细胞聚集3D培养凝胶孔板的制作方法

细胞聚集3d培养凝胶孔板
技术领域
1.本专利涉及一种细胞培养装置，尤其涉及一种细胞聚集3d培养凝胶孔板。


背景技术：

2.在最新的生物医学研究中，尤其肿瘤体外研究研究领域，3d立体细胞培养技术相比2d培养具有独特的优势，这种培养条件可以模拟天然组织环境，让细胞在 更接近于自然的状态下生长。随着技术和培养需求的进步，3d细胞培养逐渐取代传统2d细胞培养和动物模型试验是一个大概率的趋势。尤其，对于恶性肿瘤这种生长速率快、易于形成克隆、且具有独特的异质性和微环境的这类细胞，采用无支架的细胞聚集式培养，是最可行的方案之一，亟需优质、易用、廉价的3d培养耗材来辅助实现。用无支架的细胞聚集3d培养方式获得的肿瘤体外培养组织，不但在模拟肿瘤自然生长中具有优势，同时不牺牲进行组间比较生长速率、血管生成能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力的功能，还可后期直接取出固定进行免疫组化染色，完成传统细胞培养无法进行的检测。本专利提供一种创新的细胞培养孔板，通过在常规2d细胞培养孔板中加入无菌水凝胶部件达到升级改良的目的。


技术实现要素：

3.本发明目的在于提供一种细胞聚集式无支架的3d培养凝胶孔板，是对传统常规细胞培养孔板的升级改良。
4.为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案。该孔板包括孔板身、孔板盖和无菌水凝胶3d聚集井三个核心组件。
5.其中，孔板身和孔板盖即为透明的常规通用2d细胞培养孔板的孔板身和孔板盖，在矩形孔板身上有多个凹陷孔，孔数有三种规格，为24孔（6乘4矩阵）、12孔（4乘3矩阵）或6孔（3乘2矩阵）；孔板盖正好扣合改在孔板身上，无菌水凝胶3d聚合井在每个孔中放置一个。
6.无菌水凝胶3d聚合井为水凝胶材质，优选软琼脂材质，形状为水井状，包括底部基座和圆桶状的井围；井围围成一个底部圆滑截面为u型的细胞聚集空间作为承接细胞并聚集成3d类组织用；底部基座构成的俯视截面为稍小于所在孔底面积的圆形，其直径小于孔径的差值不超过2.5毫米（优选差值为1毫米），当无菌水凝胶3d聚合井放入孔中时，由于水凝胶与底部的粘附作用以及无菌水凝胶3d聚合井底面与孔底面大小近似匹配，所以无菌水凝胶3d聚合井被正好固定不能移动，井围、底部基座和所在孔的底面构成近似同心圆。
7.在井围的隔离下，无菌水凝胶3d聚合井的底部基座以上外圈、所在孔的内壁以内的空间，形成一个圆环，用于添加培养基和更换培养基。
8.无菌水凝胶3d聚合井的井围内空间，容量范围为50微升至1毫升，可根据不同孔板，容量变化。优选地，24孔板的配套无菌水凝胶3d聚合井的井围内空间为200微升（实际加入细胞悬液不超过100微升），12孔板的配套无菌水凝胶3d聚合井的井围内空间为400微升（实际加入细胞悬液不超过200微升），6孔板的配套无菌水凝胶3d聚合井的井围内空间为800微升（实际加入细胞悬液不超过400微升）。
9.作为商用产品，以上产品采用无菌密封包装，三种板型每个孔中都已放置好了无菌水凝胶3d聚合井，直接拆开即可使用，在超净工作台打开孔板盖，逐个孔在无菌水凝胶3d聚合井的井围外围圆环空间添加培养基后，再在井围内空间接种细胞悬液即可。
附图说明
10.图1以12孔板侧视截面图为例，说明本实用新型的整体结构的3个核心组件：（1）孔板盖、（2）孔板身和（3）无菌水凝胶3d聚集井。
具体实施方式
11.以下将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利，并不用于限定本专利。
12.参照图1，在超净工作台中，拆开孔板包装，打开孔板盖，在此12孔孔板中先添加培养基，注意，用1 ml枪头在无菌水凝胶3d聚合井之外、孔内壁之内的环形区域添加共1.5 ml培养基，12孔加满后，在37
°
c二氧化碳培养箱静置20分钟，此后，按实验分组，在12孔的无菌水凝胶3d聚合井的井围之内接种细胞悬液，悬液体积100微升。此后，对于干祖态属性比较高的肿瘤细胞，大约经7天聚合成组织或类器官，14天后可发生血管生成效应。肿瘤体积的记录，可采用在聚集后，通过白光拍摄截面粗略估算，或通过转入荧光标记后，利用荧光显微镜逐层拍摄以重构3d体积。在培养结束后，直接可取出聚合类组织，通过多聚甲醛固定，石蜡包埋，利用免疫组化染色观察微环境结构的差异。


技术特征：
1.一种细胞聚集3d培养凝胶孔板，其特征在于：孔板包括孔板身、孔板盖和无菌水凝胶3d聚集井三个核心组件；孔板身和孔板盖为透明常规通用2d细胞培养孔板的孔板身和孔板盖，它们材料为有机高分子聚合塑料，孔板身在矩形孔板身上有多个凹陷孔，孔数有三种规格，为24孔、12孔或6孔；矩形孔板盖正好扣合改在孔板身上；无菌水凝胶3d聚合井在每个孔中放置一个，无菌水凝胶3d聚合井为水凝胶材质；无菌水凝胶3d聚合井形状为水井状，包括宽扁的圆形底部基座和圆桶状的井围，井围围成一个底部圆滑截面为u型的细胞聚集空间，底部基座构成一个底部圆盘，俯视截面为圆形，其直径小于孔径的差值不超过2.5毫米，无菌水凝胶3d聚合井放入孔后被正好固定，井围、底部基座和所在孔的底面构成类同心圆结构。2.根据权利要求1所述的细胞聚集3d培养凝胶孔板，其特征在于：无菌水凝胶3d聚合井的井围内空间，容量范围为50微升至1毫升，根据不同孔板，从24孔板、12孔板到6孔板容量相应变化。

技术总结
本实用新型提供一种细胞聚集3D培养凝胶孔板，该孔板包括孔板身、孔板盖和无菌水凝胶3D聚集井三个核心组件。孔板身和孔板盖为透明的常规通用2D细胞培养孔板的孔板身和孔板盖，无菌水凝胶3D聚合井在每个孔中放置一个，无菌水凝胶3D聚合井为水凝胶材质，优选软琼脂材质，形状为水井状，包括底部基座和圆桶状的井围；井围围成一个底部圆滑截面为U型的细胞聚集空间作为承接细胞并聚集成3D类组织用；底部基座构成的俯视截面为稍小于所在孔底面积的圆形。作为商用产品，以上产品采用无菌密封包装，三种板型每个孔中都已放置好了无菌水凝胶3D聚合井，直接拆开即可使用，在超净工作台打开孔板盖，逐个孔在无菌水凝胶3D聚合井的井围外围圆环空间添加培养基后，再在井围内空间接种细胞悬液即可。种细胞悬液即可。种细胞悬液即可。


技术研发人员：杨柳 唐蓓
受保护的技术使用者：上海墩庐生物医学科技有限公司
技术研发日：2021.03.07
技术公布日：2021/11/17