对生活质量产生负面影响。目前尚无获批的ism或ssm治疗方法。因此，发现针对ism或ssm的新疗法将十分有用。
6.wo2015/057873中已经报道了具有突变型kit和pdgfrα抑制活性的吡咯并三嗪化合物。具体而言，某些带有n-烷基吡唑的化合物在wo2015/057873中举例说明，并具有突变型kit和pdgfrα抑制活性，例如，具有n-乙基吡唑的化合物63。wo2015/057873中举例说明的这些n-烷基吡唑化合物的化学结构不同于本公开的化合物的化学结构。
7.此外，尽管在wo2015/057873中公开了具有突变型kit和pdgfrα抑制活性的吡咯并三嗪化合物，但是这些化合物的性质与本公开的化合物的性质完全不同。
8.本公开的目的是提供对突变型kit和pdgfrα激酶具有高选择性、有效活性的新型化合物，其用于安全有效地治疗慢性疾病，如ism和ssm，以及其它由突变型kit或pdgfra介导的疾病。在治疗这些疾病时，尤其是慢性疾病(如ism和ssm)，任何新疗法都应具有良好的耐受性。特别是，需要靶向突变型kit和pdgfrα激酶的新化合物，其降低了与其他已知吡咯并三嗪化合物相关的不良性cns副作用的水平。
9.本发明人发现了对突变型kit和pdgfrα激酶具有高选择性和效力的新型化合物，其同时具有额外的所需特性，例如，很少或没有渗透到cns中、脑中低游离浓度和脑外的高水平或主动转运，即，来自cns的高流出率。鉴于这种所需的性质平衡，本公开的化合物特别适合于外周治疗，尤其是外周长期治疗，同时减少或最小化cns中的副作用。
10.因此，本公开的化合物旨在提供具有用于治疗kit和pdgfra介导的疾病的所需功效、安全性和药物特性的治疗。更具体地，本公开的化合物表现出一系列有益特性，包括降低的脑渗透水平，同时相对于已知的具有突变型kit和pdgfrα抑制活性的吡咯并三嗪化合物，保持了功效和其它所需的药物特性。
11.缩写和定义
12.以下缩写和术语在通篇具有所指定的含义：
13.术语“kit”是指人酪氨酸激酶，其可称为肥大/干细胞生长因子受体(scfr)、原癌基因c-kit、酪氨酸蛋白激酶kit或cd117。如本文所用，术语“kit核苷酸”包括kit基因、kit mrna、kit cdna及其扩增产物、突变、变异和片段。“kit基因”用于指编码具有kit激酶活性的多肽的基因，例如，其序列位于参考人类基因组hg19的4号染色体的核苷酸55,524,085和55,606,881之间。“kit转录物”是指kit基因的转录产物，其中一个例子具有ncbi参考序列nm_000222.2的序列。术语“kit蛋白”是指通过kit核苷酸或其中一部分的翻译产生的多肽序列。
14.术语“pdgfra”是指人酪氨酸激酶，其可称为血小板衍生生长因子α。如本文所用，术语“pdgfra核苷酸”包括pdgfra基因、pdgfra mrna、kit cdna及其扩增产物、突变、变异和片段。“pdgfra基因”用于指编码具有pdgfra激酶活性的多肽的基因，例如，其序列位于参考智人注释版本109,grch38.p12的4号染色体的核苷酸54,229,089和54,298,247之间。“pdgfra转录物”是指pdgfra基因的转录产物，其中一个例子具有ncbi参考序列nm_006206.6的序列。术语“pdgfra蛋白”或“pdgfrα”是指通过pdgfra核苷酸或其中一部分的翻译产生的多肽序列。
15.如本文所用，“恶性疾病”是指异常细胞不受控制地分裂并可侵入附近组织的疾病。恶性细胞也可以通过血液或淋巴系统扩散到身体的其他部位。恶性疾病的非限制性实例是癌、肉瘤、白血病和淋巴瘤。癌症是恶性疾病的非限制性实例。在一些实施例中，系统性肥大细胞增多症是恶性疾病的非限制性实例。
16.癌症的非限制性实例包括胃肠道间质瘤(gist)、急性髓性白血病(aml)、黑色素瘤、精原细胞瘤、颅间生殖细胞肿瘤和纵隔b细胞淋巴瘤。
17.如本文所用，“嗜酸性粒细胞疾病”是指这样一种疾病，其中在身体的不同部位发现嗜酸性粒细胞的量高于正常值和/或当低密度嗜酸性粒细胞与正常密度嗜酸性粒细胞的
比率高于正常值(例如，大于30％)。本文所述的嗜酸性粒细胞疾病的特征是嗜酸性粒细胞过多(嗜酸性粒细胞增多症)。嗜酸性粒细胞数量的增加会使组织发炎并导致器官损伤。心脏、肺、皮肤和神经系统最容易受到影响，但任何器官都有可能受损。
18.根据嗜酸性粒细胞水平升高的部位，诊断嗜酸性粒细胞疾病：
19.嗜酸性粒细胞性肺炎(肺)
20.嗜酸性粒细胞性心肌病(心脏)
21.嗜酸性粒细胞性食管炎(食管-eoe)
22.嗜酸性粒细胞性胃炎(胃-eg)
23.嗜酸性粒细胞性胃肠炎(胃和小肠-ege)
24.嗜酸性粒细胞性肠炎(小肠)
25.嗜酸性粒细胞性结肠炎(大肠-ec)
26.高嗜酸性粒细胞综合征(血液和任何器官-hes)
27.如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指将通过本公开的方法进行治疗的生物体。这种生物体包括但不限于哺乳动物(例如，鼠科、猿猴、马科、牛科、猪科、犬科、猫科等)，并且在一些实施例中，包括人类。
28.如本文所用，短语“治疗有效量”是指足以产生有益或期望结果的活性剂的量。治疗有效量可以以一种或多种给药方式、应用或剂量给药，并且不限于特定的制剂或给药途径。
29.如本文所用，涉及特定化合物的短语“其药学上可接受的盐的重量当量”包括该化合物和相关盐的重量。
30.如本文所用，如果将短语“其药学上可接受的盐”用于以盐形式分布的活性剂，其是指活性剂的任何药学上可接受的盐的形式。
31.如本文所用，术语“治疗”包括改善病症、疾病、障碍等或改善其症状的任何效果，例如，减轻、减少、调节、改善或消除。
32.虽然活性剂可以单独给药，但在一些实施例中，活性剂可以作为药物制剂进行给药，其中活性剂与一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体联合使用。例如，可以将活性剂配制为在人类医学或兽医学中以任何方便的方式进行给药。在某些实施例中，药物制剂中的包含的化合物本身可以是有活性的，或者可以是前药，例如，能够在生理环境中转化为活性化合物。
33.本文中所用的短语“药学上可接受的”是指一些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内适合与人类和动物组织接触且没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，并与合理的益处/风险比相称。
34.如本文所用，“烷基”是指饱和直链或支链烃的一价基团，例如1-12、1-10或1-6个碳原子的直链或支链基团，本文中分别指为c1-c12烷基、c1-c10烷基和c1-c6烷基。例如，c1烷基是甲基。
35.如本文所用，“卤素”是指任何卤素的基团，例如，-f、-cl、-br或-i。
36.如本文所用，“卤代烷基”和“卤代烷氧基”是指被一个或多个卤素基团或其组合取代的烷基和烷氧基结构。例如，术语“氟烷基”和“氟烷氧基”分别包括卤代烷基和卤代烷氧基，其中卤素是指氟。“卤代亚烷基”是指二价烷基，例如，-ch
2-、-ch2ch
2-和-ch2ch2ch
2-，其
中一个或多个氢原子被卤素取代，并且包括其中所有氢都被卤素取代的烷基部分。
37.如本文所用，“环烷基”是指具有3至12个碳的环状、二环、三环或多环非芳香族烃基。任何可取代的环原子都可以被取代(例如，被一个或多个取代基取代)。环烷基可包含稠环或螺环。稠环是指共享一个共有碳原子的环。环烷基部分的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
38.如本文所用，“杂环基”是指杂环体系的一价基团。杂环基的实例包括但不限于环体系，其中每个环为非芳香族环且至少一个环包含杂原子，例如，氧杂环丁烷基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
39.如本文所用，当在任何结构中出现不止一次时，每个表达式(例如，烷基、m、n等)的定义旨在独立于其在同一结构中其它地方的定义。
40.本公开的某些化合物可以以特定的几何或立体异构形式存在。本公开涵盖所有此类化合物，其包括顺式和反式异构体、r与s对映异构体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体、其外消旋混合物及其其他混合物，属于本公开的范围。另外的不对称碳原子可存在于取代基中，例如，烷基。所有这些异构体及其混合物都包括在本公开中。
41.例如，如果需要本公开的化合物的特定对映异构体，它可以通过不对称合成或通过手性助剂进行衍生来制备，其中分离所得的非对映体混合物并裂解助剂基团，以提供纯的所需对映异构体。可替代地，在分子含有碱性官能团例如氨基或酸性官能团(例如，羧基)的情况下，用适当的光学活性酸或碱形成非对映体盐，随后通过分步结晶或本领域公知的色谱方法分解由此形成的非对映异构体，并随后回收纯对映异构体。
42.除非另有说明，当所公开的化合物以结构命名或描述而没有指定立体化学并且具有一个或多个手性中心时，应理解为代表该化合物的所有可能的立体异构体，以及其对映异构体混合物。
43.组合物的“对映体过量”或“对映体过量％”可以使用如下所示的公式进行计算。在下面的实例中，组合物含有90％的一种对映异构体，例如，s对映异构体，和10％的另一种对映异构体(即r对映异构体)。
44.ee＝(90-10)/100＝80％。
45.因此，据说含有90％的一种对映异构体和10％的另一种对映异构体的组合物具有80％的对映体过量。
46.本文所述的化合物或组合物可以含有至少50％、75％、90％、95％或99％的一种形式的化合物(例如，s对映异构体)的对映体过量。换句话说，这种化合物或组合物含有对映体过量的s对映异构体，其量超过r对映异构体。
47.本文所述的化合物还可在构成这种化合物的一个或多个原子上包含非自然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素(例如，氘(2h)、氚(3h)、碳13(
13
c)或碳14(
14
c)进行放射性标记。本文公开的化合物的所有同位素变体，无论是否具有放射性，都包含在本公开的范围内。此外，本文所述的化合物的所有互变异构形式都在本公开的范围内。
48.本文公开的化合物可以以游离碱或盐的形式使用。代表性的盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、戊酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐和月桂基磺酸盐等。(参见，例如，berge
等人，“pharmaceutical salts(药用盐)”(1997年)，《药物科学杂志》(j.pharm.sci.)，66:1-19。)
49.本文公开的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合形式。如本文所用，术语“水合物”或“水合的”是指通过水与母体化合物结合形成的化合物。
50.一般而言，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，并且包含在本公开的范围内。本文公开的某些化合物可以多种晶体形式或无定形形式存在。一般而言，所有物理形式等同于本公开所预期的用途，并且都在本公开的范围内。
51.本公开提供了式i的化合物及其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物。本公开的非限制性实施例包括：
52.实施例1：式i的化合物：
53.其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：
54.a是
[0055][0056]
r1选自氢和甲基；
[0057]
r2选自氢和甲基，或
[0058]
r1和r2一起形成环丙基；
[0059]
r3选自氢和甲基；
[0060]
r4选自氢和甲基，或
[0061]
r3和r4一起形成环丙基；
[0062]
r5选自氢和甲基；
[0063]
r6选自氢和甲基，或
[0064]
r5和r6一起形成环丙基，或
[0065]
r2或r4中的一个与r6一起形成环丁基；
[0066]
r7是氢，或r2、r4或r6中的一个与r7一起形成选自氧杂环丁烷、四氢呋喃和四氢吡喃的环，其中所述四氢呋喃或四氢吡喃任选地被羟基取代；
[0067]
m为0或1；和
[0068]
n为0或1。
[0069]
在实施例1的一些实施方式中，当m为0时，r1和r2不存在。在实施例1的一些实施方式中，当n为0时，r3和r4不存在。在实施例1的一些实施方式中，m+n＝1或m和n不能同时为0。
[0070]
应注意的是，在本公开中，当任意两个r基团(例如，r1和r2)一起形成环结构(例如，环丙基)时，在同一环结构中包含位于中间的碳原子和/或氧原子。
[0071]
实施例2：根据实施例1所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：
[0072]
a是：
[0073][0074]
r3选自氢和甲基；
[0075]
r4选自氢和甲基，或r3和r4一起形成环丙基；
[0076]
r5选自氢和甲基；或
[0077]
r4和r6一起形成环丙基；或
[0078]
r5和r6一起形成环丙基；和
[0079]
r7是氢。
[0080]
实施例3：根据实施例2所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：
[0081]
a是：
[0082][0083]
r3选自氢和甲基；
[0084]
r4选自氢和甲基，或r3和r4一起形成环丙基；
[0085]
r5选自氢和甲基；或
[0086]
r5和r6一起形成环丙基；和
[0087]
r7是氢。
[0088]
实施例4：根据实施例1所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：
[0089]
a是
[0090][0091]
w为1或2；
[0092]
t为1或2；和
[0093]
s为0或1。
[0094]
实施例5：根据实施例1-4中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物的k
p
《0.39。
[0095]
在实施例5的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物的k
p
《0.39。在实施例5的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14、17、18、19、20、21和22。
[0096]
实施例6：根据实施例1-4中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物的k
p
≤0.20。
[0097]
在实施例6的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物的k
p
≤0.20。在实施例6的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、3、4、5、6、9、11、13、17、18、19、20、21和22。
[0098]
实施例7：实施例1-6中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠脑匀浆中的k
p,uu
≤0.2。
[0099]
在实施例7的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠脑匀浆中的k
p,uu
≤0.2。在实施例7的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、17、18、19、20和22。
[0100]
实施例8：根据实施例1-7中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠脑匀浆中的k
p,uu
≤0.1。
[0101]
在实施例8的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠脑匀浆中的k
p,uu
＜0.1。在实施例8的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、9、11、12、17、18、19、20和22。
[0102]
实施例9：根据实施例1-8中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠脑匀浆中的k
p,uu
≤0.05。
[0103]
在实施例9的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠脑匀浆中的k
p,uu
≤0.05。在实施例9的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、3、4、5、6、9、17、19、20和22。
[0104]
实施例10：根据实施例1-9中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠脑切片中的k
p,uu
≤0.1。
[0105]
在实施例10的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠脑切片中的k
p,uu
≤0.1。在实施例10的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、20、21和22。
[0106]
实施例11：根据实施例1-10中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠脑切片中的k
p,uu
≤0.05。
[0107]
在实施例11的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠脑切片中的k
p,uu
≤0.05。在实施例11的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、17、18、20和22。
[0108]
实施例12：根据实施例1-11中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前
述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠中的游离清除率(clu)《900ml/min/kg。
[0109]
在实施例12的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠中的游离清除率(clu)《900ml/min/kg。在实施例12的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物3、4、7和9。
[0110]
实施例13：实施例1-12中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物在大鼠中的游离清除率(clu)《750ml/min/kg。
[0111]
在实施例13的一些实施方式中，根据实施例4中描述的步骤测定，化合物在大鼠中的游离清除率(clu)《750ml/min/kg。在实施例13的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物选自化合物4、7和9。
[0112]
实施例14：实施例1-12中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物对cyp3a4的ic
50
《10μm。
[0113]
在实施例14的一些实施方式中，根据实施例5中描述的步骤测定，化合物对cyp3a4的ic
50
《10μm。在实施例14的一些实施方式中，化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物为化合物4。
[0114]
