一种转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法

1.本发明属于生物医药领域，具体涉及一种转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法。


背景技术：

2.脱髓鞘病变是一种急性发作或亚急性损害神经中枢的疾病，发病高峰为二到三周，若治疗延误受损神经继发缺血变性则发生多发性硬化，发病严重时可侵犯脊髓前角细胞和脑干神经核以及大脑运动皮质锥体细胞危及生命，多为基因免疫异常或病毒感染所致。早期的治疗多以激素及营养疗法治疗，但疗效难以控固，由于本病导致髓鞘脱失致神经功能损害严重时继发轴索损害从而复发使神经功能症状进一步加重。
3.导致脱髓鞘病变的因素是复杂的，遗传和环境因素都有可能导致疾病的发生，不过目前对于其病因并没有完全了解，因而也对其治疗方法的改进造成了困难。
4.脱髓鞘病变的动物模型有助于我们对脱髓鞘病变和多发性硬化症发病机制的理解，因此，构建脱髓鞘病变的动物模型可以帮助我们进一步阐明这一复杂的机制，以及如何将其作为治疗干预的靶点。


技术实现要素：

5.本发明目的是建立一种用药物莨菪亭建立的转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱髓鞘疾病模型的构建方法，可用于治疗脱髓鞘疾病药物的高通量筛选。
6.本发明采用的技术方案是：
7.一种转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法，其特征在于，将mbp转基因斑马鱼置于莨菪亭溶液中，3～6天即可完成斑马鱼脱脊髓疾病模型的构建。
8.进一步，所述mbp转基因斑马鱼是将外源基因egfp整合到斑马鱼基因组，由mbp基因驱动egfp表达，从而获得髓鞘可视化的mbp转基因斑马鱼。
9.进一步，所述莨菪亭溶液浓度为18.5ug/ml，培养1天完成斑马鱼模型的构建。
10.同现有技术相比，本发明的有益效果体现在：
11.(1)本发明的脱脊髓疾病模型的构建方法简单、快速、高效，可以为脱髓鞘病变的研究提供基础；
12.(2)本发明将外源基因egfp整合到斑马鱼基因组，由mbp基因驱动egfp表达，得到髓鞘可视化的mbp转基因斑马鱼，使得研究结果更加直观。
附图说明
13.图1是激光共聚焦显微镜分析control组、溶剂对照组(1％dmso)和莨菪亭处理组斑马鱼中的髓鞘。
14.图2是行为学分析control组、溶剂对照组和莨菪亭处理组斑马鱼的活跃度。
具体实施方式
15.下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，单本发明的保护范围并不仅限于此：
16.主要试剂及检测试剂盒：mbp转基因斑马鱼，购自国家斑马鱼资源中心；莨菪亭，购置麦克林公司；dmso，购置sigma公司；激光共聚焦显微镜(lsm710)，购置德国蔡司光学仪器国际贸易有限公司；行为学分析系统danio vision购置noldus公司。实施例中，激光共聚焦分析操作步骤详见lsm710简要使用说明；行为学分析操作步骤详见noldus产品操作说明书。
17.实施例1
18.在mbp转基因斑马鱼中加入药物莨菪亭诱导斑马鱼产生髓鞘脱离。
19.(1)mbp转基因斑马鱼，购置于国家斑马鱼资源中心。
20.(2)利用激光共聚焦显微镜拍摄，发现在2dpf(days post fertilization，受精后天数)时期处理mbp转基因斑马鱼，在3dpf时期发现莨菪亭处理组相对于control组和溶剂对照组有明显的髓鞘发育损伤(图1)。
21.实施例2
22.在mbp转基因斑马鱼5dpf药物处理，发现在6dpf莨菪亭处理组相对于control组和溶剂对照组表现出明显的活跃性降低(图2)。


技术特征：
1.一种转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法，其特征在于，将mbp转基因斑马鱼置于莨菪亭溶液中，3～6天即可完成斑马鱼脱脊髓疾病模型的构建。2.根据权利要求1所述的转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法，其特征在于，所述的mbp转基因斑马鱼是一种在mbp启动子的控制下生成表达增强绿色荧光蛋白(egfp)的转基因斑马鱼。3.根据权利要求1所述的转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法，其特征在于，所述的莨菪亭溶液的浓度为15～20ug/ml。4.根据权利要求1所述的转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法，其特征在于，所述莨菪亭溶液浓度为18.5ug/ml，培养6天完成斑马鱼模型的构建。5.根据权利要求1所述的转基因斑马鱼(mbp:egfp)脱脊髓疾病模型的构建方法，其特征在于，所述莨菪亭溶液浓度为18.5ug/ml，培养3天完成斑马鱼模型的构建。

技术总结
本发明公开了一种用药物莨菪亭建立的转基因鱼(mbp:egfp)脱髓鞘疾病模型的构建方法，所述方法是将转基因鱼(mbp:egfp)置于18.5ug/ml莨菪亭溶液中，3


技术研发人员：王斌杰 陈天逸 付立斌 叶昕宇 徐帆 吴元钊 许中石 姚伟宣 王继业
受保护的技术使用者：浙江警察学院
技术研发日：2021.04.15
技术公布日：2021/11/2