靶向于人肺癌耐药细胞的配合物及其制备方法

文档序号:28502488发布日期:2022-01-15 05:06来源:国知局
靶向于人肺癌耐药细胞的配合物及其制备方法

1.本发明属于医药技术领域,更具体地说,涉及靶向于人肺癌耐药细胞的配合物及其制备方法。


背景技术:

2.疾病负担是衡量疾病、伤害和早死对社会和国家造成的健康及经济影响的指标。目前,全球癌症的发病和死亡负担仍在增长,癌症在许多国家的死因顺位上已经超越心血管疾病(如脑卒中和冠心病)等高死亡率慢性疾病,这既反映了人口老龄化进程的加快,也反映了癌症相关危险因素暴露的增加。因而对于癌症治疗问题的研究是十分必要的。
3.目前,已经批准上市的铂类抗癌药物,包括顺铂、卡铂和奥沙利铂等铂类药物。这些铂类药物临床用于卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肺癌、鼻咽癌、食道癌、恶性淋巴瘤、头颈部癌、甲状腺癌及成骨肉瘤等多种实体肿瘤。虽然顺铂类作为化疗效果最好抗癌药物之一,并得到广泛应用,但是其肾毒性、胃肠毒性、神经毒性、骨髓毒性和耳毒性等毒副作用以及肿瘤细胞的耐药性限制了其进一步的应用。因此,研发新型高效、低毒、靶向性的非铂金属抗肿瘤化疗药物具有重大的现实意义和理论价值。
4.过渡金属配合物,如铑(iii)配合物,因其独特的化学和生物性质而引起了研究人员的注意。铑(iii)配合物与传统的非铂金属抗癌药物相比,其对癌细胞具有不同的作用模式和细胞靶点。铑(iii)配合物具有极高的催化活性,能与生物分子结合,还可用作细胞成像和小分子传感器。此外,铑(iii)配合物还具有较高的细胞毒性,然而对铑(iii)配合物的研究仍处于起步阶段,目前其对于人肺癌耐药细胞的靶向治疗还存在一定局限性。喹啉之所以被越来越多的研究者所青睐,主要因为它是一类具有多重优良生物活性的药物中间体,然而目前尚未见以喹啉基或苯并吡喃为配体的铑(iii)配合物的相关报道。
5.因此,目前亟需设计一种能够对人肺癌耐药细胞具有选择性且有效治疗的铑(iii)配合物。


技术实现要素:

6.1.要解决的问题
7.针对现有技术中的铂类药物对人体具有强烈的毒副作用、肿瘤细胞对该类药物有耐药性而无法合理应用的问题,本发明提供靶向于人肺癌耐药细胞的配合物及其制备方法;通过合理设计铑(iii)配合物的结构和配位方式,从而有效解决现有技术中的铂类药物无法在靶向治疗肺癌方面合理应用的问题。
8.2.技术方案
9.为了解决上述问题,本发明所采用的技术方案如下:
10.本发明的靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,其结构式如下:
11.在上述结构式中,所述r1~r7相同或不同且各自独立地为h或c
1~6
烷基或烷氧基或羧基或氨基或羟基或卤素;对于r8和r9:所述r8~r9相同或不同且各自独立地为h或c
1~6
烷基或烷氧基或羧基或氨基或羟基或卤素;或r8与r9一起表示为-ch=ch-ch=ch-基团或者任选地由c
1~6
烷基、烷氧基、羧基、氨基、羟基或卤素取代的-ch=ch-ch=ch-基团;所述r
10
包括nh或o或s;所述x1~x3相同或不同且各自独立地为卤素元素;所述m中至少包括一个带有孤对电子的元素,m通过该元素的孤对电子与rh(iii)形成配位键。
12.优选地,其结构式为:
[0013][0014]
优选地,所述m包括ch3(ch2)noh或(ch3)2so,所述n=0~7。
[0015]
优选地,其包括rhn1或rhq;所述rhn1为
[0016]
所述rhq为
[0017]
本发明的配合物的制备方法,所述配合物为本发明中所述的靶向于人肺癌耐药细胞的配合物;将配体qb和rhy3混合并溶于包括配体m的极性溶剂中进行反应,反应得到的固
体为所述配合物;所述y为卤素;所述配体qb的结构式为:
[0018]
其中r1~r
10
的定义如配合物中所述。
[0019]
优选地,其具体操作步骤为:
[0020]
(1)将qb与rhcl3·
3h2o混合并溶于包括配体m的极性溶剂中,得到混合溶液;所述qb包括qb1或qb4,qb1为3-(2
ˊ-吡啶基)-6-氯-2-亚胺苯并吡喃,其结构式为qb4为3-(2
ˊ-喹啉基)-8-叔丁基-2-亚胺苯并吡喃,其结构式为m为(ch3)2so;
[0021]
(2)将所得混合溶液在80℃~100℃条件下进行反应,反应完成得到反应产物;
[0022]
(3)将反应产物经过滤、重结晶和干燥,得到所述配合物。