实施例15：根据实施例1所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0115][0116]
实施例15-1：根据实施例1所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0117][0118]
实施例16：根据实施例1所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0119]
[0120]
实施例16-1：根据实施例1所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0121][0122]
实施例17：根据实施例1-3中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0123][0124]
实施例18：根据实施例1-3或5中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0125][0126]
实施例19：根据实施例1-3或5-6中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0127][0128]
实施例20：根据实施例1-3或5-7中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中：a选自
[0129][0130]
实施例21：根据实施例1-13中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物选自4、7和9。
[0131]
实施例22：根据实施例1-13中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物选自4和9。
[0132]
实施例23：根据实施例1-13中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物为
[0133][0134]
实施例24：根据实施例1-13中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物为
[0135][0136]
实施例25：根据实施例1-13中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中化合物为
[0137][0138]
实施例26：一种药物组合物，包括：
[0139]
实施例1-25中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物；和
[0140]
药学上可接受的赋形剂。
[0141]
实施例27：一种在有需要的患者中治疗疾病或病症的方法，其中所述方法包括向
患者施用根据实施例1-25中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其中所述疾病或病症选自系统性肥大细胞增多症、胃肠道间质瘤、急性髓性白血病、黑色素瘤、精原细胞瘤、颅间生殖细胞肿瘤、纵隔b细胞淋巴瘤、尤文氏肉瘤、弥漫大b细胞淋巴瘤、无性细胞瘤、骨髓增生异常综合征、鼻nk/t细胞淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病和脑癌。
[0142]
实施例28：一种在有需要的患者中治疗由突变型kit或pdgfrα介导的疾病或病症的方法，其中所述方法包括向患者施用根据实施例1-25中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物。
[0143]
实施例29：根据实施例28所述的方法，其中所述疾病或病症选自系统性肥大细胞增多症、胃肠道间质瘤、急性髓性白血病、黑色素瘤、精原细胞瘤、颅间生殖细胞肿瘤、纵隔b细胞淋巴瘤、尤文氏肉瘤、弥漫大b细胞淋巴瘤、无性细胞瘤、骨髓增生异常综合征、鼻nk/t细胞淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病和脑癌。
[0144]
实施例30：根据实施方案1-25中任一项的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其用作在有需要的患者中治疗疾病或病症的药物，其中所述疾病或病症选自系统性肥大细胞增多症、胃肠道间质瘤、急性髓性白血病、黑色素瘤、精原细胞瘤、颅间生殖细胞肿瘤、纵隔b细胞淋巴瘤、尤文氏肉瘤、弥漫大b细胞淋巴瘤、无性细胞瘤、骨髓增生异常综合征、鼻nk/t细胞淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病和脑癌。
[0145]
实施例31：根据实施例1-25中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物，其用作在有需要的患者中治疗由突变型kit或pdgfra介导的疾病或病症的药物。
[0146]
实施例32：根据实施例31所述化合物，其中所述疾病或病症选自系统性肥大细胞增多症、胃肠道间质瘤、急性髓性白血病、黑色素瘤、精原细胞瘤、颅间生殖细胞肿瘤、纵隔b细胞淋巴瘤、尤文氏肉瘤、弥漫大b细胞淋巴瘤、无性细胞瘤、骨髓增生异常综合征、鼻nk/t细胞淋巴瘤、慢性粒单核细胞白血病和脑癌。
[0147]
实施例33：一种治疗嗜酸性粒细胞疾病的方法，包括给有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施例1-25中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物。
[0148]
实施例34：根据实施例33所述的方法，其中所述嗜酸性粒细胞病症选自嗜酸性粒细胞增多综合征、嗜酸性粒细胞增多症、嗜酸性粒细胞性肠胃炎、嗜酸性粒细胞白血病、嗜酸性粒细胞肉芽肿和木村氏病。
[0149]
实施例35：根据实施例33所述的方法，其中所述嗜酸性粒细胞疾病是嗜酸性粒细胞增多综合征。
[0150]
实施例36：根据实施例33所述的方法，其中所述嗜酸性粒细胞疾病是嗜酸性粒细胞白血病。
[0151]
实施例37：根据实施例36所述的方法，其中所述嗜酸性粒细胞白血病是慢性嗜酸性粒细胞白血病。
[0152]
实施例38：根据实施例33-37中任一项所述的方法，其中使用伊马替尼、舒尼替尼和/或瑞戈非尼治疗所述嗜酸性粒细胞疾病的效果不明显。
[0153]
实施例39：根据实施例1-25中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前
述任一项的溶剂合物，其用作治疗嗜酸性粒细胞疾病的药物。
[0154]
实施例40：根据实施例39所述的化合物，其中所述嗜酸性粒细胞病症选自嗜酸性粒细胞增多综合征、嗜酸性粒细胞增多症、嗜酸性粒细胞性肠胃炎、嗜酸性粒细胞白血病、嗜酸性粒细胞肉芽肿和木村氏病。
[0155]
实施例41：根据实施例39所述的化合物，其中所述嗜酸性粒细胞疾病是嗜酸性粒细胞增多综合征。
[0156]
实施例42：根据实施例39所述的化合物，其中所述嗜酸性粒细胞疾病是嗜酸性粒细胞白血病。
[0157]
实施例43：根据实施例42所述的方法，其中所述嗜酸性粒细胞白血病是慢性嗜酸性粒细胞白血病。
[0158]
实施例44：根据实施例39-43中任一项所述的方法，其中使用伊马替尼、舒尼替尼和/或瑞戈非尼治疗所述嗜酸性粒细胞疾病的效果不明显。
[0159]
实施例45：一种治疗肥大细胞疾病的方法，包括给有需要的受试者施用治疗有效量的根据实施例1-25中任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物。
[0160]
实施例46：根据实施例45所述的方法，其中所述肥大细胞疾病是由突变型kit或pdgfrα介导的。
[0161]
实施例46-1：根据实施例45所述的方法，其中所述肥大细胞疾病由野生型kit或pdgfrα介导的。
[0162]
实施例47：根据实施例46中任一项所述的方法，其中所述肥大细胞病症选自肥大细胞活化综合征(mcas)和遗传性α类胰蛋白酶血症(hat)。
[0163]
实施例48：根据实施例47所述的方法，其中所述mcas选自单克隆性肥大细胞活化综合征(mmas)、继发性mcas和特发性mcas。
[0164]
实施例48-1：根据实施例27所述的方法，其中所述疾病或病症是系统性肥大细胞增多症。
[0165]
实施例49：根据实施例48中任一项所述的方法，其中所述系统性肥大细胞增多症选自惰性系统性肥大细胞增多症和冒烟型系统性肥大细胞增多症。
[0166]
表1列出了通过本文所述的合成方法制备的化合物。
[0167]
[0168]
[0169]
[0170]
[0171]
[0172][0173]
本公开的化合物是选择性kit抑制剂。在一些实施例中，本公开的化合物是选择性d816v kit抑制剂。本公开的化合物是选择性pdgfrα抑制剂。在一些实施例中，本公开的化合物是选择性pdgfrα外显子18抑制剂。在一些实施例中，本公开的化合物是选择性pdgfrαd842v抑制剂。如本文所用，“选择性kit抑制剂”或“选择性pdgfrα抑制剂”是指一种化合物或其药学上可接受的盐或前述任一项的溶剂化物，其相对于另一种蛋白激酶选择性抑制kit蛋白激酶或pdgfrα蛋白激酶，并对kit蛋白激酶或pdgfrα蛋白激酶显示出至少2倍于另一种激酶的选择性。例如，选择性kit抑制剂或选择性pdgfra抑制剂表现出至少9倍的选择性和10倍的选择性；至少15倍的选择性；至少20倍的选择性；至少30倍的选择性；至少40倍的选择性；至少50倍的选择性；至少60倍的选择性；至少70倍的选择性；至少80倍的选择性；至少90倍的选择性；相对于另一种激酶，对kit蛋白激酶或pdgfrα激酶表现出至少100倍、至少125倍、至少150倍、至少175倍或至少200倍的选择性。在一些实施例中，选择性kit抑制剂
或选择性pdgfrα抑制剂对另一种激酶(例如，vegfr2(血管内皮生长因子受体2)、src(非受体蛋白酪氨酸激酶)和flt3(fms样酪氨酸激酶3))表现出至少150倍的选择性。在一些实施例中，选择性kit或选择性pdgfrα抑制剂对pdgrfβ、csf1r(集落刺激因子-1受体)和flt3表现出选择性。在一些实施例中，选择性kit或选择性pdgfrα抑制剂对lck(淋巴细胞特异性蛋白激酶)、abl(核蛋白酪氨酸激酶)、永离有丝分裂基因a(nima)相关激酶5(nek5)和rock1(rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1)表现出选择性。在一些实施例中，在细胞试验(例如，细胞试验)中测定kit蛋白激酶或pdgfrα蛋白激酶相对于另一种激酶的选择性。在一些实施例中，在生化试验(例如，生化试验)中测定kit蛋白激酶或pdgfrα蛋白激酶相对于另一种激酶的选择性。
[0174]
本公开的化合物对离子通道具有选择性。在一些实施例中，选择性kit或选择性pdgfrα抑制剂在抑制人类电压门控钠通道(hnav 1.2)方面的潜力有限。
[0175]
与野生型kit相较而言，本公开的化合物对突变型kit具有选择性。在一些实施方案中，与野生型kit相较而言，本公开的化合物对外显子17突变型kit具有选择性。
[0176]
本公开的化合物可用于治疗与人类或非人类的突变型kit或突突变型pdgfra活性相关的疾病或病症。在一些实施例中，本公开的化合物用作药物。在一些实施例中，本公开的化合物用于治疗。在一些实施例中，本公开的化合物用于制造药物。在一些实施例中，本公开提供了用于治疗kit驱动的恶性肿瘤的方法，包括肥大细胞增多症(sm)、胃肠道间质瘤(gist)、急性髓性白血病(aml)、黑色素瘤、精原细胞瘤、颅间生殖细胞瘤和/或纵隔b细胞淋巴瘤。此外，kit的突变与尤文肉瘤、弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、无性细胞瘤、骨髓增生异常综合征(mds)、鼻nk/t细胞淋巴瘤(nktcl)、慢性粒单核细胞白血病(cmml)和脑癌有关。在一些实施例中，本公开提供了用于治疗尤文氏肉瘤、dlbcl、无性细胞瘤、mds、nktcl、cmml和/或脑癌的方法。在甲状腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、膀胱癌、非小细胞肺癌和乳腺癌中也发现了kit突变(aacr genie项目)。在一些实施例中，本公开的化合物可用于治疗肥大细胞活化综合征(mcas)。本公开的化合物可用于治疗系统性肥大细胞增多症。本公开的化合物可用于治疗晚期系统性肥大细胞增多症。本公开的化合物可用于治疗惰性sm和冒烟型sm。本公开的化合物可用于治疗gist。
[0177]
本公开的化合物可用于治疗与kit基因序列的外显子9、外显子11、外显子14、外显子17和/或外显子18中的kit突变相关的疾病或病症。本公开的化合物可用于治疗与pdgfra基因序列的外显子12、外显子14和/或外显子18中的pdgfra突变相关的疾病或病症。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与kit基因序列的外显子9、外显子11、外显子14、外显子17和/或外显子18中的至少一个kit突变相关的疾病或病症的方法。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与pdgfra基因序列的外显子12、外显子14和/或外显子18中的至少一个pdgfra突变相关的疾病或病症的方法。
[0178]
本公开的化合物可以对一种或多种在kit基因序列的外显子17中具有突变(例如，kit蛋白突变d816v、d816y、d816f、d816k、d816h、d816a、d816g、d816e、d816i、d816f、d820a、d820e、d820g、d820y、n822k、n822h、v560g、y823d和a829p)的kit蛋白激酶具有活性，对野生型kit蛋白激酶的活性要低得多。在一些实施例中，本文提供用于治疗与至少一种kit突变(例如选自d816v、d816y、d816f、d816k、d816h、d816a、d816g、d816e、d816i、d816f、d820a、d820e、d820g、d820y、n822k、n822h、v560g、y823d和a829p的kit突变)相关的疾病或病症的
方法。在一些实施例中，本文提供用于治疗与至少一种kit突变(例如，选自c809、c809g、d816h、d820a、d820g、n822h、n822k和y823d的kit突变)相关的疾病或病症的方法。
[0179]
本公开的化合物可以对一种或多种在kit基因序列的外显子11中具有突变(例如，kit蛋白突变del557-559insf和v559g/d)的kit蛋白激酶具有活性。在一些实施例中，本文提供用于治疗与至少一种kit突变(例如，选自l576p、v559d、v560d、v560g、w557g、del 554-558evqwk、del557-559insf、del evqwk554-558、del evqwkvveeingnnyvyi554-571、del kpmyevqwk550-558、del kpmyevqw550-557fl、del kv558-559、del kv558-559n、del myevqw552-557、del pmye551-554、del vv559-560、del wkvve557-561、del wk557-558、del wkvv557-560c、del wkvv557-560f、delyevqwk553-558和插入k558np的kit突变)相关的疾病或病症的方法。
[0180]
本公开的化合物可以对一种或多种在kit基因序列的外显子11/13中具有突变(例如，kit蛋白突变v559d/v654a、v560g/d816v和v560g/822k)的kit蛋白激酶具有活性。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与外显子11/13中的一个或多个kit突变相关的疾病或病症的方法。
[0181]
本公开的化合物可以对一种或多种在kit基因序列的外显子9中具有突变的kit蛋白激酶具有活性。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与外显子9中的至少一个kit突变相关的疾病或病症的方法。
[0182]
在一些实施例中，本公开的化合物对具有突变v654a、n655t、t670i和/或n680的kit蛋白激酶没有活性。
[0183]
本公开的化合物可以对一种或多种具有突变的pdgfrα蛋白激酶具有活性。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与pdgfra基因序列的外显子12中的至少一个pdgfra突变(例如，pdgfrα蛋白质突变v561d、del rv560-561、del rvies560-564、ins er561-562、spdghe566-571r、spdghe566-571k或ins ydsrw582-586)相关的疾病或病症的方法。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与pdgfra基因序列的外显子14中的至少一个pdgfra突变(例如，pdgfrα蛋白质突变n659k)相关的疾病或病症的方法。在一些实施例中，本文提供用于治疗与pdgfra基因序列的外显子18中的至少一个pdgfra突变(例如，pdgfrα蛋白突变d842v、d842y、d842i、di842-843im、d846y、y849c、del d842、del i843、del rd841-842、del dim842-845、del dimh842-845、del imhd843-846、del mhds844-847、rd841-842ki、dimh842-845a、dimh842-845v、dimhd842-846e、dimhd842-846s、dimhd842-846n、dimhd842-846g、imhds843-847t、imhds8843-847m或hdsn845-848p)相关的疾病或病症的方法。
[0184]
本公开的化合物可以对在pdgfra基因序列中具有外显子18突变(例如，蛋白突变pdgfrαd842v、pdgfrαd842i或pdgfrαd842y)的一种或多种pdgfrα蛋白激酶具有活性。在一些实施例中，本文提供了用于治疗与外显子18中的至少一种pdgfra突变(例如，蛋白质突变pdgfrαd842v)相关的疾病或病症的方法。
[0185]
本公开的化合物可用于治疗嗜酸性粒细胞疾病。在一些实施例中，所述嗜酸性粒细胞疾病由突变型kit或pdgfrα介导。在一些实施例中，所述嗜酸性粒细胞疾病由野生型kit或pdgfrα介导。在一些实施例中，本文提供了用于治疗嗜酸性粒细胞疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物。在一个实施例中，所述嗜酸性粒细胞疾病选自嗜酸性粒细胞增多综合征、嗜酸性粒
细胞增多症、嗜酸性粒细胞性肠胃炎、嗜酸性粒细胞白血病、嗜酸性粒细胞肉芽肿和木村氏病。
[0186]
在一些实施例中，所述嗜酸性粒细胞疾病选自嗜酸性粒细胞增多综合征、嗜酸性粒细胞增多症、嗜酸性粒细胞性肠胃炎、嗜酸性粒细胞白血病、嗜酸性粒细胞肉芽肿和木村氏病。其他嗜酸性粒细胞疾病包括嗜酸性粒细胞性食管炎、嗜酸性粒细胞性胃肠炎、嗜酸细胞性筋膜炎和churg-strauss综合征。
[0187]
在一个实施例中，所述嗜酸性粒细胞疾病是嗜酸性粒细胞增多综合征。在一个具体实施例中，所述嗜酸性粒细胞增多综合征是特发性嗜酸性粒细胞增多综合征。在一个实施例中，所述嗜酸性粒细胞疾病是嗜酸性粒细胞白血病。在一个具体实施例中，所述嗜酸性粒细胞白血病是慢性嗜酸性粒细胞白血病。在另一个实施例中，使用伊马替尼、舒尼替尼和/或瑞戈非尼治疗所述嗜酸性粒细胞疾病的效果不明显。在一个具体实施例中，使用伊马替尼治疗所述嗜酸性粒细胞疾病的效果不明显。
[0188]
