本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种酵母的分离方法。
背景技术：
硒(selenium，se)是人和动物体必需的微量元素，对动物的免疫、生长、繁育和抗衰老等具有重要的作用。缺se会导致人和动物多种疾病的发生，如动物的甲状腺机能减退和免疫功能低下、人的克山病(ke.shahdisease，ksd)和大骨节病、禽的渗出性素质、胰腺坏死以及种蛋的受胎和孵化率降低等。现有技术中人们对硒元素的利用，主要通过无机物或有机物的形态添加到食品或者保健品中，但是普遍存在着吸收差、综合效果不理想的问题。
富硒酵母是一种非常安全、营养丰富、均衡的食用微生物，富硒酵母是酵母在发酵过程中，以各种方式把无机硒运输进细胞内转化为有机硒，再经过离心、烘干等工艺制得的富硒制剂，其中有机硒含量在90％以上，有机硒主要为硒蛋氨酸和硒半胱氨酸。
因此，建立一种高效、快速的分离方法，以便于分离得到富硒酵母显得尤为重要。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术中存在的技术问题。为此，本发明提供一种酵母的分离方法，目的是便于分离得到富硒的酵母。
基于上述目的，本发明提供了一种酵母的分离方法，包括如下步骤：
步骤一、制备有机硒母液：在每升水中加入亚硒酸钠0.2-0.5mg、烟酸3-6mg、甘氨酸1-2mg，搅拌混匀后调节ph值5-6，即得有机硒母液；
步骤二、孵育：取酵母发酵液与有机硒母液以体积比80-100:1置于混匀仪上进行室温孵育；
步骤三、磁力架分离；
步骤四、0.1％pbst洗涤、pbs缓冲液重悬后即得。
所述步骤一中搅拌混匀是在60-80℃条件下进行的。
所述步骤二中室温孵育的时间为20-30min，转速为25-30r/min。
所述步骤三中磁力架分离的时间为3-5min。
所述步骤二中还加入有预处理的多臂井星聚合物，预处理的多臂井星聚合物与酵母发酵液的质量体积比为1-2:80-100mg/ml，所述预处理的多臂井星聚合物的制备方法是将1mg多臂井星聚合物悬浮于3-4mlpbs磷酸缓冲液中，之后搅拌滴加25％的戊二醛水溶液，使戊二醛的终浓度为1-2％，然后经摇床反应、减压旋干溶剂后得到。
所述pbs磷酸缓冲液的浓度为0.01mol/l，ph为8，摇床的转速为100-120r/min，反应时间为3-4h。
所述多臂井星聚合物为多臂井星化聚酰胺-胺，其分子量为70000da。
所述分离方法还包括对pbs缓冲液混重悬后的酵母进行干燥、粉碎及过筛的步骤。
本发明的有益效果：
1、本发明通过合理的方法，分离出了富含硒的酵母，方法简单，成本低。
2、本发明借助了多臂井星聚合物的级联放大效应，在较低的磁场强度下就能实现酵母菌的分离，且在相同的时间内，较常规免疫磁珠分离方法相比，分离能力更强。同时，采用多臂井星聚合物，可以使反应溶液更加稳定，不易发生沉淀。
3、本发明分离出的富硒酵母，具有易培养、可保存的特性，可作为原料用于配置含硒的营养保健食品。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。
需要说明的是，除非另外定义，本发明实施例使用的技术术语或者科学术语应当为本公开所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。“包括”或者“包含”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同，而不排除其他元件或者物件。
实施例1
一种酵母的分离方法，包括如下步骤：
步骤一、制备有机硒母液：称取亚硒酸钠0.3mg、烟酸3mg、甘氨酸1mg，溶于1升水中，边搅拌边升温至80℃，搅拌混匀后调节ph值5.5，即得有机硒母液，备用；
步骤二、孵育：取酵母发酵液与有机硒母液以体积比80:1置于混匀仪上，以25r/min的转速室温孵育20min；其中，酵母发酵液采用如下方法获得：以5％的接种量将酵母菌接种于的酵母发酵培养基中，发酵20h，发酵温度为30℃。在培养过程中，采用氨水和盐酸调节培养基的ph，ph调节为5.5。
每升发酵培养基含有：
麦芽糖与葡萄糖的混合物40g，豆粕与豆饼粉的混合物8g，酵母粉2g，10％麸皮浸出汁25g，氯化钠1g，磷酸二氢钾2g，地瓜粉1.5g，甜菜碱0.8g。ph调节为5.5。
步骤三、采用常规的磁力架分离4min；
步骤四、磁力分离后，用0.1％pbst清洗两次，之后用pbs缓冲液重悬后即得。
0.1％pbst配制方法：8.0gnacl、0.2gkcl、0.24gkh2po4、1.44gna2hpo4溶解于800ml蒸馏水中，用5mnaoh调整ph至7.3，再定容至1000ml即得0.01mpbs。再以1/1000(v/v)的体积比加入tween20，即获得0.1％pbst。
实施例2
一种酵母的分离方法，包括如下步骤：
步骤一、制备有机硒母液：称取亚硒酸钠0.5mg、烟酸6mg、甘氨酸2mg，溶于1升水中，边搅拌边升温至85℃，搅拌混匀后调节ph值5.8，即得有机硒母液，备用；