[0023]
优选地,在所述(1)步骤中,qb1或qb4与rhcl3·
3h2o的摩尔比为(0.8~1.2):1;所述极性溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、二甲基亚砜、丙酮和水中的一种或几种组合,其体积为2ml~20ml。
[0024]
优选地,在所述(2)步骤中,所述反应的时间为12h~72h。
[0025]
优选地,在所述(3)步骤中,所述重结晶采用正己烷和ch2cl2混合溶液进行重结晶,正己烷和ch2cl2的体积比为(20ml~40ml):(5ml~10ml);所述干燥的温度为50℃~75℃。
[0026]
本发明的另一种靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,其结构式如下:
[0027]
在上述结构式中,所述r1~r5、r7~r
10
相同或不同且各自独立地为h或c
1~6
烷基或烷氧基或羧基或氨基或羟基或卤素;所述r6和r
11
相同或不同且各自独立地为nh或o或s;所述x1~x3相同或不同且各自独立地为卤素元素;所述m中至少包括一个带有孤对电子的元素,m通过该元素的孤对电子与rh(iii)形成配位键。
[0028]
优选地,其结构式为:
[0029][0030]
优选地,所述m包括ch3(ch2)noh或(ch3)2so,所述n=0~7。
[0031]
优选地,其包括rhn2或rhs;所述rhn2为
[0032]
所述rhs为
[0033]
本发明的配合物的制备方法,所述配合物为本发明中所述的另一种靶向于人肺癌耐药细胞的配合物;将配体qb和rhy3混合并溶于包括配体m的极性溶剂中进行反应,反应得到的固体为所述配合物;所述y为卤素;所述配体qb的结构式为:
[0034]
其中r1~r
11
的定义如配合物中所述。
[0035]
优选地,其具体操作步骤为:
[0036]
(1)将qb与rhcl3·
3h2o混合并溶于包括配体m的极性溶剂中,得到混合溶液;所述qb包括qb2或qb3,qb2为3-(2
ˊ-苯并咪唑基)-6-溴-2-亚胺苯并吡喃,其结构式为qb3为3-(2
ˊ-苯并噻唑基)-8-叔丁基-2-亚胺苯并吡喃,其结构
式为m为ch3oh;
[0037]
(2)将所得混合溶液在80℃~100℃条件下进行反应,反应完成得到反应产物;
[0038]
(3)将反应产物经过滤、重结晶和干燥,得到所述配合物。
[0039]
优选地,在所述(1)步骤中,qb2或qb3与rhcl3·
3h2o的摩尔比为(0.8~1.2):1;所述极性溶剂为甲醇、乙腈、乙醇、二甲基亚砜、丙酮和水中的一种或几种组合,其体积为2ml~20ml。
[0040]
优选地,在所述(2)步骤中,所述反应的时间为12h~72h。
[0041]
优选地,在所述(3)步骤中,所述重结晶采用正己烷和ch2cl2混合溶液进行重结晶,正己烷和ch2cl2的体积比为(20ml~40ml):(5ml~10ml);所述干燥的温度为50℃~75℃。
[0042]
本发明中如上所述优选的靶向于人肺癌耐药细胞的配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq可应用为有效成份制备的体内外抗肿瘤药物,也可应用为制备靶向治疗人肺癌耐药细胞的抗肿瘤药物。
[0043]
3.有益效果
[0044]
相比于现有技术,本发明的有益效果为:
[0045]
(1)本发明的靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,对于癌细胞具有优异的抑制性,尤其是人肺腺癌a549细胞和人肺腺癌顺铂耐药性细胞a549/ddp,其中对于人肺腺癌顺铂耐药性细胞a549/ddp具有靶向抑制性,其ic
50
值范围为0.08μm~2.74μm,而对于人正常肝细胞hl-7702的毒性较低,其ic
50
值基本维持在80μm以上;此外,本发明中优选地配合物rhq的体内抗肿瘤效果为55.3%,明显高于临床药物顺铂(33.1%),有望用于抗肿瘤药物的制备。因此本发明的配合物能够对a549/ddp等癌细胞进行选择性地治疗,既解决了现有的顺铂耐药性癌细胞难以被顺铂类药物治疗的问题,同时也几乎不会对人体造成伤害,具有极大的医疗应用前景。
[0046]