本公开的化合物可用于减少有需要的受试者中的嗜酸性粒细胞的数量。在一些实施例中，本文提供了用于减少有需要的受试者中的嗜酸性粒细胞的数量的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本公开的化合物或其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物。
[0189]
在一个实施例中，所公开的方法减少了血液、骨髓、胃肠道(例如，食道、胃、小肠和结肠)或肺中的嗜酸性粒细胞的数量。在另一个实施例中，本文公开的方法减少了血液中嗜酸性粒细胞的数量。在另一个实施例中，本文公开的方法减少了肺嗜酸性粒细胞的数量。在另一个实施例中，本文公开的方法减少了嗜酸性粒细胞前体细胞的数量。
[0190]
在另一个实施例中，所公开的方法使(给药后)嗜酸性粒细胞的数量减少至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一个具体实施例中，本文公开的方法将嗜酸性粒细胞的数量减少到检测限以下。
[0191]
在另一个实施例中，所公开的方法使(给药后)嗜酸性粒细胞前体的数量减少至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一个具体实施例中，本文公开的方法将嗜酸性粒细胞前体的数量减少到检测限以下。
[0192]
本公开的化合物可用于治疗肥大细胞疾病。本公开的化合物可用于治疗肥大细胞增多症。肥大细胞增多症分为以下两组疾病：(1)皮肤肥大细胞增生症(cm)描述仅限于皮肤的形式；和(2)系统性肥大细胞增多症(sm)描述了肥大细胞浸润皮肤以外器官的形式，可伴有或者不伴有皮肤受累。sm进一步分为五种形式：惰性(ism)、冒烟型(ssm)、侵袭性(asm)、伴有相关的血液学非肥大细胞谱系疾病的sm(sm-ahnmd)和肥大细胞白血病(mcl)。
[0193]
sm的诊断部分基于骨髓的组织学和细胞学研究，显示常为非典型形态的肥大细胞浸润，这些细胞经常异常表达非肥大细胞标志物(cd25和/或cd2)。当骨髓肥大细胞浸润发生在以下情况之一时，确诊为sm：(1)肥大细胞形态异常(梭形细胞)；(2)血清类胰蛋白酶水平升高至20ng/ml以上；或(3)存在激活kit蛋白突变，例如，外显子17突变(如d816突变[d816v])。
[0194]
在绝大多数(90-98％)肥大细胞增多症病例中都发现了d816位置的激活突变，其
中最常见的突变是d816v、d816h和d816y。d816v突变存在于蛋白激酶结构域的激活环中，并造成kit激酶的组成型激活。
[0195]
没有药物获批用于非晚期形式的系统性肥大细胞增多症、ism或ssm。目前控制这些慢性疾病的方法包括非特异性症状导向疗法，这些疗法具有不同程度的疗效，并且对mc负荷没有影响。细胞减灭疗法(如克拉屈滨和干扰素α)偶尔用于治疗顽固症状。根据当前的治疗前景，患有ism和ssm的中度至重度症状患者的医疗需求仍未得到满足，现有的症状导向疗法无法对这些症状进行充分控制。
[0196]
本公开的化合物可用于治疗ism或ssm。在一些实施例中，患有ism或ssm的患者具有通过至少一种、至少两种、至少三种对症疗法不能充分控制的症状。症状可以使用患者报告结局(pro)工具进行评估，例如，惰性系统性肥大细胞增生症-症状评估表(ism-saf)(ispor欧洲2019会议，丹麦哥本哈根，2019年11月2日-11月6日)。本公开的化合物可用于改善与ism或ssm相关的症状，例如，减少或消除瘙痒、潮红、头痛和/或胃肠道事件(例如呕吐、腹泻和腹痛)。可使用ism-saf来评估症状的改善情况。
[0197]
本公开的化合物可用于治疗其他肥大细胞疾病，例如肥大细胞活化综合征(mcas)和遗传性α类胰蛋白酶血症(hat)(picard clin.ther.2013年5月，35(5)548；akin j.allergy clin.immuno.140(2)349 62)。本公开的化合物可用于治疗与kit和pdgfrα突变相关的肥大细胞疾病。本公开的化合物可用于治疗与野生型kit和pdgfrα相关的肥大细胞疾病。
[0198]
本公开的化合物可用于治疗肥大细胞活化综合征(mcas)，其为一种免疫学病症，其中因肥大细胞不适当和过度释放化学介质而导致一系列慢性症状，有时包括过敏性反应或近过敏性反应发作。与肥大细胞增多症患者的肥大细胞数量异常增加不同，mcas患者的肥大细胞数量正常，其中这些肥大细胞的功能不正常且被定义为“高反应性”。mcas的类型包括原发性mcas(单克隆性肥大细胞活化综合征(mmas))、继发性mcas(由另一种疾病引起的mcas)和特发性mcas(除了原发性或继发性mcas以外的mcas)。
[0199]
本公开的化合物可用于治疗遗传性α类胰蛋白酶血症(hat)(tpsab1的过度表达导致类胰蛋白酶升高)。
[0200]
其他肥大细胞疾病包括肥大细胞介导的哮喘、过敏反应(包括特发性、ig-e和非ig-e介导的过敏反应)、荨麻疹(包括特发性和慢性荨麻疹)、特应性皮炎、肿胀(血管性水肿)、肠易激综合征、肥大细胞性胃肠炎、肥大细胞性结肠炎、瘙痒、慢性瘙痒、继发于慢性肾衰竭的瘙痒以及与肥大细胞相关的心脏、血管、肠道、大脑、肾脏、肝脏、胰腺、肌肉、骨骼和皮肤状况。在一些实施例中，肥大细胞疾病与突变型kit或突变型pdgfrα无关。
[0201]
kit和pdgfra突变已在gist中被广泛研究。本公开的化合物可用于治疗与kit突变相关的gist。本公开的化合物可用于治疗不可切除的或转移性gist。近80％的转移性gist在kit基因序列的胞外区(外显子9)或近膜(jm)结构域(外显子11)中具有初级激活突变。许多突变型kit肿瘤对靶向治疗有反应，例如伊马替尼(一种可特异性抑制bcr-abl、kit和pdgfra蛋白的选择性酪氨酸激酶抑制剂)。然而，大多数gist患者最终会由于kit的继发突变而复发，该继发突变显着降低了伊马替尼的结合亲和力。这些抗性突变总是出现在激酶基因的5-三磷酸腺苷(atp)结合口袋(外显子13和14)或激活环(外显子17和18)中。在目前获批的gist药物中，没有一种是选择性靶向药物。伊马替尼目前获批用于治疗gist，在伊马
替尼之后使用多激酶抑制剂。在许多情况下，这些多激酶抑制剂(例如，舒尼替尼、瑞戈非尼和米哚妥林)仅微弱地抑制伊马替尼抗药性突变和/或所述多激酶抑制剂由更复杂的安全特性和小治疗窗口限制。在一些实施例中，本公开的化合物可用于治疗已经用伊马替尼治疗的患者的gist。本公开的化合物可作为一线(1l)、二线(2l)、三线(3l)或四线(4l)疗法来治疗gist。
[0202]
当kit中的特定突变不存在或存在时，本公开的化合物可用于治疗gist。在一些实施例中，当kit中的特定突变不存在时，本公开的化合物能够治疗gist。在一些实施例中，当kit中的特定突变存在时，本公开的化合物不能治疗gist。在一些实施例中，本公开的化合物不能为携带kit atp结合口袋突变(kit蛋白突变v654a、n655t和/或t670i)的患者提供临床获益。
[0203]
本公开的化合物可用于治疗与pdgfra突变相关的gist。在5％至6％的患有不可切除的转移性gist的患者中，pdgfra基因序列的外显子18中位于蛋白质氨基酸842处的激活环突变作为初级突变发生。
[0204]
本公开的化合物还可用于治疗aml。aml患者也伴随有kit突变，其中大部分突变发生在kit蛋白的d816位置。
[0205]
在一些实施例中，向有需要的受试者施用本公开的化合物。在一些实施例中，本公开的化合物作为药物制剂施用，其中所述化合物与一种或多种药学上可接受的赋形剂或载体联合使用。因此，在一些实施例中，本文公开了组合物，其包括至少一种选自式i化合物及其药学上可接受的盐和/或前述任一项的溶剂化物的实体的组合物，并且任选地进一步包括至少一种药学上可接受的赋形剂。
[0206]
可以将本公开的化合物配制为在人类医学或兽医学中以任何方便的方式进行给药。在一些实施例中，药物组合物中包含的化合物本身可以是有活性的，或者可以是前药，例如，能够在生理环境中转化为活性化合物。
[0207]
本文中所用的短语“药学上可接受的”是指一些化合物、材料、组合物和/或剂型，其在合理的医学判断范围内适合与人类和动物组织接触且没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，并与合理的益处/风险比相称。
[0208]
药学上可接受的载体的实例包括：(1)糖，例如，乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如，玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如，羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；(4)黄芪胶粉；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；8)赋形剂，例如，可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如，花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如，丙二醇；(11)多元醇，例如，甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如，油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如，氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲液；(21)环糊精，例如，和(22)药物制剂中使用的其他无毒相容物质。
[0209]
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如，抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如，抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚(bha)、丁基化羟基甲苯(bht)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；(3)金属螯合剂，例如，柠檬酸、乙二胺四乙酸(edta)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。
[0210]
固体剂型(例如，胶囊、片剂、丸剂、糖衣丸、粉剂、颗粒剂等)可以包括一种或多种
药学上可接受的载体(例如，柠檬酸钠或磷酸氢钙)和/或以下任何一种：(1)填充剂或增量剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如，羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶；(3)湿润剂，例如，甘油；(4)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶解阻滞剂，例如，石蜡；(6)吸收促进剂，例如，季铵化合物；(7)润湿剂，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如，高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；和(10)着色剂。
[0211]
液体剂型可包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性成分之外，液体剂型可以包含本领域常用的惰性稀释剂，例如，水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(例如，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和失水山梨醇脂肪酸酯及其混合物。
[0212]
除了活性化合物之外，悬浮液还可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、黄芪胶及其混合物。
[0213]
除了活性化合物之外，软膏剂、糊剂、乳膏剂和凝胶剂还可以含有赋形剂，例如，动物和植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石、氧化锌或其混合物。
[0214]
除了活性化合物外，粉剂和喷雾剂还可含有赋形剂，例如，乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂可另外含有常规推进剂，例如，氯氟烃和挥发性未取代烃(例如，丁烷和丙烷)。
[0215]
本公开化合物局部或经皮给药的剂型的非限制性实例包括粉剂、喷雾剂、软膏剂、糊剂、乳膏剂、洗剂、凝胶剂、溶液剂、贴剂和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体以及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂进行混合。
[0216]
当本公开的化合物作为药物施用于人和动物时，该化合物可以单独给药或作为含有例如0.1-99.5％(如0.5-90％)的活性成分的药物组合物与药学上可接受的载体一起联合给药。
[0217]
制剂可以局部、口服、经皮、直肠、阴道、胃肠外、鼻内、肺内、眼内、静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、皮内、腹膜内、皮下、皮下或吸入给药。
[0218]
此外，本公开的化合物可以单独给药或与其他化合物一起联合给药，包括其他kit或pdgfrα调节化合物或其他治疗剂。在一些实施例中，本公开的化合物可以与利瑞普替尼一起联合给药。在一些实施例中，本公开的化合物可以与一种或多种选自伊马替尼、舒尼替尼、瑞戈非尼、卡博替尼、克诺拉尼、米哚妥林、本妥昔单抗和马赛替尼的化合物一起联合给药，用于治疗本文公开的疾病或病症。
[0219]
本公开的化合物可以施用于先前已经用另一种或多种化合物进行了治疗的患者。本公开的化合物可作为一线(1l)、二线(2l)、三线(3l)或四线(4l)疗法。
[0220]
在一些实施例中，本公开的化合物在使用伊马替尼进行治疗后给药。
[0221]
本公开的化合物可以施用于先前没有用米司他林进行治疗的患者。在一些实施例中，本公开的化合物可以施用于先前已经用米司他林进行治疗的患者。
实施例
[0222]
一般合成方法和中间体
[0223]
定义
[0224]cꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
摄氏度
[0225]
cs2co3ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
碳酸铯
[0226]
dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯甲烷
[0227]
dipea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二异丙胺
[0228]
dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基甲酰胺
[0229]
dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基亚砜
[0230]
ea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯
[0231]
edci
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺
[0232]hꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
[0233]
h2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氢气
[0234]
h2o
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
水
[0235]
hcl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
盐酸
[0236]
hoac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
醋酸
[0237]
hobt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
羟基苯并三唑
[0238]
hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱法
[0239]
ic50
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
半抑制浓度
[0240]
ipa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
异丙醇
[0241]
k2co3ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
碳酸钾
[0242]
koac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
醋酸钾
[0243]
lcms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱-质谱法
[0244]
lialh4ꢀꢀꢀꢀꢀ
氢化铝锂
[0245]
min
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
分钟
[0246]
mscl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲磺酰氯
[0247]
mtbe
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲基叔丁基醚
[0248]
meoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲醇
[0249]
n2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氮气
[0250]
naoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氢氧化钠
[0251]
na2so4ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
硫酸钠
[0252]
nh4hco3ꢀꢀꢀꢀꢀ
甲酸铵
[0253]
nmp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n-甲基吡咯烷酮
[0254]
pd/c
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
钯碳
[0255]
pd(dppf)cl
2 [1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(ii)
[0256]
pe
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
石油醚
[0257]
rt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
室温
[0258]
tea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三乙胺
[0259]
thf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
四氢呋喃
[0260]
