一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法与流程

1.本发明涉及生物技术领域，具体为一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法。


背景技术：

2.人的口腔黏膜由多层细胞组成，具有完整的基因组dna的特点，因此，在进行分子诊断的过程中，口腔拭子成为重要的生物检验材料，近些年，选用口腔拭子开展dna检测有慢慢增加的发展趋势；
3.传统方法中多采用苯酚-氯仿-异戊醇、蛋白酶k消化、吸附柱等方法从口腔拭子中提取dna，这些方法具有有机试剂污染、成本高、操作繁琐、通量小等特点，随着分子诊断行业的快速发展，急需能够快速、高通量、自动化的核酸提取方法，基于上述背景技术中提出的问题，本发明旨在提供一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，以解决背景技术中提出的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，包括拭子保存液、异丙醇、磁珠、ⅰ型洗涤液、ⅱ型洗涤液、洗脱液。
6.作为本发明的一种优选技术方案，所述i型洗涤液由水和0.5m～5m胍类化合物、10vol％～40vol％异丙醇组成。
7.作为本发明的一种优选技术方案，所述ⅱ型洗涤液由水和10mm～50mm三羟甲基氨基甲烷、40vol％～80vol％无水乙醇组成。
8.作为本发明的一种优选技术方案，所述磁珠为羟基纳米磁珠，超顺磁性羟基纳米磁性微球，直径为100～2000nm。
9.作为本发明的一种优选技术方案，所述磁珠存在于磁珠悬液中，其中悬浮磁珠的缓冲液为洗涤液ii，采用的磁珠悬液中，磁珠的浓度为5-50mg/ml，作为优选，磁珠的浓度为10mg/ml。
10.作为本发明的一种优选技术方案，所述洗脱液为10mm三羟甲基氨基甲烷。
11.一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，具体如下：
12.s1、所述96深孔板第1/3列和第7/9列依次加入500μl的i型洗涤液；
13.s2、所述96深孔板第2列和第8列分别加入450μl的异丙醇；
14.s3、所述96深孔板第4列和第10列分别加入600μ的ⅱ型洗涤液；
15.s4、所述96深孔板第5列和第11列分别加入330μ的磁珠悬液；
16.s5、所述96深孔板第6列和第12列分别加入80μ的洗脱液；
17.s6、运行核酸提取仪，结束后将96深孔板第6列和第12列的洗脱液转移至新的ep管内，在零下20℃的环境中保存备用。
18.本发明具备以下有益效果：
19.该磁珠法快速提取口腔拭子的方法，通过提供高通量、完全自动化的口腔拭子dna提取试剂及相应的提取方法，从而达到了相比较于手工提取方法，本发明所提出的方法能够成功提取口腔拭子获得dna，并且提取所得产物含量高且纯度良好的效果。
附图说明
20.图1为本发明核酸自动提取仪程序设置示意图；
21.图2为本发明对照试剂结果对比示意图；
22.图3为本发明对照试剂nanodrop结果示意图。
具体实施方式
23.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
24.请参阅图1，本实施方案中：一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，包括拭子保存液、异丙醇、磁珠、ⅰ型洗涤液、ⅱ型洗涤液、洗脱液。
25.本实施例中，i型洗涤液由水和0.5m～5m胍类化合物、10vol％～40vol％异丙醇组成；ⅱ型洗涤液由水和10mm～50mm三羟甲基氨基甲烷、40vol％～80vol％无水乙醇组成；磁珠为羟基纳米磁珠，超顺磁性羟基纳米磁性微球，直径为100～2000nm；磁珠存在于磁珠悬液中，其中悬浮磁珠的缓冲液为洗涤液ii，采用的磁珠悬液中，磁珠的浓度为5-50mg/ml。作为优选，磁珠的浓度为10mg/ml；洗脱液为10mm三羟甲基氨基甲烷。
26.实施列一：
27.一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，具体如下：
28.s1、96深孔板第1/3列和第7/9列依次加入500μl的i型洗涤液；
29.s2、96深孔板第2列和第8列分别加入450μl的异丙醇；
30.s3、96深孔板第4列和第10列分别加入600μ的ⅱ型洗涤液；
31.s4、96深孔板第5列和第11列分别加入330μ的磁珠悬液；
32.s5、96深孔板第6列和第12列分别加入80μ的洗脱液；
33.s6、运行核酸提取仪，结束后将96深孔板第6列和第12列的洗脱液转移至新的ep管内，在零下20℃的环境中保存备用。
34.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。


技术特征：
1.一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，其特征在于：包括拭子保存液、异丙醇、磁珠、ⅰ型洗涤液、ⅱ型洗涤液、洗脱液。2.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，其特征在于：所述i型洗涤液由水和0.5m～5m胍类化合物、10vol％～40vol％异丙醇组成。3.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，其特征在于：所述ⅱ型洗涤液由水和10mm～50mm三羟甲基氨基甲烷、40vol％～80vol％无水乙醇组成。4.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，其特征在于：所述磁珠为羟基纳米磁珠，超顺磁性羟基纳米磁性微球，直径为100～2000nm。5.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，其特征在于：所述磁珠存在于磁珠悬液中，其中悬浮磁珠的缓冲液为洗涤液ii，采用的磁珠悬液中，磁珠的浓度为5-50mg/ml。作为优选，磁珠的浓度为10mg/ml。6.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，其特征在于：所述洗脱液为10mm三羟甲基氨基甲烷。7.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，具体如下：s1、所述96深孔板第1/3列和第7/9列依次加入500μl的i型洗涤液；s2、所述96深孔板第2列和第8列分别加入450μl的异丙醇；s3、所述96深孔板第4列和第10列分别加入600μ的ⅱ型洗涤液；s4、所述96深孔板第5列和第11列分别加入330μ的磁珠悬液；s5、所述96深孔板第6列和第12列分别加入80μ的洗脱液；s6、运行核酸提取仪，结束后将96深孔板第6列和第12列的洗脱液转移至新的ep管内，在零下20℃的环境中保存备用。

技术总结
本发明涉及生物技术领域，尤其为一种磁珠法快速提取口腔拭子的方法，包括拭子保存液、异丙醇、磁珠、Ⅰ型洗涤液、Ⅱ型洗涤液、洗脱液，所述Ⅱ型洗涤液由水和10mM～50mM三羟甲基氨基甲烷、40vol％～80vol％无水乙醇组成，所述磁珠为羟基纳米磁珠，超顺磁性羟基纳米磁性微球，直径为100～2000nm，所述磁珠存在于磁珠悬液中，其中悬浮磁珠的缓冲液为洗涤液II，采用的磁珠悬液中，磁珠的浓度为5-50mg/mL。作为优选，磁珠的浓度为10mg/mL。本发明通过提供高通量、完全自动化的口腔拭子DNA提取试剂及相应的提取方法，从而达到了相比较于手工提取方法，本发明所提出的方法能够成功提取口腔拭子获得DNA，并且提取所得产物含量高且纯度良好的效果。的效果。的效果。


技术研发人员：张传杰 韩典森 王才宝 龚小鹏
受保护的技术使用者：济凡生物科技（常州）有限公司
技术研发日：2022.06.14
技术公布日：2022/9/2