一种用于皮肤保湿的多肽化合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于生物肽技术领域，具体涉及一种用于皮肤保湿的多肽化合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.皮肤是保护身体的重要器官，阻止人体损失水分和电解质，并保护不受外部异物浸透。皮肤分为表皮层、真皮层和皮下脂肪层，其中表皮层由角质细胞构成，表皮层的最外侧的角质层对物质的透过发挥极其重要的作用。人体自身的天然保湿屏障角质层和真皮层对皮肤保湿和储水发挥了重要的作用。通过外源性保湿方法也可以达到皮肤保湿的效果。
3.目前，市场上保湿的药物层出不穷，提取物居多，但提取物有效成分结构不明确，稳定性可控性差，且难以实现批量生产的需求。公布号为wo/2012/115118的发明专利公开了一种多肽化合物，通过在邻羰基位置引入具有环取代基的苯甲酰基作为天然多肽化合物的部分结构，获得优异的抗真菌活性。公布号为cn 104327164 a的发明专利公开了一种合成多肽，用于抗菌和促进成骨细胞生长，该多肽的氨基酸序列为：gln-lys-lys-pro-val-pro-ile-ile-tyr-cvs-asn-gly-thr-cys-gin。公开号为cn 113402586 a的发明专利公开了一种多肽化合物，其氨基酸序列为glu-glu-met-gln-arg-arg-ala(ⅰ)。虽然现有技术中已有关于合成每一种新的多肽化合物，但是多数是用于作为抗菌剂。


技术实现要素：

4.针对上述现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于设计提供一种用于皮肤保湿的多肽化合物及其制备方法和应用，旨在解决现有的皮肤保湿的药物，结构不稳定性，且可控性差的问题。
5.为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
6.一种用于皮肤保湿的多肽化合物，其特征在于所述多肽化合物的分子结构如式ⅰ所示：
[0007][0008]
所述的一种用于皮肤保湿的多肽化合物，其特征在于所述多肽化合物的分子结构中x包括色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种。
[0009]
所述的一种用于皮肤保湿的多肽化合物，其特征在于所述多肽化合物的分子结构中y包括色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸中的一种。
[0010]
所述的一种用于皮肤保湿的多肽化合物，其特征在于所述多肽化合物的分子结构中n为2-20。
[0011]
任一所述的一种用于皮肤保湿的多肽化合物的制备方法，其特征在于包括采用常规固相偶合peg、和全保护氨基酸的方法获得。
[0012]
任一所述的一种用于皮肤保湿的多肽化合物在制备皮肤保湿药物中的应用。
[0013]
一种皮肤保湿药物，其特征在于所述皮肤保湿药物包含任一所述的多肽化合物。
[0014]
任一所述的一种用于皮肤保湿的多肽化合物在皮肤保湿中的应用。
[0015]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0016]
本发明多肽化合物在皮肤保湿方面具有显著效果，使用本发明多肽化合物制备的保湿产品半小时后与现有产品使用相同时间相比皮肤水分含量多了50％，并且随着时间的增加本发明多肽化合物制备的保湿产品仍然使皮肤具有较高的水分含量，其下降幅度明显低于现有产品。
附图说明
[0017]
图1为实施例1制备的多肽化合物-1的化学结构式；
[0018]
图2为实施例1制备的多肽化合物-1的质谱图；
[0019]
图3为实施例3制备的多肽化合物-2的化学结构式；
[0020]
图4为实施例3制备的多肽化合物-2的质谱图；
[0021]
图5为实施例5制备的多肽化合物-3的化学结构式；
[0022]
图6为实施例5制备的多肽化合物-3的质谱图。
具体实施方式
[0023]
以下将结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
[0024]
实施例1：
[0025]
一种用于皮肤保湿的多肽化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0026]
(1)合成wang resin树脂溶胀
[0027]
称取wang resin树脂5克(起始替代度sub0＝0.3-0.4mmol/g)；将树脂加入到反应器中，加入dmf洗涤3次，抽干。再加入dmf(用量5-7ml/g树脂)溶胀30min以上，抽干。其中，洗涤搅拌时间每次不少于2min，洗涤溶剂用量3-7ml/g树脂；所有操作均应保证树脂在溶剂中充分搅拌展开，不粘稠。下同。
[0028]
(2)fmoc-nh-peg4-ch2ch2cooh偶联
[0029]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0030]
fmoc-nh-peg4-ch2ch2cooh(4.9克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应进行至2小时后，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时后停止反应，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0031]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0032]
(3)fmoc-lys(boc)-oh偶联
[0033]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0034]