tscl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甲苯磺酰氯
[0261]
用于制备本公开化合物的方法可在合适的溶剂中进行，所述溶剂可易于由有机合成领域的技术人员选择。合适的溶剂在反应进行的温度(例如，温度范围可从溶剂的冷冻温度至溶剂的沸腾温度)下与起始物质(反应物)、中间体或产物基本上不反应。给定的反应可以在一种溶剂或一种以上溶剂的混合物中进行。根据特定的反应步骤，技术人员可以选择用于特定反应步骤的合适溶剂。
[0262]
本公开化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可以容易地确定保护和脱保护的需要以及适当保护基团的选择。保护基团的化学性质可见于例如wuts and greene的《有机合成中的保护基团》(protective groups in organic synthesis)，第5版，john wiley&sons:new jersey，(2014年)，其全部内容通过引用并入本文。
[0263]
可以根据本领域已知的任何合适的方法对反应进行监测。例如，可通过以下方法来监测产物形成：光谱手段，如核磁共振(nmr)光谱法(例如，1h或
13
c)、红外(ir)光谱法、分光光度法(例如，紫外-可见光)和质谱分析法(ms))；或色谱方法，如高效液相色谱法(hplc)或薄层色谱法(tlc)。
[0264]
用于化合物表征的分析仪器和方法：
[0265]
lc-ms：除非另有说明，所有液相色谱-质谱(lc-ms)数据(针对纯度和特性分析的样品)用agilent型号-1260lc系统，使用agilent型号6120型质谱仪，利用装备有agilent poroshel 120(ec-c18，2.7μm粒径，3.0x50 mm尺寸)反相柱(在22.4℃下)的es-api电离获得。流动相由溶剂0.1％甲酸的h2o溶液和0.1％甲酸的乙腈溶液的混合物组成。利用在4分钟的过程中从95％含水/5％有机至5％含水/95％有机流动相的恒定梯度。流速恒定在1ml/min。
[0266]
制备型lc-ms：制备型hplc是在shimadzu discovery 制备系统上进行，所述制备系统配备有luna 5u c18(2)100a，axia填充的250x 21.2mm反相柱(在22.4℃下)。流动相由溶剂0.1％甲酸的h2o溶液和0.1％甲酸的乙腈溶液的混合物组成。利用在25分钟的过程中从95％含水/5％有机至5％含水/95％有机流动相的恒定梯度。流速恒定在20ml/min。在biotage initiator微波单元中进行微波反应。
[0267]
硅胶色谱法：在teledyne iscorf单元或isolera four单元上进行硅胶色谱法。
[0268]
质子nmr：除非另有说明，所有1h nmr谱均是用varian 400mhz unity inova 400mhz nmr仪器(采集时间＝3.5秒，1秒延迟；16至64次扫描)获得。在表征中，所有质子均在dmso-d6溶剂中以相对于残dmso(2.50ppm)的百万分率(ppm)报告。
[0269]
本领域普通技术人员将认识到梯度、柱长和流速是可以修改的，并且一些条件可能比其他条件更适合于化合物表征，这取决于被分析的化学物种。
[0270]
实施例1：合成制备
[0271]
中间体的制备
[0272]
制备方案1：(s)-1-(2-(4-(6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-1-(4-氟苯基)乙基-1-胺(i-1)
[0273][0274]
步骤1：2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(ii)的合成：将2-氯嘧啶-5-羧酸乙酯(10g，53.7mmol)加入叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(i)(10.0g，53.7mmol)和二异丙基乙胺(23.4ml，134.25mmol)于二恶烷(80ml)中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。lcms显示反应已经完成。将反应混合物进行浓缩，以得到标题化合物(ii)(17g，粗品)，其无需进一步纯化且可直接用于下一步骤。ms(es+)c
16h24
n4o4要求值：336，实测值：237、281[m-56+h]
+
。
[0275]
步骤2：2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-羧酸(iii)的合成：将钠氢氧化物(4.3g，107.5mmol)加入2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-羧酸乙酯(ii)(17g，粗品)于thf/meoh/h2o(300ml)中的溶液，并在70℃下搅拌2小时进行反应。lcms显示反应已经完成。将反应混合物冷却至室温，用1m hcl酸化至ph≈5-6，然后过滤。收集固体并干燥，得到呈白色固体状的标题化合物(iii)(16g，96％)，其无需进一步纯化且可直接用于下一步骤。ms(es+)c
14h20
n4o4要求值：308，实测值：253[m-56+h]
+
。
[0276]
步骤3：4-(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(iv)的合成：将tea(25ml，179.2mmol)加入2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-羧酸(iii)(13.8g，44.8mmol)、edci(12.8g，67.2mmol)和hobt(7.2g，53.7mmol)于dcm(200ml)的悬浮液，并将混合物在室温下搅拌1小时，然后加入n,o-二甲基羟胺(5g，53.7mmol)。将反应混合
物继续搅拌3小时。lcms显示反应已经完成。用h2o(100ml)洗涤反应混合物，干燥、过滤并浓缩有机层。通过硅胶色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)对残余物进行纯化，得到呈白色固体状的标题化合物(iv)(11.2g，67％)。ms(es+)c
16h25
n5o4要求值：351，实测值：296[m-56+h]
+
，实测值：296[m-56+h]
+
。
[0277]
步骤4：4-(5-(4-氟苯甲酰基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(v)的合成：在0℃和氮气环境下，将c6h5mgfbr(1m，在thf中，50ml)加入4-(5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(iv)(7.8g，22.22mmol)于无水thf(50ml)中的溶液，并且将混合物在室温下搅拌3小时。lcms显示反应已经完成。用1m hcl对反应混合物进行淬灭，并用ea对其进行萃取。用h2o和盐水洗涤合并的有机层，然后用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶色谱法(石油醚:ea＝5:1)对残余物进行纯化，得到呈黄色固体状的标题化合物(v)(7.2g，84％)。ms(es+)c
20h23
fn4o3要求值：386，实测值：331[m-56+h]
+
。
[0278]
步骤5：(s,z)-4-(5-(((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)(4-氟苯基)甲基)-嘧啶-2-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(vi)的合成：将4-(5-(4-氟苯甲酰基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(v)(20.0g，1.0eq)、(s)-(-)-2-甲基-2-丙烷亚磺酰胺(9.43g，1.5eq)和lioh(0.64g，0.5eq)一起加入装有甲苯(160ml)的反应釜。将异丙醇钛(iv)(18.42g，1.25eq)加入该混合物中，并将该反应混合物在50-60℃下搅拌1个小时。然后将反应混合物蒸馏以将其除去80ml，同时在40-60℃下加入额外的甲苯(80ml)。将反应混合物冷却至20-30℃并加入柠檬酸单钠溶液(80ml，ph为3-4的30％w/w柠檬酸)。将混合物在45-55℃下搅拌1.5小时，然后分离各相。用碳酸氢钾(40ml，25％w/w含水量)对有机相进行洗涤，并蒸馏有机相以将其去除40ml。化合物(vi)的产物溶液用thf(30ml)稀释，然后作为溶液直接用于下一步骤(约15％w/w)。
[0279]
步骤6：4-(5-((s)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(vii)的合成：将甲基氯化镁(27.8g，22％w/w，在thf中,2.0eq)加入(s,z)-4-(5-(((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)(4-氟苯基)甲基)-嘧啶-2-基)哌嗪-1-叔丁基羧酸酯(vi)在甲苯/thf(120g，在步骤5中制备)中的溶液，并在10℃放置超过2-3小时。将反应混合物搅拌1.5小时以使反应完全进行。加入甲醇(40ml)后，再加入h2o(10ml)来淬灭反应混合物。将混合物蒸馏以将其除去100-110ml，然后用氯化铵(80ml，h2o中20％w/w)进行洗涤。有机相用h2o(80ml)洗涤，用甲苯(60ml)稀释，并蒸馏除与去除60-80ml的蒸馏物。在50-60℃的溶液中加入正庚烷(80ml)，然后将溶液冷却至42℃，同时接种(25-50mg)。将溶液保持30分钟，然后冷却至0-10℃并保持30分钟。固体通过过滤进行分离，用正庚烷和甲苯混合物(1:1，30ml)进行洗涤，然后用正庚烷(30ml)进行洗涤。干燥产物以得到9g粗产物，即96.4％-97.2％的化合物(vii)。
[0280]
步骤6a：粗4-(5-((s)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的重结晶：将4-(5-((s)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(10.0g)溶解在在异丙醇(100ml)中并加热至40-60℃，然后通过澄清过滤器的同时用异丙醇(20ml)进行洗涤/漂洗。在40-60℃下将所得溶液进行真空蒸馏，以将其除去60-70ml。在50-60℃下用水(45ml)对混合物进行稀释，然后冷却至40℃，同时接种(25-50mg)。将混合物进一步冷却至20-25℃并加入水(20ml)。固体通过过滤进行分离，用异丙醇/水混合物(1:1，20ml)进行洗涤，然后用异丙醇/水(1:2，
30ml)进行洗涤浆液。干燥得到8.5g的产物，即》99.8％的化合物(vii)。
[0281]
步骤7：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙基-1-胺盐酸盐(viii)的合成：将4-(5-((s)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(vii)(50g，1eq)与乙醇(7.5vol)和浓盐酸(11.2m，5.6eq)进行混合。将反应混合物加热至回流温度。通过lcms显示反应完成后，在大气压下将混合物浓缩至5体积。加入乙醇继续浓缩以维持5体积，直到h2o含量≤3％。最终在2体积时停止浓缩，然后在30分钟内冷却至0-5℃。过滤后真空干燥，得到标题产物(viii)(产率92％)。
[0282]
步骤8：(s)-1-(2-(4-(6-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-1-(4-氟苯基)乙胺(i-1)的合成：将市售的6-溴-4-氯吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪(4.00g，17.2mmol)(例如，sigma aldrich)、(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙胺盐酸盐(viii)(5.81g，17.2mmol)和三乙胺(7.20ml，51.6mmol)在二恶烷(50ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。将混合物浓缩，然后通过快速柱色谱法(dcm/meoh＝20/1)纯化浓缩后的产物，以得到呈白色固体状的标题化合物(i-1)(8.0g，产率94％)。ms(es+)c
22h22
brfn8要求值：496，实测值：497、499[m+h]
+
。
[0283]
制备方案2：(s)-1-(2-(4-(6-(1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)-1-(4-氟苯基)乙胺(i-2)
[0284][0285]
用n2(g)对i-1(3.0g，6.05mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(1.17g，6.05mmol)、pd(dppf)cl2(494mg，605μmol)和k2co3(2.50g，18.2mmol)在dmf/h2o(40ml/10ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2下于70℃搅拌16小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物，以得到呈黄色固体状的标题化合物(i-2)(2.0g，产率68％)。ms(es+)c
25h25
fn
10
要求值：484，实测值：485[m+h]
+
。
[0286]
制备方案3：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙胺(i-3)
[0287][0288]
用n2(g)对i-1(1.0g，2.02mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧硼戊环)(768mg，3.12mmol)、pd(dppf)cl2(165mg，202μmol)、dppf(167mg，303μmol)和koac(395g，4.04mmol)在1,4-二恶烷(30ml)中的混合物吹扫10分钟，并在80℃下搅拌16小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝15/1)纯化残余物，以得到呈灰色固体状的标题化合物(i-3)(700mg)。ms(es+)c28h34bfn8o2要求值：544，实测值：545[m+h]
+
。
[0289]
化合物的制备
[0290]
实施例1：(s)-1-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-2-醇(1)
[0291][0292]
将i-2(根据制备方案2制备)(200mg，0.412mmol)、cs2co3(269mg，0.83mmol)和2,2-二甲基环氧乙烷(89.3mg，1.24mmol)在nmp(5ml)中的混合物在120℃下搅拌10小时。之后，用etoac稀释反应混合物，用h2o和盐水洗涤，并用na2so4干燥。真空浓缩有机层，残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(1)(74.5mg，产率32％)。ms(es+)c
29h33
fn
10
o要求值：556，实测值：557[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h),8.03(s,1h)、8.02(s,1h)、7.87(s,1h)、7.84(s,1h)、7.49-7.45(m,2h)、7.25(s,1h)、7.13-7.08(m,2h)、4.76(s,1h)、4.12-4.07(m,4h)、4.02(s,2h)、3.93-3.90(m,4h)、2.44(s,2h)、1.73(s,3h)、1.10(s,6h)。
[0293]
实施例2：(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-1-醇(2)
[0294][0295]
步骤1：2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯(xii)的合成：在室温下，将碳酸铯(16.2g，50mmol)和碘化钠(3.1g，16.7mmol)加入2-溴-2-甲基丙酸甲酯(x)(3.0g，16.7mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑的溶液(xi)(3.23g，16.7mmol)在nmp(20ml)中的溶液。将得到的混合物在120℃下搅拌8小时。之后，用dcm稀释反应混合物并依次用h2o和盐水洗涤。真空浓缩有机层，然后通过硅胶快速柱色谱法(石油醚:乙酸乙酯＝5/1)纯化残余物，以得到呈无色油状的标题化合物(xii)(1.5g，产率30％)。
[0296]
步骤2：(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯(xiii)的合成：将2-甲基-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)丙酸甲酯(xii)(178mg，0.6mmol)、i-1(300mg，0.6mmol)、pd(dppf)cl2(99mg，0.12mmol)和k2co3(251mg，1.8mmol)在dmf/h2o(8ml/2ml)中的混合物在n2(g)下于70℃搅拌4小时。之后，用dcm稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(xiii)(240mg，产率68％)。ms(es+)c
30h33
fn
10
o2要求值：584，实测值：585[m+h]
+
。
[0297]
步骤3：(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙-1-醇(2)的合成：在0℃下，将lialh4(100mg，3.4mmol)加入(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)-2-甲基丙酸甲酯(xiii)(200g，0.34mmol)在thf(20ml)中的溶液，并且将得到的混合物在室温下搅拌6小时。用h2o(100ml)和10％naoh h2o(300ml)对反应混合物进行淬灭，并用ea对其进行萃取。真空浓缩有机层，残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分
钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(2)(90.5mg，产率47％)。ms(es+)c
29h33
fn
10
o要求值：556，实测值：557[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.18(s,1h)、8.01(d,1h,j＝1.6hz)、7.87(s,1h)、7.84(s,1h)、7.52-7.43(m,2h)、7.26(d,1h,j＝1.6hz)、7.16-7.07(m,2h)、4.99(t,1h,j＝5.6hz)、4.17-4.04(m,4h)、3.98-3.87(m,4h)、3.60(d,2h,j＝5.6hz)、2.47(s,2h)、1.74(s,3h)、1.50(s,6h)。
[0298]
实施例3：(r)1-{4-[4-(4-{5-[(s)-1-氨基-1-(4-氟-苯基)-乙基]-嘧啶-2-基}-哌嗪-1-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-吡唑-1-基}-丙-2-醇(3)
