一种从金银花中提取绿原酸的方法与流程

1.本发明属于中草药功能性成分的提取技术领域，具体涉及一种从金银花中提取绿原酸的方法。


背景技术：

[0002]“金银花”一名始见于李时珍《本草纲目》，具有清热解毒、消炎退肿功效。金银花有效成分为绿原酸和异绿原酸。绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，具有抗菌、抗病毒清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。
[0003]
cn 1810763a公开了一种金银花绿原酸提取技术，其提取工艺采用为：（1）采收后保存时间不能超过12h的金银花鲜活材料(鲜花、鲜叶、鲜藤)，其中，鲜花采收期为二白期、大白期，藤叶采收期为越冬期，鲜花、鲜叶、鲜藤的比例为:1:2:3；（2）将金银花鲜活材料打浆，浆液贮藏时间不超过30min；（3）加进3-5倍含量为75-95%的乙醇，浸提5-7天；（4）将醇浸液采用膜分离工艺与超临界流体co2萃取联用的方法，进行4次过滤使得醇提液膜分离，提取出活性物质金银花绿原酸及附产物金银花总黄酮。其产品是符合压家新药标准，及日化产品、保健食品的添加剂。
[0004]
但上述文献还存在以下缺陷：（1）对金银花原料要求高，须采用金银花鲜活材料；（2）醇沉时间较长，增加时间成本；且采用高压设备进行超临界萃取，投资成本大。