fmoc-lys(boc)-oh(4.7克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应进行至2小时后，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时后停止反应，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0035]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0036]
(4)fmoc-his(trt)偶联
[0037]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0038]
fmoc-his(trt)(6.2克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应2小时以上。反应2小时，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时。反应完全，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0039]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0040]
(5)fmoc-gly偶联
[0041]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0042]
fmoc-gly(3.0克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应2小时以上。反应2小时，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时。反应完全，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0043]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应7分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0044]
(6)裂解
[0045]
按10ml/g的比例，配制裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：1,2-乙二硫醇：三异丙基硅烷：水：苯酚＝81.5：5：5：5：2.5：1v/v)，混合均匀，冷冻2小时以上；根据100ml/g树脂的比例，准备好所需要的乙醚，冷冻2小时以上，备用。将已预冻的裂解液加入至装有肽树脂的反应釜中，裂解反应150～165分钟。反应完毕，将反应液减压过滤，收集滤液。滤饼用少量纯tfa洗涤三次(洗涤液总量不超过裂解液体积10％)，合并滤液。将合并后的滤液缓慢加入至预先冷冻好的乙醚中，同时剧烈搅动混合液，使裂解液充分分散至混合液中。-20
±
5℃静置陈化2h以上，观察固体沉淀情况。混合液分层后，将上清液倾倒出，下层准备离心。将下层包含沉淀的混合物离心，收集沉淀。离心机转速3000转/分，时间≥5min/次。加适量未预冻的乙醚(能使沉淀充分分散在乙醚液中)到离心管中，搅拌破碎成悬浮状，离心收集沉淀，3000
转/分，离心≥5min/次；共洗涤3次。将所得粗肽在真空下干燥12h以上，得到干燥的产品，即多肽化合物-1，其化学结构式如图1所示。
[0046]
(7)将化合物进行质谱检测，得到的质谱图如图2所示。
[0047]
实施例2：
[0048]
一种含有实施例1制备的多肽化合物-1的保湿化合物1，包括质量为1:3的冻干粉和溶媒液，所述冻干粉由以下质量百分比的原料组成：0.1％多肽化合物-1、1.5％甘露糖醇、0.1％磷酸氢二钠、1％磷酸二氢钠、1％透明质酸钠、5％丁二醇、水余量。
[0049]
实施例3：
[0050]
一种用于皮肤保湿的多肽化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0051]
(1)合成wang resin树脂溶胀
[0052]
称取wang resin树脂5克(起始替代度sub0＝0.3-0.4mmol/g)；将树脂加入到反应器中，加入dmf洗涤3次，抽干。再加入dmf(用量5-7ml/g树脂)溶胀30min以上，抽干。其中，洗涤搅拌时间每次不少于2min，洗涤溶剂用量3-7ml/g树脂；所有操作均应保证树脂在溶剂中充分搅拌展开，不粘稠。下同。
[0053]
(2)fmoc-nh-peg6-ch2ch2cooh偶联
[0054]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0055]
fmoc-nh-peg6-ch2ch2cooh(5.6克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应进行至2小时后，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时后停止反应，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0056]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0057]
(3)fmoc-trp(boc)-oh偶联
[0058]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0059]
fmoc-trp(boc)-oh(5.3克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应进行至2小时后，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时后停止反应，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0060]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0061]