[0299][0300]
在室温下，将cs2co3(400mg，1.23mmol)加入i-2(根据制备方案2制备)(200mg，412μmol)和(2r)-2-甲基环氧乙烷(xiv)(71.4mg，1.23mmol)在nmp(3.0ml)中的溶液。将混合物在120℃下搅拌2小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(3)(90.0mg，产率40％)。ms(es+)c
28h31
fn
10
o要求值：542，实测值：543[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δppm：8.40(s,2h)、8.05(s,1h)、7.80(d,1h,j＝1.6hz)、7.87(s,1h)、7.83(s,1h)、7.46(dd,2h,j＝8.8,5.6hz)、7.24(s,1h)、7.10(t,2h,j＝8.8hz)、4.96(d,1h,j＝4.8hz)、4.11-4.08(m,4h)、4.02-3.95(m,3h)、3.92-3.89(m,4h)、2.45(s,2h)、1.73(s,3h)、1.05(d,3h,j＝5.6hz)。
[0301]
实施例4：(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)乙醇(4)
[0302][0303]
将i-1(根据制备方式1制备)(500mg，1.00mmol)、市售的2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙醇(xv)(285mg，1.20mmol)(例如，astratech)、pd(dppf)cl2(219mg，300μmol)和na2co3(317mg，3.00mmol)在二恶烷/h2o(20ml/2ml)中的反
应混合物在n2(g)下于100℃搅拌过夜。将各层分离并对有机层进行真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝15/1)纯化残余物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10μm 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(4)(154.0mg，产率29％)。ms(es+)c
27h29
fn
10
o要求值：528，实测值：529[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.40(s,1h)、8.07(s,1h)、7.99(s,1h)、7.87(s,1h)、7.84(s,1h)、7.49-7.44(m,2h)、7.24(s,1h)、7.14-7.06(m,2h)、4.93(t,1h,j＝5.2hz)、4.17-4.13(m,2h)、4.12-4.07(m,2h)、3.94-3.88(m,4h)、3.89-3.71(m,2h)、2.45(br.s.,2h)、1.73(s,3h)。
[0304]
实施例4a：(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)乙醇盐酸盐
[0305]
在室温下，将hcl/二恶烷(0.05ml 4.0m)加入(s)-2-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)乙醇(30mg，0.057mmol)在meoh(5ml)中的溶液。将溶液在室温下搅拌16小时。减压除去溶剂并将产物冻干，以得到呈白色固体状并对水分敏感的标题化合物(36.0mg，产率100％)。ms(es+)c29h31fn10o要求值：528，实测值：529[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：9.47(s,3h,br)、8.45(s,2h)、8.14(s,1h)、8.11(s,1h)、7.97(s,1h)、7.87(s,1h)、7.53-7.50(m,2h)、7.44(s,1h)、7.31-7.28(m,2h)、4.16-4.14(m,6h)、4.00-3.89(m,4h)、3.76-3.74(m,2h)、2.03(s,3h)。
[0306]
实施例5：(r)-2-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(5)
[0307][0308]
步骤1：(s)-1-(苄氧基)丙-2-基4-甲基苯磺酸盐(xvii)的合成：将tscl(6.30g，33.13mmol)加入(s)-1-(苄氧基)丙-2-醇(xvi)(5.0g，30.12mmol)和tea(9.17g，90.36mmol)在dcm(80ml)中的溶液。将混合物在室温下搅拌24小时。用dcm稀释溶液并依次用h2o和盐水洗涤。浓缩有机层，然后通过硅胶快速柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)将残余
物纯化，以得到呈无色油状的标题化合物(xvii)(4.0g，产率42％)。ms(es+)c
17h20
o4s要求值：320，实测值：338[m+18]
+
。
[0309]
步骤2：(r)-1-(1-(苄氧基)丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xviii)的合成：将(s)-1-(苄氧基)丙-2-基4-甲基苯磺酸盐(xvii)(2.0g，6.25mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xi)(1.22g，6.25mmol)和cs2co3(4.08mg，12.5mmol)在nmp(12ml)中的混合物在110℃下通过微波照射0.5小时。之后，用ea稀释溶液并依次用h2o和盐水洗涤。浓缩有机层，然后通过硅胶快速柱色谱(pe/ea＝4/1)将残余物纯化，以得到呈无色油状的标题化合物(xviii)(1.6g，产率75％)。ms(es+)c
19h27
bn2o3要求值：342，实测值：343[m+h]
+
。
[0310]
步骤3：(r)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(xix)的合成：将pd/c(800mg)和hoac(0.2ml)加入(r)-1-(1-(苄氧基)丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xviii)(800mg，2.34mmol)在meoh(20ml)中的溶液，将溶液用h2(g)吹扫5分钟，然后在h2(g)下于室温放置16小时。之后，将混合物过滤并将滤液浓缩，以得到呈无色油状的标题化合物(xix)(300mg，产率51％)。ms(es+)c
12h21
bn2o3要求值：252，实测值：253[m+h]
+
。
[0311]
步骤4：(r)-2-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(5)的合成：用n2(g)对((r)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(xix)(150mg，595μmol)、i-1(295mg，595μmol)、pd(dppf)cl2(49mg，60μmol)和k2co3(250mg，1.79mmol)在dmf/h2o(4ml/1ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2(g)下于70℃搅拌16小时。用etoac萃取混合物，并将合并的有机提取物进行浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)进一步纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(5)(148.1mg，产率46％)。ms(es+)c
28h31
fn
10
o要求值：542，实测值：543[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.11(s,1h)、8.00(s,1h)、7.87(s,1h)、7.83(s,1h)、7.48-7.44(m,2h)、7.25(s,1h)、7.14-7.08(m,2h)、4.98(t,1h,j＝5.2hz)、4.36-4.32(m,1h)、4.10-4.08(m,4h)、3.92-3.90(m,4h)、3.69-3.61(m,2h)、2.45(s,2h)、1.73(s,3h)、1.41(d,3h,j＝6.8hz)。
[0312]
实施例6：(s)-2-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(6)
[0313][0314]
步骤1：(r)-1-(苄氧基)丙-2-基-4-甲基苯磺酸盐(xxiii)的合成：将tscl(4.13g，21.7mmol)加入(r)-1-(苄氧基)丙-2-醇(xxii)(3.0g，18mmol)和tea(5.48g，54.2mmol)在dcm(30ml)中的溶液。将得到的混合物在25℃下搅拌16小时。然后对混合物进行真空浓缩，并通过硅胶快速柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化残留物，以得到呈黄色油状的标题化合物(xxiii)(2.30g，产率39％)。ms(es+)c
17h20
o4s要求值：320，实测值：338[m+18]
+
。
[0315]
步骤2：(s)-1-(1-(苄氧基)丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxiv)的合成：将(r)-1-(苄氧基)丙-2-基-4-甲基苯磺酸盐(xxiii)(2.20g，6.87mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xi)(2.00g，10.3mmol)和cs2co3(2.24g，6.87mmol)在nmp(50ml)中的混合物在110℃下通过微波照射16小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝5/1-4/1)纯化残余物，以得到呈黄色油状的标题化合物(xxiv)(1.80g，产率39％)。ms(es+)c
19h27
bn2o3要求值：342，实测值：343[m+h]
+
。
[0316]
步骤3：(s)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(xxv)的合成：将pd/c(800mg)和hoac(0.2ml)加入(s)-1-(1-(苄氧基)丙-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxiv)(0.90g，2.6mmol)在meoh(20ml)中的混合物。用h2(g)将所得混合物吹扫5分钟，然后在h2(g)下于室温下搅拌16小时。之后，将混合物过滤并浓缩，以得到呈黄色油状的标题化合物(xxv)(500mg，产率75％)。ms(es+)c
12h21
bn2o3要求值：252，实测值：253[m+h]
+
。
[0317]
步骤4：(s)-2-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(6)的合成：在n2(g)下对(s)-2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)丙-1-醇(xxv)(98mg，392μmol)、i-1(130mg，261μmol)、k2co3(200mg，227mmol)和pd(dppf)cl2(20mg，27μmol)在dmf/h2o(5ml/1ml)中的混合物于70℃搅拌4小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分
钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(6)(40.7mg，产率28％)。ms(es+)c
28h31
fn
10
o要求值：542，实测值：543[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.10(s,1h)、7.99(s,1h)、7.87(s,1h)、7.83(s,1h)、7.47(dd,2h,j＝8.8,5.6hz)、7.24(s,1h)、7.11(t,2h,j＝8.8hz)、4.96(t,1h,j＝5.6hz)、4.38-4.35(m,1h)、4.11-4.08(m,4h)、3.92-3.90(m,4h)、3.70-3.60(m,2h)、2.43(s,1h)、1.73(s,3h)、1.41(d,3h,j＝6.8hz)。
[0318]
实施例7：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(氧杂环丁-3-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙-1-胺(7)
[0319][0320]
用n2对1-(氧杂环丁-3-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxvi)(600mg，2.4mmol)、i-1(1.19g，2.4mmol)、pd(dppf)cl2(391mg，0.48mmol)和k2co3(994mg，7.2mmol)在dmf/h2o(16ml/4ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2(g)下于70℃搅拌3小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化混合物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(7)(236.3mg，产率18％)。ms(es+)c
28h29
fn
10
o要求值：540，实测值：541[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.32(s,1h)、8.03(d,1h,j＝1.6hz)、7.99(s,1h)、7.88(s,1h)、7.52-7.44(m,2h)、7.29(d,1h,j＝1.6hz)、7.16-7.07(m,2h)、5.64-5.52(m,1h)、4.99-4.94(m,2h)、4.93-4.89(m,2h)、4.12-4.06(m,4h)、3.97-3.87(m,4h)、2.50(br.s.,2h)、1.74(s,3h)。
[0321]
实施例8：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(氧杂环丁-3-基甲基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙基-1-胺(8)
[0322][0323]
步骤1：氧杂环丁-3-基甲磺酸甲酯(xxviii)的合成：在0℃下，将mscl(429mg，3.75mmol)加入氧杂环丁-3-基甲醇(xxvii)(300mg，3.40mmol)和tea(1.03g，10.2mmol)在dcm(10ml)中的溶液。在室温下将反应混合物搅拌3小时，然后用dcm稀释，用饱和na2co3溶液洗涤，并用无水na2so4干燥。真空蒸发溶剂，以得到呈黄色油状的标题化合物(xxviii)(280mg，产率49％)。
[0324]
步骤2：1-(氧杂环丁-3-基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxix)的合成：将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xi)(280g，1.44mmol)、氧杂环丁-3-基甲磺酸甲酯(xxviii)(275mg，1.66mmol)和cs2co3(1.41g，4.33mmol)在dmf(20ml)中的混合物在70℃下搅拌4小时，然后用dcm稀释并用盐水洗涤。真空蒸发有机层。通过硅胶快速柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化残余物，以得到标题化合物(xxix)(320mg，产率71％)。ms(es+)c
13h21
bn2o3要求值：264，实测值：265[m+h]
+
。
[0325]
步骤3：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(氧杂环丁-3-基甲基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙基-1-胺(8)的合成：在n2(g)下对i-1(300mg，392μmol)、1-(氧杂环丁-3-基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxix)(239mg，904μmol)、k2co3(250mg，1.81mmol)和pd(dppf)cl2(30mg，41μmol)在dmf/h2o(10ml/2ml)中的混合物于70℃搅拌4小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，以得到呈白色固体状的标题化合物(8)(40.2mg，产率12％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.09(s,1h)、7.98(s,1h)、7.87(s,1h)、7.84(s,1h)、7.47(dd,2h,j＝8.8,5.6hz)、7.22(s,1h)、7.11(t,2h,j＝8.8hz)、4.69-4.65(m,2h)、4.45-4.41(m,4h)、4.10-4.08(m,4h)、3.92-3.89(m,4h)、
3.46-3.41(m,1h)、2.45(s,2h)、1.73(s,3h)。
[0326]
实施例9：(s)-1-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基-嘧啶-2-基}-哌嗪-1-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-吡唑-1-基}-丙-2-醇(9)
[0327][0328]
i-2(220mg，455μmol)、(s)-2-甲基环氧乙烷(xxx)(79mg，1.37mmol)和cs2co3(445mg，1.37mmol)在nmp(2ml)中的混合物。将混合物在120℃下用微波照射1小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(9)(108mg，产率44％)。ms(es+)c
28h31
fn
10
o要求值：542，实测值：543[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.05(s,1h)、8.00(s,1h)、7.87(s,1h)、7.83(s,1h)、7.48-7.44(m,2h)、7.25(s,1h)、7.14-7.08(m,2h)、4.96(d,1h,j＝4.4hz)、4.10-4.08(m,4h)、4.02-3.98(m,3h)、3.92-3.90(m,4h)、2.44(s,2h)、1.73(s,3h)、1.06(d,3h,j＝5.6hz)。
[0329]
实施例10：顺式-3-(4-(4-(4-(5-(s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)环丁醇(10)
[0330][0331]