技术实现要素：

[0005]
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种基于气爆处理，从金银花中提取绿原酸的方法，有利于保持绿原酸本身固有的理化性质，提高提取率。
[0006]
本发明所提供的一种从金银花中提取绿原酸的方法，具体包括以下的步骤：（1）气爆处理：将金银花进行气爆处理；（2）在气爆后的金银花中加入蒸馏水，再加入调节剂调节ph值，再加入复合酶，升温进行酶解，获得酶解液；或者是先加入复合酶，再加入调节剂调节ph值；（3）向酶解液中添加醇类溶剂，回流搅拌提取，获得醇提液，将醇提液进行离心，分别获得上清液和残渣沉淀；（4）将（3）中获得的上清液进行减压浓缩，获得醇类溶剂和浓缩液，回收醇类溶剂；（5）在（4）中获得的浓缩液中加入絮凝剂处理，经离心分别获得上清液和絮凝沉淀物；（6）将（5）中获得的上清液进行减压浓缩，获得浓缩液；（7）干燥（6）中获得的浓缩液，获得粉状的绿原酸。
[0007]
本发明所述及的金银花，可以是鲜金银花，或者是干金银花。
[0008]
优选的，（1）中，将金银花在0.5～1.0mpa的压力下快速气爆处理5～10min。
[0009]
优选的，（2）中的复合酶为酸性纤维素酶和酸性果胶酶，其中酸性纤维素的酶活为5000～100000u/g，酸性果胶酶的酶活为10000～100000u/g，以气爆后金银花的重量计，酸
性纤维素酶的加入量为0.1～2%；酸性果胶酶的加入量为0.1～1%。
[0010]
优选的，（2）中，蒸馏水的用量为气爆后的金银花重量的8～15倍，边搅拌边加入ph调节剂，调节ph至4.0～6.0，待温度达50～65℃时，开始酶解，并且酶解过程中不断搅拌，酶解2～5h后灭酶。
[0011]
优选的，（2）中，ph调节剂为柠檬酸、盐酸、苹果酸中的至少一种。
[0012]
优选的，（2）中，ph调节剂为：以气爆后的金银花重量计， 1～3%柠檬酸、0.05～2%盐酸、2～5%苹果酸中的任一种。
[0013]
（3）中，所述的醇类溶剂为无水乙醇，直至无水乙醇被稀释后的体积浓度达到50～90%，于70～90℃下回流搅拌提取1.5～4h，再将获得的醇提液在4000～6000r/min转速下离心8～12min。
[0014]
（5）中，絮凝剂的加入量占浓缩液体积的0.05%～1.5%，絮凝20～40min，在4000～6000r/min转速下离心10min。
[0015]
优选的，（5）中，絮凝剂为阳离子聚丙烯酰胺、阴离子聚丙烯酰胺、壳聚糖中的任意一种。
[0016]
优选的，上述的方法包括以下的步骤：（1）气爆处理：将金银花在0.5～1.0mpa的压力下快速气爆处理5～10min；（2）在气爆后的金银花中加入其重量8-15倍蒸馏水，再加入调节剂调节ph值至4.0～6.0，待温度达50～65℃时，开始酶解，并且酶解过程中不断搅拌，酶解2～5h后灭酶；（3）向酶解液中添加无水乙醇，直至无水乙醇被稀释后的体积浓度达到50～90%，于70～90℃下回流搅拌提取1.5～4h，再将获得的醇提液在4000～6000r/min转速下离心8～12min，分别获得上清液和残渣沉淀；（4）将（3）中获得的上清液进行减压浓缩，获得乙醇溶剂和浓缩液，回收乙醇溶剂；（5）在（4）中获得的浓缩液中加入絮凝剂处理，经离心分别获得上清液和絮凝沉淀物；絮凝剂的加入量占浓缩液体积的0.05%～1.5%，絮凝20～40min，在4000～6000r/min转速下离心10min；（6）将（5）中获得的上清液进行减压浓缩，获得浓缩液；（7）喷雾干燥（6）中获得的浓缩液，获得粉状的绿原酸。
[0017]
本发明的优点如下：1.本发明基于气爆处理，从金银花中提取绿原酸的方法，鲜金银花、干金银花均可处理，有利于保持绿原酸本身固有的理化性质，提高了提取率；2.采用本发明的方法所提取的绿原酸含量（基于原料）最高达到了3.26%，hplc分析原料绿原酸含量3.31%，收率达98%。
附图说明
[0018]
图1为绿原酸提取粉剂照片；图2为提取物中绿原酸含量的hplc分析谱图；图3为实施例1-4中各粉剂绿原酸含量。
具体实施方式
[0019]
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。但本发明并不局限于此，凡是与本技术相同或相近的技术方案均属于本发明的内容。
[0020]
实施例1本发明所提供的一种从金银花中提取绿原酸的方法，包括如下步骤：（1）取金银花100g，0.5mpa快速气爆处理10min；（2）气爆后的金银花添加重量比9倍的蒸馏水，边搅拌边加入2g酸性纤维素酶30000u/g、1g酸性果胶酶60000u/g，再加入2%柠檬酸调节ph值至5.5，当物料温度达50℃时，计时酶解搅拌4小时获得酶解液，酶解后灭酶处理，于95℃下灭酶5分钟（以下实施例中均按此条件进行灭酶处理，不再赘述）；上述的步骤中，也可以先调节ph至5.5，再加入复合酶（上述的顺序对最终的酶解效果不产生影响）；以下实施例同；（3）向酶解液中添加无水乙醇，直至无水乙醇被稀释后的体积浓度达到60%，于80℃下回流搅拌提取3h，获得的醇提液，在5000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和残渣沉淀；（4）将（3）中获得的上清液进行减压浓缩，获得乙醇溶剂和浓缩液，回收乙醇溶剂。