(4)fmoc-thr(tbu)偶联
[0062]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0063]
fmoc-thr(tbu)(4.0克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应2小时以上。反应2小时，取样进行
kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时。反应完全，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0064]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0065]
(5)fmoc-gly偶联
[0066]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0067]
fmoc-gly(3.0克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应2小时以上。反应2小时，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时。反应完全，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0068]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应7分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0069]
(6)裂解
[0070]
按10ml/g的比例，配制裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：1,2-乙二硫醇：三异丙基硅烷：水：苯酚＝81.5：5：5：5：2.5：1v/v)，混合均匀，冷冻2小时以上；根据100ml/g树脂的比例，准备好所需要的乙醚，冷冻2小时以上，备用。将已预冻的裂解液加入至装有肽树脂的反应釜中，裂解反应150～165分钟。反应完毕，将反应液减压过滤，收集滤液。滤饼用少量纯tfa洗涤三次(洗涤液总量不超过裂解液体积10％)，合并滤液。将合并后的滤液缓慢加入至预先冷冻好的乙醚中，同时剧烈搅动混合液，使裂解液充分分散至混合液中。-20
±
5℃静置陈化2h以上，观察固体沉淀情况。混合液分层后，将上清液倾倒出，下层准备离心。将下层包含沉淀的混合物离心，收集沉淀。离心机转速3000转/分，时间≥5min/次。加适量未预冻的乙醚(能使沉淀充分分散在乙醚液中)到离心管中，搅拌破碎成悬浮状，离心收集沉淀，3000转/分，离心≥5min/次；共洗涤3次。将所得粗肽在真空下干燥12h以上，得到干燥的产品，即多肽化合物-2，其化学结构式如图3所示。
[0071]
(7)将化合物进行质谱检测，得到的质谱图如图4所示。
[0072]
实施例4：
[0073]
一种含有实施例3制备的多肽化合物-2的保湿化合物2，包括质量为1:3的冻干粉和溶媒液，所述冻干粉由以下质量百分比的原料组成：0.1％多肽化合物-2、1.5％甘露糖醇、0.1％磷酸氢二钠、1％磷酸二氢钠、1％透明质酸钠、5％丁二醇、水余量。
[0074]
实施例5：
[0075]
一种用于皮肤保湿的多肽化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0076]
(1)合成wang resin树脂溶胀
[0077]
称取wang resin树脂5克(起始替代度sub0＝0.3-0.4mmol/g)；将树脂加入到反应器中，加入dmf洗涤3次，抽干。再加入dmf(用量5-7ml/g树脂)溶胀30min以上，抽干。其中，洗涤搅拌时间每次不少于2min，洗涤溶剂用量3-7ml/g树脂；所有操作均应保证树脂在溶剂中充分搅拌展开，不粘稠。下同。
[0078]
(2)fmoc-nh-peg8-ch2ch2cooh偶联
[0079]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0080]
fmoc-nh-peg8-ch2ch2cooh(6.6克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应进行至2小时后，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时后停止反应，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0081]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0082]
(3)fmoc-ser(tbu)-oh偶联
[0083]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0084]
fmoc-ser(tbu)-oh(3.9克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应进行至2小时后，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时后停止反应，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0085]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0086]
(4)fmoc-asn(trt)偶联
[0087]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0088]