步骤1：反式-3-(苄氧基)环丁基4-甲基苯磺酸盐(xxxii)的合成：将tscl(389g，2.0mmol)和tea(343mg，3.4mmol)加入反式-3-(苄氧基)环丁醇(xxxi)(300mg，1.7mmol)在dcm(20ml)中的溶液。将混合物在室温下搅拌16小时。用dcm稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并
浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝5/1)纯化残余物，以得到呈无色油状的标题化合物(xxxii)(315mg，产率56％)。ms(es+)c
18h20
o4s要求值：332，实测值：350[m+18]
+
。
[0332]
步骤2：顺式-3-(苄氧基)环丁基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxxiii)的合成：将反式-3-(苄氧基)环丁基4-甲基苯磺酸盐(xxxii)(315mg，0.95mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xi)(185g，0.95mmol)和cs2co3(619mg，1.9mmol)在nmp(5ml)中的混合物在110℃下通过微波照射0.5小时。之后，用ea稀释溶液并依次用h2o和盐水洗涤。对有机层进行真空浓缩，然后通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝4/1)纯化残余物，以得到呈无色油状的标题化合物(xxxiii)(190mg，产率56％)。ms(es+)c
20h27
bn2o3要求值：354，实测值：355[m+h]
+
。
[0333]
步骤3：顺式-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)环丁醇(xxxiv)的合成：将pd/c(200mg)和hoac(5滴)加入顺式-3-(苄氧基)环丁基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxxiii)(190mg，0.54mmol)在meoh(5ml)中的溶液，将溶液用h2(g)吹扫5分钟，然后在h2(g)下于室温搅拌16小时。过滤混合物，并在真空下蒸发滤液至干，以得到呈无色油状的标题化合物(xxxiv)(85mg，产率60％)。ms(es+)c
13h21
bn2o3要求值：264，实测值：265[m+h]
+
。
[0334]
步骤4：(顺式-3-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)环丁醇(10)的合成：用n2对顺式-3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑-1-基)环丁醇(xxxiv)(55mg，0.21mmol)、i-1(104mg，0.21mmol)、pd(dppf)cl2(18mg，0.021μmol)和k2co3(87mg，0.63)在dmf/h2o(4ml/1ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2(g)下于70℃搅拌16小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝8/1)纯化残余物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(10)(14.6mg，产率13％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.17(s,1h)、8.00(s,1h)、7.87-7.86(m,2h)、7.49-7.45(m,2h)、7.26(s,1h)、7.19-7.13(m,2h)、5.33(d,1h,j＝6.4hz)、4.38-4.31(m,1h)、4.13-4.06(m,4h)、3.99-3.96(m,1h)、3.94-3.88(m,4h)、2.79-2.71(m,2h)、2.34-2.31(m,2h)、1.73(s,3h)。
[0335]
实施例11：反式-3-{4-[4-(4-{5-[1-氨基-1-(4-氟-苯基)-乙基]-嘧啶-2-基}-哌嗪-1-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-吡唑-1-基}-环丁醇(11)
[0336][0337]
步骤1：顺式-甲苯-4-磺酸3-苄氧基-环丁基酯(xxxvi)的合成：将4-甲基-苯磺酰氯(640mg，3.37mmol)加入顺式-3-苄氧基-环丁醇(xxxv)(500mg，2.81mmol)和tea(851mg，8.43mmol)在dcm(10ml)中的溶液，并将所得混合物在室温下搅拌16小时。将混合物用盐水稀释并用dcm萃取。浓缩有机提取物。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝11/1)纯化残余物，以得到呈黄色固体状的标题化合物(xxxvi)(490mg，产率53％)。ms(es+)c
18h20
o4s要求值：332，实测值：350[m+18]
+
。
[0338]
步骤2：反式-1-(3-苄氧基-环丁基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxxvii)的合成：将顺式-甲苯-4-磺酸3-苄氧基-环丁基酯(xxxvi)(500g，1.51mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xi)(430mg，2.22mmol)和cs2co3(1.47g，4.51mmol)在nmp(15ml)中的混合物在120℃下搅拌2小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝1/1)纯化残余物，以得到呈黄色固体状的标题化合物(xxxvii)(227mg，产率42％)。ms(es+)c
20h27
bn2o3要求值：354，实测值：355[m+h]
+
。
[0339]
步骤3：反式-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-吡唑-1-基]-环丁醇(xxxviii)的合成：将pd/c(200mg)和浓hcl(0.5ml)加入反式-1-(3-苄氧基-环丁基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xxxvii)(420mg，1.18mmol)在meoh(10ml)中的溶液。将反应混合物在h2(g)下于室温搅拌16小时。将混合物过滤并将滤液浓缩，以得到呈固体状的标题化合物(xxxviii)(250mg，产率80％)。ms(es+)c
13h21
bn2o3要求值：264，实测值：265[m+h]
+
。
[0340]
步骤4：反式-3-{4-[4-(4-{5-[1-氨基-1-(4-氟-苯基)-乙基]-嘧啶-2-基}-哌嗪-1-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-吡唑-1-基}-环丁醇(11)的合成：用n2(g)对反式-3-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2-基)-吡唑-1-基]-环丁醇(xxxviii)(200mg，0.76mmol)、i-1(376mg，0.76mmol)、pd(dppf)cl2(61.8mg，0.076mmol)和k2co3(313mg，2.27mmol)在二恶烷/h2o(4ml/1ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2(g)下于70℃搅拌4小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法纯化残余
物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(11)(27.2mg，产率6％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.18(s,1h)、7.99(d,1h,j＝1.2hz)、7.87-7.85(m,2h)、7.49-7.45(m,2h)、7.24(s,1h)、7.15-7.08(m,2h)、5.24(d,1h,j＝5.2hz)、4.92-4.89(m,1h,)、4.50-4.43(m,1h)、4.17-4.10(m,4h)、3.96-3.90(m,4h)、2.67-2.61(m,2h)、2.44(s,2h)、2.42-2.37(m,2h)、1.73(s,3h)。
[0341]
实施例12：(s)-1-((4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)甲基)环丙烷-1-醇(12)
[0342][0343]
步骤1：2-(4-溴-1h-吡唑-1-基)乙酸乙酯(xl)的合成：将4-溴-1h-吡唑(xxxix)(8.0g，55mmol)和k2co3(15.2g，110mmol)在2-氯乙酸乙酯(25ml)中的混合物在80℃下搅拌15小时。将反应混合物冷却，用ea稀释，并用h2o洗涤。蒸发有机层，并通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5:1)残余物，以得到呈淡黄色固体状的标题化合物(xl)(8.5g，产率66％)。ms(es+)c7h9brn2o2要求值：232，实测值：233[m+h]
+
。
[0344]
步骤2：乙基1-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)环丙烷-1-醇(xli)的合成：将乙基溴化镁溶液(3m，在己烷中，30ml，90mmol)加入2-(4-溴-1h-吡唑-1-基)乙酸乙酯(xl)(7.0g，30mmol)和钛酸四异丙酯(4.26g，15mmol)在无水thf(60ml)中的溶液，将其在60℃下滴加2小时。在相同温度下搅拌2小时后，将反应混合物用ea稀释并依次用1n hcl水溶液和h2o洗涤。蒸发有机层，并通过硅胶色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝20:1-3:1)残余物，以得到呈黄色固体状的标题化合物(xli)(1.3g，产率20％)。ms(es+)c7h9brn2o要求值：216，实测值：217[m+h]
+
。
[0345]
步骤3：4-溴-1-[1-(四氢-吡喃-2-基氧基)-环丙基甲基]-1h-吡唑(xlii)的合成：在室温下，将对甲苯磺酸吡啶鎓(346mg，1.38mmol)加入1-((4-溴-1h-吡唑-1-基)甲基)环丙烷-1-醇(xli)(300mg，1.38mmol)和3,4-二氢-2h-吡喃(348mg，4.14mmol)在dcm(8ml)中的溶液。将混合物搅拌4小时，然后用盐水稀释并用dcm洗涤。浓缩有机层，然后通过硅胶快速柱色谱(pe/ea＝10/1)将残余物纯化，以得到呈白色固体状的标题化合物(xlii)(200mg，产率48％)。ms(es+)c
12h17
brn2o2要求值：300，实测值：217[m-thp+h]
+
。
[0346]
步骤4：1-(4-氟-苯基)-1-{2-[4-(6-{1-[1-(四氢-吡喃-2-基氧基)-环丙基甲基]-1h-吡唑-4-基}-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-哌嗪-1-基]-嘧啶-5-基}-乙胺
(xliii)的合成：将4-溴-1-{[1-(氧杂-2-基氧基)环丙基]甲基}-1h-吡唑(xlii)(160mg，0.531mmol)、i-3(577mg，1.06mmol)、pd(dppf)cl2(77.5mg，106μmol)和na2co3(168mg，1.59mmol)在1,4-二恶烷(3ml)、h2o(1ml)和dmf(0.5ml)的混合物中的混合物在n2(g)下于80℃搅拌3小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(乙酸乙酯/甲醇＝4:1)纯化残余物，以得到呈棕色固体状的标题化合物(270mg，产率50％)。ms(es+)c
34h39
fn
10
o2要求值：621，实测值：622[m+h]
+
。
[0347]
步骤5：1-{4-[4-(4-{5-[1-氨基-1-(4-氟-苯基)-乙基]-嘧啶-2-基}-哌嗪-1-基)-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基]-吡唑-1-基甲基}-环丙烷醇(12)的合成：在室温下，将对甲苯磺酸(180mg，1.04mmol)加入1-(4-氟-苯基)-1-{2-[4-(6-{1-[1-(四氢-吡喃-2-基氧基)-环丙基甲基]-1h-吡唑-4-基}-吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-哌嗪-1-基]-嘧啶-5-基}-乙胺(xliii)(200mg，0.32mmol)在meoh(4ml)中的溶液，并将所得混合物搅拌2小时。将反应混合物浓缩，并通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(10mm nh4hco3&0.025％nh3·
h2o)，b＝乙腈；梯度：7分钟内b＝51-56％，15分钟停止；柱：agela durashell c18(l)21.2
×
250mm，10μm,)，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(12)(56mg，产率31％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δppm：8.40(s,2h)、8.10(s,1h)、8.02(s,1h)、7.87(s,1h)、7.82(s,1h)、7.48-7.44(m,2h)、7.25(s,1h)、7.13-7.08(m,2h)、5.57(s,1h)、4.17(s,2h)、4.13-4.05(m,4h)、3.95-3.85(m,4h)、1.73(s,3h)、0.69-0.66(m,4h)。
[0348]
实施例13：(s)-(1-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)环丙基)甲醇(13)
[0349][0350]
步骤1：1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环丙烷羧酸甲酯(xiv)的合成：在0℃下，将nah(1.20g，30.14mmol)加入4-溴-1h-吡唑(xxxix)(2.0g，13.70mmol)在thf(50ml)中的溶液。在室温下将该溶液搅拌1小时，然后向搅拌后的溶液中加入2,4-二溴丁酸甲酯(xliv)(3.53g，13.70mmol)。将混合物搅拌16小时，然后用ea稀释。依次用h2o和用盐水洗涤有机层，并进行真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(xiv)(570mg，产率17％)。ms(es+)c8h9brn2o2要求值：244，实测
值：245[m+h]
+
。
[0351]
步骤2：(1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环丙基)甲醇(xlvii)的合成：将nabh4(257mg,6.75mmol)加入1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环丙烷羧酸甲酯(xiv)(550mg，2.25mmol)在meoh(15ml)中的溶液，并且将所得混合物在50℃搅拌36小时。用dcm稀释反应混合物，依次用h2o和盐水洗涤，并进行真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝1/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(xlvii)(300mg，产率62％)。ms(es+)c7h9brn2o要求值：216，实测值：217[m+h]
+
。
[0352]
步骤3：(s)-(1-(4-(4-(4-(5-(1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)环丙基)甲醇(13)的合成：用n2(g)对(1-(4-溴-1h-吡唑-1-基)环丙基)甲醇(xlvii)(100mg，463μmol)、i-3(按照制备方式3制备)(380mg，695μmol)、pd(t-bu3p)2(47mg，93μmol)和cs2co
3 452mg，1.39mmol)在thf/h2o(8ml/2ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2(g)下于80℃搅拌12小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(13)(57.3mg，产率22％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.15(s,1h)、8.00(d,1h,j＝1.6hz)、7.87(s,1h)、7.83(s,1h)、7.48-7.44(m,2h)、7.27(d,1h,j＝1.6hz)、7.14-7.08(m,2h)、5.00(t,1h,j＝5.6hz)、4.10-4.08(m,4h)、3.92-3.90(m,4h)、3.66(d,2h,j＝5.6hz)、2.43(s,2h)、1.73(s,3h)、1.13-1.11(m,2h)、1.05-1.02(m,2h)。
[0353]
实施例14：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(r)-四氢呋喃-3-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙胺(14)
[0354][0355]
步骤1：(s)-四氢呋喃-3-基甲磺酸酯(xlix)的合成：将mscl(4.7g，25.0mmol)加入四氢呋喃-3-醇(xlviii)(2.0g，22.7mmol)和tea(4.6g，45.4mmol)在dcm(20ml)中的溶液。将混合物在室温下搅拌16小时。然后用dcm稀释反应混合物，依次用h2o和盐水洗涤，用无水na2so4干燥，并浓缩至干，以得到呈黄色油状的标题化合物(xlix)(2.0g，粗品)。
[0356]
步骤2：(r)-1-(四氢呋喃-3-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(i)的合成：在室温下，将4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(xi)(3.3g，17.2mmol)和cs2co3(11.2g，34.3mmol)加入(s)-四氢呋喃-3-基甲磺酸酯(xlviii)(1.9g，11.4mmol)在nmp(50ml)中的溶液。将混合物在120℃下搅拌2小时。用ea稀释溶液，依次用h2o和盐水洗涤，并进行真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝4/1)纯化残余物，以得到呈无色油状的标题化合物(i)(2.3g，产率76％)。ms(es+)c
13h21
bn2o3要求值：264，实测值：265[m+h]
+
。
[0357]