步骤二、孵育：取酵母发酵液与有机硒母液以体积比100:1置于混匀仪上，以30r/min的转速室温孵育20min；其中，酵母发酵液采用如下方法获得：以5％的接种量将酵母菌接种于的酵母发酵培养基中，发酵20h，发酵温度为30℃。在培养过程中，采用氨水和盐酸调节培养基的ph，ph调节为5.8。
每升发酵培养基含有：
麦芽糖与葡萄糖的混合物40g，豆粕与豆饼粉的混合物8g，酵母粉2g，10％麸皮浸出汁25g，氯化钠1g，磷酸二氢钾2g，地瓜粉1.5g，甜菜碱0.8g。ph调节为5.8。
步骤三、采用常规的磁力架分离5min；
步骤四、磁力分离后，用0.1％pbst清洗两次，之后用pbs缓冲液重悬后即得。
0.1％pbst配制方法：8.0gnacl、0.2gkcl、0.24gkh2po4、1.44gna2hpo4溶解于800ml蒸馏水中，用5mnaoh调整ph至7.3，再定容至1000ml即得0.01mpbs。再以1/1000(v/v)的体积比加入tween20，即获得0.1％pbst。
实施例3
一种酵母的分离方法，包括如下步骤：
步骤一、制备有机硒母液：称取亚硒酸钠0.4mg、烟酸5mg、甘氨酸1mg，溶于1升水中，边搅拌边升温至80℃，搅拌混匀后调节ph值5.5，即得有机硒母液，备用；
步骤二、孵育：取酵母发酵液、预处理的多臂井星聚合物与有机硒母液以体积比80:1:1置于混匀仪上，以25r/min的转速室温孵育20min；其中，酵母发酵液采用如下方法获得：以5％的接种量将酵母菌接种于的酵母发酵培养基中，发酵20h，发酵温度为30℃。在培养过程中，采用氨水和盐酸调节培养基的ph，ph调节为5.5。
每升发酵培养基含有：
麦芽糖与葡萄糖的混合物40g，豆粕与豆饼粉的混合物8g，酵母粉2g，10％麸皮浸出汁25g，氯化钠1g，磷酸二氢钾2g，地瓜粉1.5g，甜菜碱0.8g。ph调节为5.5。
预处理的多臂井星聚合物的制备方法是将1mg多臂井星聚合物多臂井星化聚酰胺-胺，悬浮于3mlpbs磷酸缓冲液(浓度为0.01mol/l，ph8.0)中，之后搅拌滴加25％的戊二醛水溶液，使戊二醛的终浓度为1％，然后在摇床100r/min的转速下反应时间为3h，最后进行减压旋干溶剂后得到。
步骤三、采用常规的磁力架分离3min；
步骤四、磁力分离后，用0.1％pbst清洗两次，之后用pbs缓冲液重悬后，用50℃热风进行干燥，再采用常规方法粉碎过筛，即得。
其中，0.1％pbst配制方法：8.0gnacl、0.2gkcl、0.24gkh2po4、1.44gna2hpo4溶解于800ml蒸馏水中，用5mnaoh调整ph至7.3，再定容至1000ml即得0.01mpbs。再以1/1000(v/v)的体积比加入tween20，即获得0.1％pbst。
实施例4
一种酵母的分离方法，包括如下步骤：
步骤一、制备有机硒母液：称取亚硒酸钠0.4mg、烟酸5mg、甘氨酸1mg，溶于1升水中，边搅拌边升温至80℃，搅拌混匀后调节ph值5.5，即得有机硒母液，备用；
步骤二、孵育：取酵母发酵液、预处理的多臂井星聚合物与有机硒母液以体积比100:2:1置于混匀仪上，以30r/min的转速室温孵育20min；其中，酵母发酵液采用如下方法获得：以5％的接种量将酵母菌接种于的酵母发酵培养基中，发酵20h，发酵温度为30℃。在培养过程中，采用氨水和盐酸调节培养基的ph，ph调节为5.5。
每升发酵培养基含有：
麦芽糖与葡萄糖的混合物40g，豆粕与豆饼粉的混合物8g，酵母粉2g，10％麸皮浸出汁25g，氯化钠1g，磷酸二氢钾2g，地瓜粉1.5g，甜菜碱0.8g。ph调节为5.5。
预处理的多臂井星聚合物的制备方法是将1mg多臂井星聚合物多臂井星化聚酰胺-胺，悬浮于3mlpbs磷酸缓冲液(浓度为0.01mol/l，ph8.0)中，之后搅拌滴加25％的戊二醛水溶液，使戊二醛的终浓度为2％，然后在摇床120r/min的转速下反应时间为3h，最后进行减压旋干溶剂后得到。
步骤三、采用常规的磁力架分离3min；
步骤四、磁力分离后，用0.1％pbst清洗两次，之后用pbs缓冲液重悬后，用50℃热风进行干燥，再采用常规方法粉碎过筛，即得。
其中，0.1％pbst配制方法：8.0gnacl、0.2gkcl、0.24gkh2po4、1.44gna2hpo4溶解于800ml蒸馏水中，用5mnaoh调整ph至7.3，再定容至1000ml即得0.01mpbs。再以1/1000(v/v)的体积比加入tween20，即获得0.1％pbst。
对上述各实施例所分离出的酵母分别置于三角瓶中，加蒸馏水超声分散20min，静置15分钟后，将酵母浆液转移至离心管中，在5000r/min的转速下离心15min，取出上清液，用原子吸收光谱法测定硒含量。经测试结果表明，实施例1至实施例4所得酵母中均含有硒。
通过对上述各实施例的酵母分离结果表明，实施例3和实施例4能够更好的实现酵母的分离，减少分离时间，提高分离效率。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
本发明的实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。