fmoc-asn(trt)(6.0克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应2小时以上。反应2小时，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时。反应完全，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0089]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应5分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0090]
(5)fmoc-gly偶联
[0091]
以合成规模为基数，按一定投料比称量物料：
[0092]
fmoc-gly(3.0克)；hobt(1.6克)，用适量dmf和dcm溶解(体积比1：1，溶剂总体积为2-3ml/g树脂，保证树脂在溶剂中充分搅拌)，冰浴至少10min后缓慢加入dipcdi(1.6克)，活化反应5
±
0.5min后加入到反应器中。偶联反应2小时以上。反应2小时，取样进行kaiser检测，观察是否显色，以确定反应是否完全。如显色，继续偶联0.5小时。反应完全，抽干反应液，用dmf洗涤3次，抽干液体。
[0093]
脱保护：将20％dblk(用量3-5ml/克树脂)加入反应器中，搅拌均匀反应3分钟，抽干溶液，重复一次，搅拌均匀反应7分钟，抽干溶液。用dmf洗6次。抽干溶液。kaiser检测，观
察是否显色，以确定脱保护反应是否完全。反应完全，显色。
[0094]
(6)裂解
[0095]
按10ml/g的比例，配制裂解液(三氟乙酸：苯甲硫醚：1,2-乙二硫醇：三异丙基硅烷：水：苯酚＝81.5：5：5：5：2.5：1v/v)，混合均匀，冷冻2小时以上；根据100ml/g树脂的比例，准备好所需要的乙醚，冷冻2小时以上，备用。将已预冻的裂解液加入至装有肽树脂的反应釜中，裂解反应150～165分钟。反应完毕，将反应液减压过滤，收集滤液。滤饼用少量纯tfa洗涤三次(洗涤液总量不超过裂解液体积10％)，合并滤液。将合并后的滤液缓慢加入至预先冷冻好的乙醚中，同时剧烈搅动混合液，使裂解液充分分散至混合液中。-20
±
5℃静置陈化2h以上，观察固体沉淀情况。混合液分层后，将上清液倾倒出，下层准备离心。将下层包含沉淀的混合物离心，收集沉淀。离心机转速3000转/分，时间≥5min/次。加适量未预冻的乙醚(能使沉淀充分分散在乙醚液中)到离心管中，搅拌破碎成悬浮状，离心收集沉淀，3000转/分，离心≥5min/次；共洗涤3次。将所得粗肽在真空下干燥12h以上，得到干燥的产品，即多肽化合物-3，其化学结构式如图5所示。
[0096]
(7)将化合物进行质谱检测，得到的质谱图如图6所示。
[0097]
实施例6：
[0098]
一种含有实施例5制备的多肽化合物-3的保湿化合物3，包括质量为1:3的冻干粉和溶媒液，所述冻干粉由以下质量百分比的原料组成：0.1％多肽化合物-3、1.5％甘露糖醇、0.1％磷酸氢二钠、1％磷酸二氢钠、1％透明质酸钠、5％丁二醇、水余量。
[0099]
对比例1：
[0100]
与实施例2的不同之处在于，对比例1未添加多肽化合物-2。
[0101]
实施例7：测试
[0102]
1、皮肤水分含量mmv测试方法
[0103]
mmv测试原理：采用电容法来测试人体皮肤角质层的水分含量，水和其他物质的介电常数完全不相同，当人体皮肤含水量不同的时候，从皮肤测得的电容值完全不同。通过测量皮肤的电容值可以推测皮肤水分含量。
[0104]
(1)测试设备：德国ck公司多功能皮肤测试仪，型号ck-mpa10，本发明选用皮肤水分含量测试探头corneometer cm825测试探头。
[0105]
(2)试验条件：测试环境条件：测试环境温度为25
±
1℃，湿度为55
±
5％，并且进行实时动态监测。
[0106]
(3)志愿者要求：志愿者要求：筛选不少于30名合格志愿者，具体要求如下：年龄在16～65岁之间；测试前三天测试体温均正常；无严重系统性疾病，无免疫缺陷或自身免疫性疾病者；无活动性过敏疾病者；不在妊娠期和哺乳期；对护肤类化妆品无过敏史者；近三个月内未曾使用激素类药物及免疫抑制剂者；近三年未参加其他临床试验者；测试前所有自愿者应填写知情同意书；前臂测试区域电容法皮肤水分测定的基础值在15-100之间。
[0107]
(4)测试前准备：要求志愿者在受试部位前7天内不能使用任何产品(包括化妆品和外用药品等)。实验前测试者需要清洁双手前臂内测，并用无尘纸巾擦拭干净，并标记好测试范围，测试开始前1小时内不能喝水。测试前应在符合温度为25
±
1℃，湿度为55
±
5％的房间内，将前臂完全裸露在外，呈测试状态放置，保持放松状态静坐不少于45min。
[0108]
(5)测试步骤：实验时在每支手臂可以选择多个测试部位，每个测试面积是5
×
5cm2，测试部位之前的间隔要大于2cm，选定测量部位后先测量未涂抹样品的电容值。然后样品按1.0
±
0.1mg/cm2的用量，均匀涂抹于手臂上。在涂抹1小时、2小时、4小时后，分别使用电容法测试涂抹样品部位和空白对照部位的皮肤电容值，每个部位平行测定10次，取平均值。
[0109]
(6)测试数据：按实验的设计分别测得各时间段的mmv值。
[0110]
计算公式为：w％＝(w
1-w0)/w0×
100％
[0111]
注：w％＝皮肤水分含量增长百分比(mmv)
[0112]
w0＝皮肤涂抹样品前水分含量
[0113]
w1＝皮肤涂抹样品后水分含量。
[0114]
以实施例2、4、6获得的含有多肽的保湿化合物1、含有多肽的保湿化合物2、含有多肽的保湿化合物3和对比例1的产品为样品进行测试，结果如下表1所示。
[0115]
表1实施例2、4、6和对比例1所得产品的皮肤水分含量mmv％结果
[0116][0117]
以上所述仅为本技术的较佳实施例而已，并不用以限制本技术，凡在本技术的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本技术的保护范围之内。