(2)本发明的配合物的制备方法,所述配合物为本发明中所述的另一种靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,将配体qb和rhy3混合并溶于包括配体m的极性溶剂中进行反应,反应得到的固体为所述配合物,所述y为卤素;通过上述方法,本发明能够制备出靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,尤其是配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq表现出靶向抑制人肺腺癌顺铂耐药性细胞a549/ddp生长的优异性能。
附图说明
[0047]
图1是本发明的配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq的结构式示意图;
[0048]
图2是本发明的配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq的合成反应方程式;
[0049]
图3是本发明的配合物rhn1的电喷雾质谱;
[0050]
图4是本发明的配合物rhn1的1h nmr谱图;
[0051]
图5是本发明的配合物rhn1的分子结构示意图;
[0052]
图6是本发明的配合物rhn2的电喷雾质谱;
[0053]
图7是本发明的配合物rhn2的分子结构示意图;
[0054]
图8是本发明的配合物rhs的电喷雾质谱;
[0055]
图9是本发明的配合物rhs的1h nmr谱图;
[0056]
图10是本发明的配合物rhs的分子结构示意图;
[0057]
图11是本发明的配合物rhq的电喷雾质谱;
[0058]
图12是本发明的配合物rhq的1h nmr谱图;
[0059]
图13是本发明的配合物rhq的分子结构示意图。
具体实施方式
[0060]
下文对本发明的示例性实施例的详细描述参考了附图,该附图形成描述的一部分,在该附图中作为示例示出了本发明可实施的示例性实施例,其中本发明的特征由附图标记标识。下文对本发明的实施例的更详细的描述并不用于限制所要求的本发明的范围,而仅仅为了进行举例说明且不限制对本发明的特点和特征的描述,以提出执行本发明的最佳方式,并足以使得本领域技术人员能够实施本发明。但是,应当理解,可在不脱离由所附权利要求限定的本发明的范围的情况下进行各种修改和变型。详细的描述和附图应仅被认为是说明性的,而不是限制性的,如果存在任何这样的修改和变型,那么它们都将落入在此描述的本发明的范围内。此外,背景技术旨在为了说明本技术的研发现状和意义,并不旨在限制本发明或本技术和本发明的应用领域。
[0061]
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同;本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明;本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0062]
实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0063]
本发明所述合成方法中涉及的配体qb1、qb2、qb3和qb4可参考现有文献(christie,r.m.;et al.dyes and pigments,2000,47:79-89.和qin,q.p.;et al.european journal of medicinal chemistry,2019,184:111751.)进行制备。
[0064]
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
[0065]
实施例1
[0066]
本实施例提供一种靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,在本实施例中命名为rhn1,参照图2,其制备方法如下:
[0067]
(1)制备配体3-(2
ˊ-吡啶基)-6-氯-2-亚胺苯并吡喃(qb1):将5-氯-2-羟基苯甲醛(0.01mol,1.5657g)和2-吡啶乙腈(0.01mol,1.1814g)加入到含有乙醇-哌啶混合溶液(v:v=100ml:1ml)的250.0ml烧瓶中,并在65℃下搅拌反应24.0h,分别用50.0ml甲醇、ch2cl2和乙醚进行分离和洗涤,得到黄色固体产物即为qb1。
[0068]
(2)制备配合物rhn1:将1.0mmol的配体qb1、1.0mmol的rhcl3·