[0021]
（5）在（4）中获得的浓缩液中加入占浓缩液体积0.1%的壳聚糖，絮凝30min，在4000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和絮凝沉淀物；（6）将（5）中获得的上清液进行减压浓缩，获得浓缩液；（7）将（6）中获得的浓缩液进行喷雾干燥，得绿原酸粉剂。
[0022]
实施例2本发明所提供的一种从金银花中提取绿原酸的方法，包括如下步骤：（1）取金银花100g，1mpa快速气爆处理5min；（2）气爆后的金银花添加重量比10倍的蒸馏水，边搅拌边加入1g酸性纤维素酶30000u/g、1g酸性果胶酶60000u/g，再加入5%苹果酸调节ph值至6，当物料温度达55℃时，计时酶解搅拌3小时获得酶解液；（3）向酶解液中添加无水乙醇，直至无水乙醇被稀释后的体积浓度达到70%，于70℃下回流搅拌提取3h，获得的醇提液，在5000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和残渣沉淀；（4）将（3）中获得的上清液进行减压浓缩，获得乙醇溶剂和浓缩液，回收乙醇溶剂。
[0023]
（5）在（4）中获得的浓缩液中加入占浓缩液体积0.5%的壳聚糖，絮凝30min，在4000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和絮凝沉淀物；（6）将（5）中获得的上清液进行减压浓缩，获得浓缩液；（7）将（6）中获得的浓缩液进行喷雾干燥，得绿原酸粉剂。
[0024]
实施例3本发明所提供的一种从金银花中提取绿原酸的方法，包括如下步骤：（1）取金银花100g，0.5mpa快速气爆处理10min；（2）气爆后的金银花添加重量比9倍的蒸馏水，边搅拌边加入0.5g酸性纤维素酶
30000u/g、0.5g酸性果胶酶60000u/g，再加入0.1%盐酸调节ph值至5.5，当物料温度达60℃时，计时酶解搅拌2小时获得酶解液；（3）向酶解液中添加无水乙醇，直至无水乙醇被稀释后的体积浓度达到60%，于90℃下回流搅拌提取2h，获得的醇提液，在5000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和残渣沉淀；（4）将（3）中获得的上清液进行减压浓缩，获得乙醇溶剂和浓缩液，回收乙醇溶剂。
[0025]
（5）在（4）中获得的浓缩液中加入占浓缩液体积1.0%的阳离子聚丙烯酰胺，絮凝25min，在4000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和絮凝沉淀物；（6）将（5）中获得的上清液进行减压浓缩，获得浓缩液；（7）将（6）中获得的浓缩液进行喷雾干燥，得绿原酸粉剂。
[0026]
实施例4本发明所提供的一种从金银花中提取绿原酸的方法，包括如下步骤：（1）取金银花100g，0.5mpa快速气爆处理10min；（2）气爆后的金银花添加重量比9倍的蒸馏水，边搅拌边加入2g酸性纤维素酶30000u/g、2g酸性果胶酶60000u/g，再加入2%柠檬酸调节ph值至5.5，当物料温度达50℃时，计时酶解搅拌4小时获得酶解液；（3）向酶解液中添加无水乙醇，直至无水乙醇被稀释后的体积浓度达到55%，于80℃下回流搅拌提取3h，获得的醇提液，在5000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和残渣沉淀；（4）将（3）中获得的上清液进行减压浓缩，获得乙醇溶剂和浓缩液，回收乙醇溶剂。
[0027]
（5）在（4）中获得的浓缩液中加入占浓缩液体积0.1%的阴离子聚丙烯酰胺，絮凝40min，在4000r/min转速下离心10min，分别获得上清液和絮凝沉淀物；（6）将（5）中获得的上清液进行减压浓缩，获得浓缩液；（7）将（6）中获得的浓缩液进行喷雾干燥，得绿原酸粉剂。
[0028]
对比例1 cn1425643采用稀乙醇对金银花进行二次回流提取，提取物浓缩后再用絮凝法初步除杂纯化，最后采用大孔树脂法或酸性乙酸乙酯萃取法纯化精制，绿原酸的得率为22％，纯度为48％(分光光度法测定)。
[0029]
对比例2 cn104974041a 将经过粉碎后的金银花药材提取剂浸泡提取，过反相吸附树脂纯化，浓缩干燥，得到绿原酸粉末。最终绿原酸纯度超过98%，总收率超过80%。
[0030]
图2中，对本发明所获得的绿原酸进行了检测，结果表明，通过本发明的方法提取所获得的产品为绿原酸。
[0031]
从图3中可以看出，实施例1～4中，实例2粉剂中绿原酸的含量较高，达到了3.26%，原始金银花中绿原酸含量3.31%，提取收率达98%。