(一)
技术领域：
本发明涉及一种4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物的制备方法。(二)
背景技术：
：三嗪类化合物因其良好的生物活性，被广泛应用在杀虫，除草，杀菌，抗病毒等方面，其中巯基均三嗪类化合物也被广泛应用于材料、医药等领域，但有关该类化合物的合成方法报道较少。其中有关4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物的制备方法主要采用苯基氰基胍与苯甲硫代酰胺反应制得，但收率较低，只有18％，限制了应用(joshuacp,rajanvp,joshuacp,etal.interactionofdicyandiamideswiththioamides:formationof6-alkyl(oraryl)-4-amino(orarylamino)-1,3,5-triazine-2-thiolsandamidino(oraryamidino)thioureas[j].australianjournalofchemistry,1974,27(12):2627-2634.)。因此，开发新的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物的制备方法具有重要的实际应用价值。(三)技术实现要素：本发明的目的是开发一种反应条件温和，原料易得，操作方便，新的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物的制备方法。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明提供一种式(i)所示的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物的制备方法，技术路线如下：所述技术路线如下：将二氰胺钠和苯胺反应，得到式(ii)所示的苯基氰基胍；然后与硫代硫酸钠反应，得到式(iii)所示的苯基脒基硫脲；最后，在甲醇钠作用下与乙酸乙酯缩合制得式(i)所示的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪。所述方法为：将钠加入甲醇中，钠完全溶解后加入式(iii)所示的苯基脒基硫脲中间体，室温反应1h～5h(优选2～5h，特别优选2h)后加入乙酸乙酯，继续25℃-50℃反应22h～40h(优选25℃，30～40h，特别优选30h)，反应结束后，所得反应液c经后处理c得到式(i)所示的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物；所述式(iii)所示的苯基脒基硫脲中间体、钠与乙酸乙酯的物质的量比为1：1～3：2～4(优选1:3:4)；优选地，所述甲醇的体积以式(iii)所示的苯基脒基硫脲中间体的物质的量计为2～5ml/mmol(优选2ml/mmol)。进一步，所述后处理c为：将所得反应液c浓缩，加水，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液，以体积比为2:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶液为洗脱液进行柱层析分离，收集含目标化合物的洗脱液，浓缩干燥得到式(i)所示的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物。进一步，所述式(iii)所示的苯基脒基硫脲中间体按如下方法制备：(1)将苯胺加入水中，加入盐酸a和二氰胺钠，加热至70～100℃反应5～12h(优选90℃反应8h)，反应结束后，将所得反应液a冷却至室温，过滤，干燥得到式(ii)所示的苯基氰基胍中间体的粗品；苯胺与二氰胺钠和盐酸中所含hcl的物质的量比为1：1～2：0.5～2(优选1：1：1)；(2)将步骤(1)所得的式(ii)所示的苯基氰基胍中间体的粗品加入丙酮中，再加入盐酸b和硫代硫酸钠，15-35℃反应1-5h(优选25℃反应3h)，所得反应液b经后处理b得到式(iii)所示的苯基脒基硫脲中间体；所述苯胺、盐酸与硫代硫酸钠的物质的量比为1：1～3：0.5～1.5(优选1：1.8：0.9)；进一步，步骤(1)中所述水的体积以苯胺的物质的量计为0.5～2ml/mmol(优选1ml/mmol)。进一步，步骤(2)中所述丙酮的体积以步骤(1)中苯胺的物质的量计为1～3ml/mmol(优选1.3ml/mmol)；进一步，步骤(2)中所述后处理b为：将所得反应液b用氨水调节ph＝9，浓缩，以体积比为2:1的石油醚：乙酸乙酯混合溶液为洗脱液进行柱层析分离，收集含目标化合物的洗脱液，浓缩干燥得到式(iii)所示的苯基脒基硫脲中间体。与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：本发明开发了一种4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物的制备方法，该工艺反应条件温和，原料易得，操作方便，有着广泛的工业应用前景。本发明所提供的化合物显示一定的抗人乳腺癌细胞或人非小细胞肺癌细胞活性，为新药筛选及开发奠定了基础，具有较好的实用价值。(四)具体实施方式下面将通过实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围不限于此。