3h2o、0.5ml的dmso和3.5ml的ch3oh添加到干燥的15.0ml的高温压力管中,将混合物搅拌三次,然后将高温压力管的盖子扭紧。将混合物放在90.0℃及黑暗的条件下回流72.0h,然后在滤纸上过滤,得到红棕色块状晶体的rhn1,并在37.0℃下从正己烷和ch2cl2混合溶液(v:v=35ml/5ml)中重
2-羟基苯甲醛(0.01mol,1.7823g)和苯并噻唑-2-乙腈(0.01mol,1.7422g)加入到含有乙醇-哌啶混合溶液(v:v=100ml:1ml)的250.0ml烧瓶中,并在37℃下搅拌反应24.0h,分别用50.0ml甲醇、ch2cl2和乙醚进行分离和洗涤,得到黄色固体产物(qb3)。
[0092]
(2)制备配合物rhs:将1.0mmol的qb3配体、1.0mmol的rhcl3·
3h2o、0.5ml的dmso和3.5ml的ch3oh添加到干燥的15.0ml的高温压力管中,将混合物搅拌三次,然后将高温压力管的盖子扭紧。将混合物放在90.0℃及黑暗的条件下回流72.0h,然后在滤纸上过滤,得到红棕色块状晶体的rhs,并在37.0℃下从正己烷和ch2cl2混合溶液(v:v=35ml/5ml)中重结晶,产率为76.3%。
[0093]
对所得红棕色产物进行如下鉴定:
[0094]
(1)rhs的电喷雾质谱,其谱图如图8所示。
[0095]
esi-ms:m/z=693.25[m+(dmso)+(ch3cn)+h]
+
,该式中的m为配合物rhs的分子量。
[0096]
(2)rhs的1h nmr谱图如图9所示。
[0097]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ9.36(s,1h),8.28(d,j=7.8hz,1h),8.14

8.05(m,1h),7.94

7.86(m,1h),7.69

7.54(m,3h),6.87(s,1h),1.52(d,j=7.2hz,9h).
[0098]
(3)rhs的元素分析结果,如下所示:
[0099]c21h22
cl3n2o2rhs:理论值:c 43.81,h 3.85,n 4.87;实验值:c 43.80,h 3.88,n 4.85.
[0100]
(4)rhs的分子结构示意图,如图10所示。
[0101]
因此,综合以上鉴定结果,可以确定所得红棕色目标产物为铑(iii)配合物rhs,其结构式如图1所示。
[0102]
实施例4
[0103]
本实施例提供一种靶向于人肺癌耐药细胞的配合物,在本实施例中命名为rhq,参照图2,其制备方法如下:
[0104]
(1)制备配体3-(2
ˊ-喹啉基)-8-叔丁基-2-亚胺苯并吡喃(qb4):将3-叔丁基-2-羟基苯甲醛(0.01mol,1.7823g)和2-(喹啉-2-基)乙腈(0.01mol,1.6819g)加入到含有乙醇-哌啶混合溶液(v:v=100ml:1ml)的250.0ml烧瓶中,并在37℃下搅拌反应24.0h,分别用50.0ml甲醇、ch2cl2和乙醚进行分离和洗涤,得到黄色固体产物(qb4)。
[0105]
(2)制备配合物rhq:将1.0mmol的qb4配体、1.0mmol的rhcl3·
3h2o、0.5ml的dmso和3.5ml的ch3oh添加到干燥的15.0ml的高温压力管中,将混合物搅拌三次,然后将高温压力管的盖子扭紧。将混合物放在90.0℃及黑暗的条件下回流72.0h,然后在滤纸上过滤,得到红棕色块状晶体的rhq,并在37.0℃下从正己烷和ch2cl2混合溶液(v:v=35ml/5ml)中重结晶,产率为80.7%。
[0106]
对所得红棕色产物进行如下鉴定:
[0107]
(1)rhq的电喷雾质谱,其谱图如图11所示。
[0108]
esi-ms:m/z=681.35[m+2(ch3oh)+h]
+
;m/z=506.25[m-(dmso)-cl]
+
,其中m为配合物rhq的分子量。
[0109]
(2)rhq的1h nmr谱图如图12所示。
[0110]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.94(s,1h),8.49(d,j=8.7hz,1h),8.34(d,j=8.7hz,1h),8.12(d,j=8.7hz,1h),8.04(d,j=8.1hz,1h),7.88(d,j=7.6hz,1h),7.85

7.81(m,1h),7.66(t,j=7.4hz,2h),7.38(t,j=7.7hz,1h),1.52(s,9h).