步骤3：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(r)-四氢呋喃-3-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙胺(14)的合成：将(r)-1-(四氢呋喃-3-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(i)(80mg，0.3mmol)、i-1(150mg，0.3mmol)、pd(dppf)cl2(50mg，0.06mmol)和k2co3(125mg，0.9mmol)在dmf(2ml)和h2o(0.5ml)中的混合物在n2(g)下于80℃搅拌16小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝16/1)纯化残余物。所得材料随后通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(14)(65mg，产率38％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.16(s,1h)、8.01(s,1h)、7.87(s,2h)、7.49-7.45(m,2h)、7.26(s,1h)、7.14-7.08(m,2h)、5.05-4.99(m,1h)、4.10-4.04(m,4h)、4.02-3.98(m,2h)、3.94-3.82(m,6h)、2.44-2.28(m,4h)、1.73(s,3h)。
[0358]
实施例15：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(s)-四氢呋喃-3-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙胺(15)
[0359][0360]
步骤1：(r)-四氢呋喃-3-基甲磺酸酯(lii)的合成：在室温下，将mscl(1.43g，12.5mmol)加入(r)-四氢呋喃-3-醇(li)(1.0g,11.4mmol)和tea(2.3g，23mmol)在dcm(20ml)中的溶液，然后将所得混合物在室温下搅拌6小时。用dcm稀释反应混合物，依次用h2o和盐水洗涤，并浓缩，以得到呈无色油状的标题化合物(lii)(1.4g，粗品)。
[0361]
步骤2：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(s)-四氢呋喃-3-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙胺(15)的合成：将i-2(300mg，0.62mmol)、(r)-四氢呋喃-3-基甲磺酸酯(lii)(155mg，0.93mmol)和cs2co3(600mg，1.89mmol)在nmp(10ml)中的混合物在120℃下搅拌16小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。残留物直接通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(15)(133.5mg，产率39％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：
554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.17(s,1h)、8.02(d,1h,j＝0.8hz)、7.88(s,2h)、7.52-7.44(m,2h)、7.26(s,1h)、7.11(t,2h,j＝17.6hz)、5.08-4.99(m,1h)、4.16-4.05(m,4h)、4.04-3.97(m,2h)、3.96-3.88(m,5h)、3.87-3.80(m,1h)、2.48-2.43(m,2h)、2.43-2.36(m,1h)、2.32-2.25(m,1h)、1.74(s,3h)。
[0362]
实施例16：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙基-1-胺(16)
[0363][0364]
步骤1：四氢-2h-吡喃-4-基甲磺酸酯(liv)的合成：在0℃下，将mscl(5.38g，47.0mmol)加入四氢-2h-吡喃-4-醇(liii)(3.20g，31.3mmol)和tea(9.51g，94.0mmol)在dcm(100ml)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后用dcm稀释，用饱和na2co3水溶液洗涤，并用无水na2so4干燥。除去溶剂，以得到呈黄色油状的标题化合物(liv)(3.2g，粗品)。
[0365]
步骤2：1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(lv)的合成：将四氢-2h-吡喃-4-基甲磺酸酯(liv)(3.20g，17.7mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(4.13g，21.3mmol)和cs2co3(8.68g，26.6mmol)在nmp(50ml)中的混合物在80℃下搅拌4小时。用dcm稀释反应混合物并用盐水洗涤。真空蒸发有机层。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝5/1)纯化残余物，以得到标题化合物(lv)(1.2g，产率24％)。ms(es+)c
14h23
bn2o3要求值：278，实测值：279[m+h]
+
。
[0366]
步骤3：(s)-1-(4-氟苯基)-1-(2-(4-(6-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1h-吡唑-4-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)哌嗪-1-基)嘧啶-5-基)乙基-1-胺(16)的合成：在n2(g)下对i-1(300mg，603μmol)、1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)-1h-吡唑(lv)(210mg，754μmol)、k2co3(104mg，754μmol)和pd(dppf)cl2(30mg，41μmol)在dmf/h2o(10ml/2ml)中的混合物于70℃搅拌4小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。残留物通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙
腈；梯度：18分钟内b＝15％-95％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(16)(40.2mg，产率6％)。ms(es+)c
30h33
fn
10
o要求值：568，实测值：569[m+h]
+
。1h nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.19(s,1h)、7.99(s,1h)、7.88(s,1h)、7.86(s,1h)、7.48-7.45(m,2h,)、7.24(s,1h)、7.13-7.09(m,2h)、4.42-4.37(m,1h)、4.12-4.40(m,4h)、3.99-3.96(m,2h)、3.92-3.90(m,4h)、3.52-3.46(m,2h)、2.43(s,2h)、2.05-1.92(m,4h)、1.73(s,3h)。
[0367]
实施例17：(3r,4r)-4-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(17)
[0368][0369]
步骤1：外消旋-反式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lvii)的合成：将3,6-二氧杂双环[3.1.0]己烷(lvi)(5.2g，60.5mmol)、4-溴-1h-吡唑(xxxix)(8.8g，60.5mmol)和cs2co3(39.3g，121mmol)在nmp(100ml)中的混合物在120℃下搅拌16小时。将溶液冷却并用dcm稀释，然后用h2o和盐水洗涤。将有机层浓缩并通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝3/1)纯化，以得到呈无色固体状的标题化合物(lvii)(10g，产率71％)。ms(es+)c7h9brn2o2要求值：232，实测值：233[m+18]
+
。
[0370]
步骤2：外消旋-顺式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-基4-硝基苯甲酸盐(lviii)的合成：将外消旋-反式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lvii)(2.7g，11.6mmol)、4-硝基苯甲酸(1.95g，11.6mmol)、偶氮二甲酸二异丙酯(3.53mg，17.4mmol)和三苯基膦(4.57g，17.4mmol)在thf(50ml)中的混合物在室温下搅拌16小时。用ea稀释溶液并用h2o和盐水洗涤。将有机层浓缩并通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝3/1)纯化，以得到呈无色油状的标题化合物(lviii)(4g，产率90％)。ms(es+)c
14h12
brn3o5要求值：381，实测值：382[m+h]
+
。
[0371]
步骤3：(3s,4s)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lx)(峰1)和(3r,4r)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lxi)(峰2)的合成：将外消旋-顺式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-基4-硝基苯甲酸盐(lvii)(4g，10.5mmol)和氢氧化锂(2.2g，52.5mmol)在meoh/thf/h2o(30ml/30ml/30ml)中的混合物室温下搅拌4小时。用ea稀释所得混合物，用h2o和盐水洗涤，并进行真空浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(pe/ea＝3/1＝3/1)纯化残余物，以得到呈无色油状的外消旋-顺式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇
(1.3g，产率53％)。ms(es+)c7h9brn2o2要求值：232，实测值：233[m+h]
+
。该材料经过sfc进行手性分离(柱：ad 20
×
250mm，10μm(daicel)；流动相：co2/meoh(甲醇中的0.2％氨)＝60/40；流量：80g/min)，以得到峰1(lx)(500mg)和峰2(lxi)(500mg)。峰1被任意指定为(3s,4s)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇，并且峰2被任意指定为(3r,4r)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇。
[0372]
步骤4：(3r,4r)-4-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(17)的合成：将(3r,4r)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lxi)(70mg，0.3mmol)(步骤3制备的峰2)、i-3(328.3mg，0.6mmol)、pd[(t-bu)3p]2(31mg，0.06mmol)和na2co3(96mg，0.9mmol)在二恶烷/h2o(8ml/2ml)中的混合物在90℃下搅拌4小时。冷却后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(17)(106.3mg，产率62％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o2要求值：570，实测值：571、554[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.15(s,1h)、8.03(s,1h)、7.88(s,1h)、7.87(s,1h)、7.52-7.42(m,2h)、7.28(s,1h)、7.17-7.10(m,2h)、5.33(d,1h,j＝4.8hz)、4.92-4.83(m,1h)、4.46-4.38(m,1h)、4.21-4.05(m,6h)、4.01(m,1h)、3.95-3.85(m,4h)、3.73(m,1h)、2.45(s,2h)、1.73(s,3h)。
[0373]
实施例18：(3r,4s)-4-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(18)
[0374][0375]
步骤1：外消旋-反式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lvii)的手性分离：外消旋-反式-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(1.1g)(由实施例17的步骤1制备)通过sfc(柱：ad 20
×
250mm，10μm(daicel)；流动相：co2/meoh(meoh中的0.2％氨)＝80/20；流量：80g/min)进行手性分离，以得到峰1(lxiii)(400mg)和峰2(lxiv)(500mg)。峰1被任意指定为(3r,4s)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇，并且峰2被任意指定为(3s,4r)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇。
[0376]
步骤2：(3r,4s)-4-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(18)的合成：将(3r,4s)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lxiii)(70mg，0.3mmol)(步骤1制备的峰1)、i-3(328.3mg，0.6mmol)、pd[(t-bu)3p]2(31mg，0.06mmol)和na2co3(96mg，0.9mmol)在二恶烷/h2o(8ml/2ml)中的混合物用n2排气并在90℃下搅拌4小时。之后，用dcm稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(18)(55.6mg，产率33％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o2要求值：570，实测
值：571、554[m+h]
+
、[m+h-nh3]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.15(s,1h)、8.03(s,1h)、7.91(s,1h)、7.88(s,1h)、7.51-7.43(m,2h)、7.28(s,1h)、7.16-7.07(m,2h)、5.66(d,1h,j＝4hz)、4.75-4.67(m,1h)、4.51-4.42(m,1h)、4.20(m,1h)、4.15-3.99(m,6h)、3.96-3.85(m,4h)、3.63(m,1h)、2.47(s,2h)、1.73(s,3h)。
[0377]
实施例19：(3s,4r)-4-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(19)
[0378][0379]
将(3s,4r)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lxiv)(70mg，0.3mmol)(实施例22中步骤1制备的峰2)、i-3(328.3mg，0.6mmol)、pd[(t-bu)3p]2(31mg，0.06mmol)和na2co3(96mg，0.9mmol)在二恶烷/h2o(8ml/2ml)中的混合物用n2排气并在90℃下搅拌4小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(19)(51.9mg，产率31％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o2要求值：570，实测值：571、554[m+h]
+
和[m+h-nh3]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.15(s,1h)、8.03(s,1h)、7.91(s,1h)、7.88(s,1h)、7.52-7.43(m,2h)、7.28(s,1h)、7.19-7.06(m,2h)、5.66(d,1h,j＝4.4hz)、4.75-4.66(m,1h)、4.51-4.41(m,1h)、4.20(m,1h)、4.16-3.99(m,6h)、3.97-3.83(m,4h)、3.63(dd,1h,j＝9.6hz,j＝2.8hz)、2.54(s,2h)、1.73(s,3h)。
[0380]
实施例20：(3s,4s)-4-(4-(4-(4-(5-(s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(20)
[0381][0382]
将(3s,4s)-4-(4-溴-1h-吡唑-1-基)四氢呋喃-3-醇(lxiii)(50mg，0.22mmol)(实施例21中步骤3制备的峰1)、i-3(234.5mg，0.44mmol)、pd[(t-bu)3p]2(22mg，0.044mmol)和
na2co3(68mg，0.66mmol)在二恶烷/h2o(8ml/2ml)中的混合物在90℃下搅拌4小时。冷却后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物，以得到呈白色固体状的标题化合物(20)(74.6mg，产率61％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o2要求值：570，实测值：571、554[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.15(s,1h)、8.03(d,1h,j＝1.6hz)、7.88(s,1h)、7.87(s,1h)、7.51-7.44(m,2h)、7.28(d,1h,j＝1.2hz)、7.17-7.10(m,2h)、5.33(d,1h,j＝5.6hz)、4.93-4.83(m,1h)、4.47-4.38(m,1h)、4.20-4.06(m,6h)、4.01(m,1h)、3.95-3.88(m,4h)、2.45(s,2h)、3.73(m,1h)、1.76(s,3h)。
[0383]
实施例21：(1s,2s)-2-(4-(4-(4-(5-((s)-1-氨基-1-(4-氟苯基)乙基)嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-6-基)-1h-吡唑-1-基)环丁醇(21)
[0384][0385]
步骤1：反式-2-(苄氧基)环丁醇和顺式-2-(苄氧基)环丁醇的合成：在0℃下，将nabh4(432mg，11.4mmol)加入2-(苄氧基)环丁酮(1.0g，5.7mmol)在meoh(20ml)中的溶液。然后将溶液在室温下搅拌3小时。用ea稀释混合物，用水和盐水洗涤，然后将有机层浓缩并通过硅胶快速柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，以得400mg呈无色油状的峰1(任意指定为顺式-2-(苄氧基)环丁醇)和400mg呈无色油状的峰2(任意指定为反式-2-(苄氧基)环丁醇)。ms(es+)c