实施例1：化合物(i)的制备(1)将苯胺(5.00g,53.65mmol)加入水(50ml)中，分别加入盐酸(1mol/l,54ml,54mmol)和双氰胺钠(4.8g,53.91mmol)，加热至90℃反应8h。反应液冷却至室温，过滤，滤饼使用水洗涤，干燥得化合物(ii)。(2)将上述化合物(ii)加入丙酮(70ml)中，分别加入浓盐酸(8ml，96mmol)和五水硫代硫酸钠(11.3g,45.53mmol)，室温反应3h，反应结束后加10％氨水调节ph＝9，浓缩，经柱层析(洗脱液为石油醚：乙酸乙酯＝2:1，体积比)分离，收集含目标化合物的洗脱液，浓缩干燥得化合物(iii)(5.00g)。(3)将钠(1.06g,46.09mmol)加入甲醇(30ml)中，钠完全溶解后加入上述化合物(iii)(3.00g,15.44mmol)，室温下反应2h后加入乙酸乙酯(6.0ml,61.77mmol)，室温下反应30h，反应结束后，浓缩反应溶液，加水，用二氯甲烷萃取3次，合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩滤液，经柱层析(洗脱液为石油醚：乙酸乙酯＝2:1，体积比)分离，收集含目标化合物的洗脱液，浓缩干燥得到式(i)所示的4-甲基-6-苯胺基2-巯基-1，3，5-三嗪化合物(2.80g,83％)。1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ13.17(s,1h),10.34(s,1h),7.82-7.60(m,2h),7.38-7.29(m,2h),7.15-7.06(m,1h),2.28(s,3h)。实施例2：操作同实施例1，只是将步骤(3)中钠(1.06g,46.09mmol)的量改为(0.36g,15.44mmol)，得到化合物(i)(0.74g,22％yield)实施例3：操作同实施例1，只是将步骤(3)中乙酸乙酯(6.0ml,61.77mmol)的量改为(3.0ml,30.88mmol)，得到化合物(i)(1.28g,38％yield)实施例4：操作同实施例1，只是将步骤(3)中，加入乙酸乙酯后反应温度由室温改为50℃，得到化合物(i)(2.7g,80％yield)实施例5：操作同实施例1，只是将步骤(3)中加入乙酸乙酯后反应时间由30小时改为22小时，得到化合物(i)(2.1g,61％yield)实施例6：操作同实施例1，只是将步骤(3)中，加入化合物(iii)后反应时间由2小时改为1小时，得到化合物(i)(1.01g,30％yield).实施例7：操作同实施例1，只是将步骤(3)中，加入化合物(iii)后反应时间由2小时改为5小时，得到化合物(i)(2.67g,79％yield).实施例8：操作同实施例1，只是将步骤(3)中，加入乙酸乙酯后反应时间由30小时改为40小时，得到化合物(i)(2.73g,81％yield).实施例9：人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)生物活性测试人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)活性测试方法：mtt法实验步骤：1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用20μldmso溶解，取2ul用1000μl培养液稀释，使浓度为100μg/ml，再用培养液连续稀释至使用浓度。2)细胞的培养2.1)培养基的配制:每1000ml培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。2.2)细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％co2培养箱中培养，3～5d传代。3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用将细胞用edta-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×105/ml，加到96孔细胞培养板中，每孔100ul，置37℃，5％co2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的样品，每孔100μl，每个浓度加3孔，置37℃，5％co2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/ml的mtt，每孔10μl，置37℃孵育4h，加入dmso，每孔150μl，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度dmso的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞抑制率，结果如表1所示。以人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)为模型，测定了化合物(i)样品体外对人乳腺癌细胞或非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用(结果详见表1)。表160μm化合物(i)对人乳腺癌细胞(t47d)或人非小细胞肺癌细胞(a549)的抑制率(％)化合物t47da549(i)59.7342.41当前第1页12