[0111]
(3)rhq的元素分析结果,如下所示:
[0112]c24h26
cl3n2o2rhs:理论值:c 46.81,h 4.26,n 4.55;实验值:c 46.78,h 4.30,n 4.56.
[0113]
(4)rhq的分子结构示意图,如图13所示。
[0114]
因此,综合以上鉴定结果,可以确定所得红棕色目标产物为铑(iii)配合物rhs,其结构式如图1所示。
[0115]
对比例1
[0116]
本对比例提供一种配体3-(2
ˊ-吡啶基)-6-氯-2-亚胺苯并吡喃(qb1)及其制备方法,其制备步骤与实施例1基本相同,制备完成后直接对其进行后续癌细胞抑制实验,作为参照组与实施例进行对比。
[0117]
对比例2
[0118]
本对比例提供一种配体3-(2
ˊ-苯并咪唑基)-6-溴-2-亚胺苯并吡喃(qb2)及其制备方法,其制备步骤与实施例2基本相同,制备完成后直接对其进行后续癌细胞抑制实验,作为参照组与实施例进行对比。
[0119]
对比例3
[0120]
本对比例提供一种配体3-(2
ˊ-苯并噻唑基)-8-叔丁基-2-亚胺苯并吡喃(qb3)及其制备方法,其制备步骤与实施例3基本相同,制备完成后直接对其进行后续癌细胞抑制实验,作为参照组与实施例进行对比。
[0121]
对比例4
[0122]
本对比例提供一种配体3-(2
ˊ-喹啉基)-8-叔丁基-2-亚胺苯并吡喃(qb4)及其制备方法,其制备步骤与实施例3基本相同,制备完成后直接对其进行后续癌细胞抑制实验,作为参照组与实施例进行对比。
[0123]
对比例5
[0124]
本对比例提供rhcl3·
3h2o,直接对其进行后续癌细胞抑制实验,作为参照组与实施例进行对比。
[0125]
对比例6
[0126]
本对比例提供顺铂(cisplatin),直接对其进行后续癌细胞抑制实验,作为参照组与实施例进行对比。
[0127]
为了充分说明本发明所述的靶向于人肺癌耐药细胞的配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq在制药中的用途,申请人对其进行了体内外抗肿瘤活性实验。
[0128]
一、靶向于人肺癌耐药细胞的配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性实验
[0129]
1、细胞株与细胞培养
[0130]
本实验选用人肺腺癌顺铂耐药性细胞a549/ddp、人肺腺癌a549细胞以及人正常肝细胞hl-7702这3种人类细胞株。
[0131]
所有人源细胞株均培养在含100u/ml青霉素、10wt%小牛血、100u/ml链霉素的rpmi-1640培养液内,置37℃含体积浓度5%co2的培养箱中培养。
[0132]
2、待测化合物的配制
[0133]
所用的配体qb1、qb2、qb3、qb4和配合物rhn1、rhn2、rhs、rhq的纯度均需≥95%,将它们的dmso储液用生理缓冲液稀释成20μmol/l的终溶液(dmso的终浓度≤1%),测试该浓度下各个化合物对正常细胞或所选的肿瘤细胞生长的抑制程度。
[0134]
3、细胞生长抑制实验(mtt法)
[0135]
(1)取对数生长期的正常细胞或肿瘤细胞,经胰蛋白酶消化后,用含10%小牛血清的培养液配制成浓度为5000个/ml的细胞悬液,以每孔190μl接种于96孔培养板中,使待测细胞密度至1000~10000个/孔,边缘孔用无菌pbs填充。
[0136]
(2)5%co2,37℃孵育24h,至细胞单层铺满孔底,每孔加入一定浓度梯度的药物10μl,每个浓度梯度设4个复孔。
[0137]
(3)5%co2,37℃孵育24小时,倒置显微镜下观察。
[0138]
(4)每孔加入10μl 5mg/ml的mtt溶液,继续培养4h。
[0139]
(5)终止培养,小心吸去孔内培养液,每孔加入150μl的dmso充分溶解甲瓒沉淀,振荡器混匀后,在酶标仪用波长为570nm,参比波长为450nm测定各孔的光密度值。
[0140]
(6)同时设置调零孔(培养基、mtt、dmso)、对照孔(细胞、培养液、mtt、相同浓度的药物溶解介质、dmso)。
[0141]
(7)根据测得的光密度值,即od值,来判断活细胞数量,od值越大,细胞活性越强。利用公式:
[0142][0143]
计算各个化合物对所选细胞生长的抑制率,再以bliss法分别计算各受试化合物对所选的各个细胞株的ic
50
值。其结果如以下表1所示。
[0144]
表1.配合物对各种细胞株的ic
50
值(μm)
[0145][0146]
从表1的ic
50
活性筛选结果来看,将实施例1~4和对比例1~6进行对比:配合物rhn1、rhn2、rhs和rhq对所选的癌细胞均表现出一定的增殖抑制活性,均高于相应的配体qb1、qb2、qb3、qb4以及rhcl3·
3h2o的活性,说明本发明将配体qb和铑(iii)制成配合物后能有效提升两者在癌细胞抑制方面的协同性能。其中实施例4制得的配合物rhq能够强有效地靶向性抑制人肺腺癌顺铂耐药性细胞a549/ddp的增殖,其ic
50
值为0.08
±
0.02μm,其活性比顺铂药物的活性提高了812.75倍。
[0147]
此外,实施例4制得的配合物rhq对人正常肝细胞hl-7702细胞毒性很小,ic
50
值大于80μm,这是一个有积极意义的结果,表明实施例4制得的配合物rhq既能够靶向性抑制人
肺腺癌顺铂耐药性细胞a549/ddp的生长,同时还具有较低的肝脏毒性,即配合物rhq具有一定的细胞毒性选择性。
[0148]
其中实施例4制得的配合物rhq活性要强于实施例1制得的rhn1,通过对比推测可能是带有8位的叔丁基和/或3位的喹啉基的苯并吡喃与铑(iii)在癌细胞抑制方面有更有利的协同作用;而实施例3制得的配合物rhs活性要强于实施例2制得的rhn2,通过对比推测可能是带有8位的叔丁基和/或3位的苯并噻唑基的苯并吡喃与铑(iii)在癌细胞抑制方面有更有利的协同作用;后续针对这两种活性较强的rhq和rhs继续进行体内抑瘤实验。
[0149]
二、体内抑瘤实验
[0150]
(1)动物要求:
[0151]
品系:balb/c裸小鼠;等级:spf级;周龄:6-8w;体重:18-22g;性别:雄性
[0152]
(2)动物来源:
[0153]
由常州卡文斯实验动物有限公司提供,实验动物生产许可证:scxk(苏)2016-0010。
[0154]
(3)动物实验的场所:
[0155]
常州卡文斯实验动物有限公司,实验动物使用许可证:syxk(苏)2017-0007
[0156]
(4)饲养环境的要求:
[0157]
spf级,ivc独立通风系统;保持恒定温度(26
±
2℃)和湿度(40-70%),开灯、熄灯各12h。
[0158]
(5)饲料:
[0159]
选用spf小鼠繁殖饲料,购自北京科澳协力饲料有限公司。
[0160]
(6)实验用到的主要试剂和器械:
[0161]
试剂:dmso、0.9%生理盐水、75%医用酒精、4%多聚甲醛;器械:手术剪刀、镊子、套管针、电子游标卡尺。
[0162]
(7)实验的基本过程与操作
[0163]

细胞培养
[0164]
实验用细胞株及细胞培养,请参照上述部分进行。
[0165]

a549/ddp裸鼠皮下移植瘤模型的制备及药效实验
[0166]
收集处于对数生长期的a549/ddp细胞,用200μl无血清培养基调制成5
×
106个/ml活细胞浓度悬液,用1.0ml注射器抽取0.2ml悬液,然后接种于裸小鼠右腋窝皮下。当异种移植瘤生长到约1000mm3体积时,作为皮下移植瘤模型制作的瘤源,在裸小鼠身上传代。a549/ddp在裸鼠身上传4代待其生长稳定后,选取肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤鼠,颈椎脱位处死,用75%医用酒精消毒动物皮肤,剖离组织块,除去坏死部分,将瘤组织剪成1.5mm3左右小块,用套管针接种于裸鼠右腋窝皮下。用电子游标卡尺测量移植瘤瘤径,待肿瘤体积生长至90-100mm3时,将动物随机分组。将小鼠随机分为溶媒对照组和治疗组(n=6/组),接受以下治疗:(a)溶媒对照,5.0%v/v二甲基亚砜/生理盐水溶媒,(b)rhs,剂量为5.0mg/kg,每两天一次(10%v/v二甲基亚砜/生理盐水),(c)rhq(5.0mg/kg),每两天一次经皮注射(q2d)。每三天用电子游标卡尺测瘤径,量体重,通过长度(l)和宽度(w)确定肿瘤体积,并使用公式计算体积、肿瘤体积和肿瘤生长抑制率(1)-(3):
[0167]