11h14
o2要求值：178，实测值：179[m+h]
+
。
[0386]
步骤2：顺式-2-(苄氧基)环丁基甲磺酸酯的合成：在0℃下，将甲磺酰氯(259mg，2.28mmol)和三乙胺(459mg，4.56mmol)加入顺式-2-(苄氧基)环丁烷醇(270mg，1.52mmol)在dcm(10ml)中的溶液。将混合物在室温下搅拌3小时。之后，用dcm稀释溶液，用水和盐水洗涤，用无水na2so4干燥，并浓缩，以得到呈无色油状的标题化合物(300mg，产率77％)。ms(es+)c
12h16
o4s要求值：256，实测值：274[m+18]
+
。
[0387]
步骤3：反式-2-(苄氧基)环丁基)-4-溴-1h-吡唑的合成：将顺式-2-(苄氧基)环丁基甲磺酸酯(300mg，1.17mmol)、4-溴-1h-吡唑(171mg，1.17mmol)和cs2co3(1.15g，3.51mmol)在dmf(8ml)中的混合物在100℃下搅拌16小时。之后，用ea稀释溶液，用水和盐水洗涤，用无水na2so4干燥，浓缩并通过快速柱色谱法(pe/ea＝5/1)纯化，以得到呈无色油状的标题化合物(170mg，产率47％)。ms(es+)c
14h15
brn2o要求值：306，实测值：307[m+h]
+
。反
1-基)嘧啶-5-基)乙胺(362mg，667μmol)、pd(t-bu3p)2(50mg，99μmol)和cs2co3(362mg，1.12mmol)在二恶烷/h2o(8ml/2ml)中的混合物吹扫10分钟，并在n2(g)下于90℃搅拌4小时。之后，用ea稀释溶液，用h2o和盐水洗涤，并浓缩。通过硅胶快速柱色谱法(dcm/meoh＝10/1)纯化残余物。所得材料通过制备型hplc(流动相：a＝h2o(0.1％nh4hco3)，b＝乙腈；梯度：18分钟内b＝30％-60％；柱：xtimate
tm 10um 150a 21.2
×
250mm)纯化，然后将其冻干，得到呈白色固体状的标题化合物(51.5mg，产率17％)。ms(es+)c
29h31
fn
10
o要求值：554，实测值：555[m+h]
+
。1h-nmr(400mhz,6d-dmso)δppm：8.41(s,2h)、8.19(s,1h)、8.00(d,1h,j＝1.6hz)、7.88(s,2h)、7.48-7.44(m,2h)、7.26(d,1h,j＝1.6hz)、7.14-7.08(m,2h)、5.67(d,1h,j＝7.2hz)、4.46-4.39(m,1h)、4.34-4.26(m,1h)、4.10-4.06(m,4h)、3.92-3.90(m,4h)、2.44(s,2h)、2.16-2.10(m,2h)、1.89-1.79(m,1h)、1.73(s,3h)、1.62-1.52(m,1h)。
[0394]
实施例2：生化酶活性测定
[0395]
使用perkin elmer电泳迁移率技术平台(ezreader 2)对pdgfrα和kit酶活性。在激酶和atp存在的情况下以及在供试化合物存在的情况下，对荧光标记的底物肽进行孵育，使得各剂量供试化合物与待磷酸化的肽成反映性比例。
[0396]
在激酶酶促反应的线性稳态阶段，磷酸化(产物)和非磷酸化(底物)肽的混合池在施加的电势差下通过perkinelmer ez reader 2的微流体系统。产物肽上磷酸基团的存在提供了底物肽之间的质量和电荷差异，导致样品中底物和产物池的分离(perrin等人，《药物发现专家意见》(expert opin drug discovery)，2010年1月，5(1):51-63)。
[0397]
当产物和底物肽混合物通过仪器内的激光时，可检测到这些混合池(λex＝488nm，λem＝568nm)并将其解析为分离峰。这些峰之间的比值反映了化合物在该浓度下、在该孔中、在这些条件下的活性。
[0398]
kit(d816v)pdgfrα(d842v)突变体生化酶活性的抑制
[0399]
所有试验样品都以10mm的原液浓度溶解与100％dmso。在100％dmso中，从相关浓度(通常为1mm)开始，对所有供试化合物进行100倍、10点、4倍的连续稀释。使用ttp labtech蚊式纳米升分配器将每种浓度的化合物以0.130μl体积转移到384孔酶联板(greiner 781 201)的相关孔中。然后，使用multidrop分配器将反应的剩余组分加入到0.130μl的化合物中，如下所示：
[0400]
在atp表观米氏常数(appkm)下进行pdgfrαd842v检测：在存在或不存在一剂量浓度系列的化合物(最终的dmso浓度为1％)的情况下，在384孔酶联板的每个孔中，将7nm的未处理酶在总共13μl的缓冲液(ph为7.5的100mm hepes，0.015％brij35，10mm mgcl2，1mm dtt)中与1μm csktide(5-fam-aha-kkkkddiyfffg-nh2)和25μm atp一起在25℃孵育90分钟。通过加入70μl的终止缓冲液(ph为7.5的100mm hepes，0.015％brij 35，35mm edta和0.2％的涂布剂3,caliper lifesciences)来终止反应。在caliper ezreader 2上读取该板的数据。
[0401]
在atp appkm下进行kit d816v检测：在存在或不存在一剂量浓度系列的化合物(最终的dmso浓度为1％)的情况下，在384孔酶联板的每个孔中，将0.3nm的未处理酶在总共13μl的缓冲液(ph为7.5的100mm hepes，0.015％brij 35，10mm mgcl2，1mm dtt)中与1μm srctide(5-fam-geeplywsfpakkk-nh2)和20μm atp一起在25℃孵育60分钟。通过加入70μl的终止缓冲液(ph为7.5的100mm hepes，0.015％brij 35，35mm edta和0.2％的涂布剂3,
caliper lifesciences)来终止反应。在caliper ezreader 2上读取该板的数据。根据实施例制备的化合物在这些实验中获得的结果总结在下表2中。使用以下字母表示生化d816v和d842v活性：≤0.30nm＝a；≥0.31和《1nm＝b；和nd＝未确定。使用以下字母表示hmc1.2细胞系中的细胞活性：a表示《4.5nm；b表示≥4.6且《10nm；和nd＝未确定。
[0402]
表2
[0403]
[0404][0405]
作为参考，wo2015/057873中实施例63的化合物的化学结构如下：
[0406][0407]
实施例3：hmc1.2自磷酸化测定
[0408]
将10000个hmc1.2细胞在384孔板的每个孔和22μl培养基(无酚红imdm，无血清)中孵育，并将血清在组织培养培养箱(5％co2，37℃下)中饥饿培养整夜。然后，将10点剂量浓度系列的化合物(2.5μm-9.54pm)以3.1μl的体积添加到每个孔的细胞中(最终的dmso浓度为0.25％)。90分钟后，将6μl添加有蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(cell signaling technologies)的5
×
alphalisa裂解缓冲液(perkin elmer)加入到每个孔中，并在4℃下以450rpm的速度振荡15分钟。将10μl磷酸化-y719 c-kit和总c-kit抗体(15nm最终浓度，cell signaling technologies)和50μg/ml alphalisa兔受体微珠(perkin elmer)加入到每个孔中，并在室温下以300rpm的速度振荡2小时。将10μl的100μg/ml链霉亲和素供体微珠(perkin elmer)加入到每个孔中，用黑色固体胶黏剂避光，并在室温下以300rpm的速度振荡2小时。通过alphascreen 384孔hts协议，在envision(perkin elmer)上获得荧光信号。将数据归一化为0％和100％抑制对照，并使用四参数逻辑ic
50
曲线拟合计算ic
50
。
[0409]
该表显示了化合物在肥大细胞白血病细胞系hmc 1.2中的活性。该细胞系包含在位置v560g和d816v突变的kit，其造成激酶的组成型激活。通过测定kit蛋白上酪氨酸719处的kit自磷酸化，在测定法中测试以下化合物以测量对kit d816v激酶活性的直接抑制。根据实施例制备的化合物在这些实验中的结果总结在表2中。
[0410]
实施例4：大鼠脑血浆比中脑渗透率(k
p
,brain)的评估
[0411]
为了理解脑渗透，在sprague-dawley(sd)大鼠中获得了化合物的脑血浆比。在临床前物种(如大鼠)中，血液和大脑之间的体内平衡分布是评估脑渗透率的常用参数。k
p
,brain是大脑和血液中浓度的比率(c
脑
/c
血浆
)。该化合物的被动扩散特性、其在血脑屏障(bbb)处对膜转运蛋白的亲和力以及血浆蛋白和脑组织之间的相对药物结合亲和力差异会影响k
p
,brain。k
p
,brain小于0.1的化合物进入cns受到限制，而k
p
,brain大于0.3-0.5的化合物被认为具有良好的脑渗透性，并且k
p
,brain大于1的化合物可以自由穿过bbb(《药物发现专家意见》(expert opin drug discovery)(2016)13(01):85-92))。
[0412]
在sprague-dawley大鼠(3/化合物)中测量了化合物4和63的脑渗透率。通过颈静脉插管，动物在24小时内接受1mg/kg/hr的化合物静脉输注。24小时后，通过尾静脉出血或心脏穿刺(在麻醉下)采血，并离心以获得血浆样品。收集脑组织并用磷酸盐缓冲液(pbs)进行匀浆。通过lc-ms/ms分析获得血浆和脑匀浆中化合物的浓度。下表3a显示了根据本文所述实施例制备的化合物4和wo2015/057873的化合物63的血浆和脑浓度以及k
p
,brain的结果。
[0413]
表3a
[0414][0415]
与化合物63(平均值＝1.8)相比，化合物4呈现非常低的k
p
,brain值(平均值＝0.17)。
[0416]
使用平衡透析法在体外评估化合物4和63的大鼠血浆蛋白结合能力。在位于透析块中的100％血浆中于37℃下将化合物4(10μm)评估5小时。通过lc-ms/ms分析来自供体和受体侧的样品。血浆蛋白结合和未结合分数使用以下公式计算：
[0417]
结合分数(fb)*(％)＝100x([供体]
5h-[受体]
5h
)/[供体]
5h
ꢀꢀ
(公式1)
[0418]
未结合分数(fu),p*(％)＝100-结合％*
ꢀꢀ
(公式2)
[0419]
其中：[供体]
5h
是在5小时时测得的供体浓度；[受体]
5h
是在5小时时测得的受体浓度；fb*是从血浆中确定的结合分数；和fu,p*是血浆的未结合分数。华法林和奎尼丁用作阳性对照。
[0420]
化合物4和63的fb分别为97.92％和99.8％。因此，化合物4和63的fu,p分别为2.08％和0.2％。
[0421]
同样，还使用平衡透析法在体外评估了化合物4和63的大鼠血浆蛋白结合能力。在位于透析块中的脑浆中于37℃下将1μm化合物评估5小时。通过lc-ms/ms分析来自供体和受体侧的样品。使用上述公式(公式1和2)计算脑蛋白结合和未结合分数。由于大量的蛋白质结合，将化合物4进一步稀释4倍用于脑匀浆测量。化合物4和63的fu,brain分别为0.29％和0.1％。
[0422]
未结合的脑与血浆比率(kpuu,brain)
[0423]
基于以上获得的脑和血浆浓度(表3a)和fu,brain值，计算化合物4和63的未结合
的脑与血浆比率(k
puu
,brain)，如下所示：
[0424][0425]
与化合物63(平均值＝0.84)相比，化合物4呈现非常优秀的的低k
p,uu
,brain值(平均值＝0.024)。组织中的未结合药物浓度是指可用于在组织隔室中发挥其药理作用的游离药物的含量。与化合物63相比，化合物4具有非常低的k
p,uu
,brain值，这意味着相比于化合物63，化合物4在脑中可用于发挥其药理学作用的量非常低。
[0426]
或者，在培养盘中通过使用300um厚的大鼠脑切片(纹状体区域)，对化合物4和63的大鼠脑蛋白结合能力在体外进行评估。通过该方法得到的化合物4和63的fu,brain分别为0.329％和0.057％。在这种情况下，化合物4和63的k
p,uu
,brain分别为0.028和0.044。
[0427]
表3b中列出了根据实施例制备的其它公开化合物的kp和kp,uu(脑匀浆)和kp,uu(脑切片)结果。根据上述方法获得表3b中的结果。
[0428]
表3b
[0429][0430]
*由于高蛋白结合，无法进行测量
[0431]
化合物作为p-糖蛋白的潜在底物的评估
[0432]
根据实施例制备的化合物作为人p-糖蛋白(p-gp)底物的潜力在体外对多药耐药突变1-madin-darby犬肾(mdr1-mdck)(madin-darby犬肾)细胞单层进行评估，所述细胞单层在可渗透支持物上过度表达p-gp。将elacridar用作p-gp介导的奎尼丁转运的阳性对照抑制剂。更高的p-gp流出率意味着化合物被转运蛋白推出了脑组织。
[0433]
大鼠单次静脉和口服给药后的药代动力学评估：对于每种给药途径(静脉或口服给药)，每种化合物使用3只sprague-dawley大鼠进行评估。对于静脉给药，1mg/kg的每种化合物(剂量体积＝5ml/kg)通过静脉途径经食物背静脉注射给药；而对于口服给药，2.5mg/kg的每种化合物(剂量体积＝5ml/kg)通过口服管饲法给药。在给药前、0.083小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时和8小时时通过尾静脉获得血液样本。此外，在24小时时，通过心脏穿刺(在异氟醚麻醉下)获得血液样本，用于最终出血样本。通过lc/ms-ms分析所有血液样本的药物浓度。通过非房室分析(nca)获得药代动力学参数，例如c
max
、t
max
、auc
last
、auc
inf
、mrt
last
、mrt
inf
、t
1/2
、v
ss
和cl。此外，按如下公式计算获得游离清除率(clu)：
[0434]
clu＝cl/f
u,plasma
。
[0435]
％f按如下公式计算：
[0436]
％f＝[auc
inf
(口服)/剂量]/[auc
inf
(静脉)/剂量]*100
[0437]
(zhivkova和doytchinova，《分子制药学》(molecular pharmaceuticals)10:3758-68(2013))。
[0438]
表3c
[0439][0440]
实施例5：cyp抑制数据
[0441]
根据标准方法对人肝微粒体进行体外研究。总之，将七种不同浓度的供试品或单一浓度的阳性对照品与混合的人肝微粒体中每种cyp450酶的单一浓度探针底物共同孵育5-10分钟，然后通过在乙腈中加入0.1％甲酸终止反应。然后，通过lc-ms/ms分析样品以定量反应后留下的探针底物，并通过非线性回归确定ic
50
值。cyp2c9、cyp2d6、cyp3a4的底物分别为双氯芬酸、右美沙芬和咪达唑仑/睾酮。表4中的数据显示了根据cyp2c9、cyp2d6和cyp3a4的实施例制备的化合物的cyp抑制的ic
50
值。
[0442]
表4
[0443][0444]
实施例6：使用静脉注射的猴血浆蛋白结合、猴k
p
、猴k
p,uu
(匀浆/脑切片)
[0445]
施用单次静脉推注剂量后，向猴子静脉输注该化合物2小时(3只猴子/化合物)。在推注给药后和输注结束时，从给药前的股静脉收集血液。注射后对猴子实施安乐死，并收集脑组织。对血浆(通过血液离心获得)和脑(在缓冲液中均质化)进行毒物动力学评估，以获得该化合物的脑血浆比(kp)。通过如上所述的fu,plasma和fu,brain来计算kpuu。
[0446]
表5
[0447]
化合物kp(大脑：血浆)kpuu40.090.01631.860.92
[0448]
实施例7：野生型kit的生化活性测定
[0449]
通过scf刺激进行的ut-7细胞增殖的测定作为野生型kit活性的衡量标准
[0450]
ut-7细胞是人类原巨核细胞型白血病细胞系，可在依赖粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或干细胞因子(scf)的培养基中生长。ut-7细胞通过激活kit受体酪氨酸激酶和随后的可支持细胞生长和增殖的下游信号来响应scf刺激(kuriu等人，1999年；komatsu等人，1991年；sasaki等人，1995年)。测定了供试化合物抑制scf刺激的ut-7细胞增殖的能力。
[0451]
使用celltiter-glo测定法评估了对scf刺激的ut-7细胞增殖的抑制作用，该测定法量化了存在的三磷酸腺苷(atp)的量，该量是代谢活性细胞的读数并与培养基中的活细胞数成正比。通过使用供试化合物的25μm至95.4pm范围内的10点剂量曲线，确定了供试化合物抑制scf刺激的ut-7细胞增殖的能力。
[0452]
ut-7细胞保存于添加了10％fbs、5ng/ml gm-csf和100units/ml青霉素-链霉素的imdm培养基，并在37℃加湿的组织培养箱中生长。ut-7细胞用无血清、无gm-csf的imdm洗涤一次。然后，将细胞重新悬浮在含有4％fbs和50ng/ml scf的imdm培养基中，并以每孔2500个细胞的方式将22μl的细胞接种于384孔微孔板。然后，将10点剂量浓度系列的供试化合物(25.0μm-95.4pm)以3.1μl的体积添加到每个孔的细胞中(最终的dmso浓度为0.25％)，并置于组织培养箱(5％co2，37℃)中培养72小时。使用供试化合物3天后，新鲜制备celltiter-glo试剂并向每个孔中加入25μl试剂。在微孔板振荡仪上，以300rpm的速度在室温下将该板振荡10分钟来进行混合。使用用于384孔板的超灵敏发光协议在envision读板器上读取该板的数据。将数据归一化为0％和100％抑制对照，并使用四参数逻辑ic
50
曲线拟合计算
ic
50
。
[0453]
野生型kit测定
[0454]
kd测定：对于大多数测定(包括野生型kit激酶测定)，激酶标记的t7噬菌体菌株是在源自bl21菌株的大肠杆菌宿主中制备的。大肠杆菌生长至对数期，用t7噬菌体感染，并在32℃下振荡孵育直至裂解。链霉亲和素包被的磁珠在室温下用生物素化的小分子配体处理30分钟，以生成用于激酶测定的亲和树脂。用过量生物素封闭配体珠，并用封闭缓冲液(seablock(pierce)、1％bsa、0.05％吐温20、1mm dtt)进行洗涤，以除去未结合的配体并减少非特异性结合。通过在1x结合缓冲液(20％seablock、0.17xpbs、0.05％吐温20、6mm dtt)中组合激酶、配体亲和珠和供试化合物来装配结合反应。将供试化合物制备为100％dmso中的111x储备液。使用具有三个dmso控制点的11点3倍化合物稀释系列测定kd。用于kd测量的所有化合物通过声传递(非接触分配)分布在100％dmso中。然后，将化合物直接稀释到分析物中，使得dmso的最终浓度为0.9％。所有反应均在聚丙烯384孔板中进行。每个化合物的最终体积为0.02ml。将酶联板在室温下振荡孵育1小时，并用洗涤缓冲液(1xpbs、0.05％吐温20)对亲和珠进行洗涤。然后将珠子重新悬浮在洗脱缓冲液(1xpbs、0.05％吐温20、0.5μm非生物素化亲和配体)中，并在室温下振荡孵育30分钟。通过qpcr测定洗脱液中的激酶浓度。
[0455]
结合常数(kd)：结合常数(kd)通过使用hill方程的标准剂量-反应曲线计算：反应＝背景+信号
–
背景1+(kdhill斜率/剂量hill斜率)。将hill斜率设置为-1。使用具有levenberg-marquardt算法的非线性最小二乘法对曲线进行拟合。
[0456]
根据实施例制备的化合物在这些野生型kit实验中获得的结果总结在下表7中。使用以下字母表示野生型kit结合：《10.0nm＝a；≥10.1nm和《15nm＝b；≥15.1nm和《20nm＝c。使用以下字母表示增殖抑制：《90.0nm＝a；≥90.1nm和《150nm＝b；≥150.1nm和《200nm＝c。
[0457]
表7
[0458]