肿瘤体积:v=(w2×
l)/2
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(1)
[0168]
相对肿瘤增值率:t/c(%)=t
rtv
/c
rtv
×
100%
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(2)
[0169]
肿瘤生长抑制率:ir(%)=(w
c-w
t
)/wc×
100%
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(3)
[0170]
式中,w和l分别表示肿瘤的较短直径和较长直径;t
rtv
和c
rtv
分别为治疗组和对照组的rtv。(rtv:相对肿瘤体积,rtv=v
t
/v0,v
t
为每次测量时的体积,v0为分组时的体积);w
t
和wc分别是配合物治疗组和溶媒对照组的平均肿瘤重量。此外,所有实验程序均按照nih实验动物护理和使用指南进行。
[0171]
表2、配合物对a549/ddp的体内抑瘤作用(%)
[0172][0173]
如表2所示,在a549/ddp模型中,研究了配合物rhs和rhq对体内肿瘤生长的影响。当每两天腹腔注射rhs(5.0mg/kg)和rhq(5.0mg/kg)时,产生明显的抑瘤效果,肿瘤生长抑制率分别高达46.4%和55.3%。值得注意的是,rhq的药效显著高于临床药物顺铂的肿瘤生长抑制率(33.1%)。
[0174]
综上所述,本发明所述的靶向于人肺癌耐药细胞的配合物表现出优异的体外和体内抗肿瘤活性,以及良好的癌细胞选择性,表明本发明所合成靶向于人肺癌耐药细胞的配合物的设计思路和合成方法是切实可行的。其中实施例4制得的配合物rhq所表现出的抗肿瘤活性和低毒性使其具有了良好的潜在药用价值,有望用于抗肿瘤药物的制备。
[0175]
在上文中结合具体的示例性实施例详细描述了本发明。但是,应当理解,可在不脱离由所附权利要求限定的本发明的范围的情况下进行各种修改和变型。详细的描述和附图应仅被认为是说明性的,而不是限制性的,如果存在任何这样的修改和变型,那么它们都将落入在此描述的本发明的范围内。此外,背景技术旨在为了说明本技术的研发现状和意义,并不旨在限制本发明或本技术和本发明的应用领域。
[0176]
更具体地,尽管在此已经描述了本发明的示例性实施例,但是本发明并不局限于这些实施例,而是包括本领域技术人员根据前面的详细描述可认识到的经过修改、省略、例如各个实施例之间的组合、适应性改变和/或替换的任何和全部实施例。权利要求中的限定可根据权利要求中使用的语言而进行广泛的解释,且不限于在前述详细描述中或在实施该申请期间描述的示例,这些示例应被认为是非排他性的。在任何方法或过程权利要求中列举的任何步骤可以以任何顺序执行并且不限于权利要求中提出的顺序。因此,本发明的范围应当仅由所附权利要求及其合法等同物来确定,而不是由上文给出的说明和示例来确定。
[0177]
除非另有限定,本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时,以本说明书中的定义为准。摩尔量、质量、浓度、温度、时间、体积或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时,这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围,而不论该范围是否单独公开了。例如,1-50的范
围应理解为包括选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50的任何数字、数字的组合、或子范围、以及所有介于上述整数之间的小数值,例如,1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8和1.9。关于子范围,具体考虑从范围内的任意端点开始延伸的“嵌套的子范围”。例如,示例性范围1-50的嵌套子范围可以包括一个方向上的1-10、1-20、1-30和1-40,或在另一方向上的50-40、50-30、50-20和50-10。
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