专利名称：诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法
技术领域：
本发明涉及愈伤组织的诱导及从愈伤组织中提取目的物的方法，特别是涉及杜仲愈伤组织的诱导及从愈伤组织中提取杜仲胶的方法。
目前，国内外生产杜仲胶通常要经过播种、育苗、移栽，育成成龄树后再从树叶中提取杜仲胶，需要8-10年时间，土地、人力和物力等的投资较大，提胶方法主要有发酵法、甲苯法、碱浸法和冻胶法等，技术复杂，费时、费力。
本发明的目的是提供一种方法，使杜仲愈伤组织在室内大量快速繁殖，并从中提取杜仲胶，实现杜仲胶的快速工厂化生产，降低生产成本，提高生产效率。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案。这种诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法包括(1)培养愈伤组织将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于加入了2-6μM2，4-D和5-10μM 6-BA，琼脂7g/l的B5或MS培养基上，诱导愈伤组织，并进行继代培养和收获愈伤组织。
(2)将收获的愈伤组织在70-80℃下烘干至恒重，然后粉碎、过筛；(3)将粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小时，然后过滤，向滤液中加入1-1.5倍量的甲醇，在25-26℃下沉淀1-2小时，弃去沉淀液，自然干燥沉淀物。
用上述方法生产杜仲胶，简单、实用、高效。只需播种少量种子，即可获得大量可用于培养的茎和叶，而且不受季节限制。愈伤组织采取固体培养，方便简单，提胶方法也简单易行，不需要特殊设备，因而成本较低，不需太多的投资，就可进行杜仲胶的工厂化生产。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1播种杜仲种子，采取幼苗的叶片和茎段，常规消毒后，接种于添加了4.5μM2，4-D(2，4一二氯苯氧乙酸)和8.9μM 6-BA(6-苄基腺嘌呤)的B5琼脂培养基上，琼脂为7g/l。在26-28℃下进行暗培养，诱导愈伤组织形成，其愈伤组织的诱导率为97.7％。每30-35天对愈伤组织进行一次继代培养，边继代培养边收获愈伤组织，将收获的愈伤组织在75℃下烘干至恒重，粉碎后用60目筛过筛，将所得粉末浸入苯提取液中，苯用量为样品6倍(重量比)苯液完全浸没了样品。浸提32小时，然后过滤，向滤液中加入1.5倍量的甲醇，在25℃下沉淀1小时，弃去沉淀液，自然干燥沉淀物，得到杜仲胶。杜仲胶的得率为2.92％。
实施例2基本方法和步骤与实施例1相同，所不同的是，向B5琼脂培养基中添加的是2μM2，4-D和5μM6-BA，愈伤组织的诱导率为50.4％。愈伤组织烘干粉末在苯提取液中浸提24小时，杜仲胶的得率为1.80％。
实施例3基本方法和步骤与实施例1相同，所不同的是，向B5琼脂培养基中添加6μM2，4-D和10μM 6-BA，愈伤组织的诱导率为84.4％，愈伤组织烘干粉末在苯提取液中浸提48小时，滤液在1倍量的甲醇中沉淀2小时，杜仲胶的得率为1.89％。
实施例4基本方法同实施例1，只是采用培养基为MS，其诱导率为90.0％，杜仲胶得率为1.68％。
实施例5基本方法同实施例1，只是溶剂为三氯甲烷，其诱导率仍为90.0％，而得率为1.67％。
实施例6将实施例1得到的自然干燥沉淀物以4-5倍量(重量比)的乙醚溶解，回收乙醚得到精制杜仲胶，其纯度为98.2％。
用上述方法得到的杜仲胶，经红外光谱和紫外光谱检测、比较，证明与从植株中直接得到的杜仲胶相同。
权利要求
1.一种诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法，其特征在于它包括(1)培养愈伤组织将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于加入了2-6μM2，4-D和5-10μM6-BA，琼脂7g/l的B5或MS培养基上，诱导愈伤组织，并进行继代培养和收获愈伤组织。(2)将收获的愈伤组织在70-80℃下烘干至恒重，然后粉碎、过筛；(3)将粉末浸入苯或三氯甲烷中浸提24-48小时，然后过滤，向滤液中加入1-1.5倍量的甲醇，在25-26℃下沉淀1-2小时，弃去沉淀液，自然干燥沉淀物。
2.根据权利要求1所述的诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法，其特征在于在所述的2，4-D浓度为4.5μM，6-BA的浓度为8.9μM。
3.根据权利要求1所述的诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法，其特征在于杜仲幼苗的叶片和茎段在培养基上的培养为26-28℃的温度下暗培养。
4.根据权利要求1所述的诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法，其特征在于所述的粉碎后60-80目下过筛。
5.根据权利要求1所述的诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法，其特征在于所述的用苯或三氯甲烷浸提的时间为32小时。
6.根据权利要求1所述的诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法，其特征在于所述的自然干燥沉淀物以乙醚溶解，挥掉或回收乙醚得到精制杜仲胶。
全文摘要
本发明涉及一种诱导杜仲愈伤组织并从中提取杜仲胶的方法,目的是降低杜仲胶的生产成本,提高生产率。将杜仲幼苗的叶片和茎段接种于添加了2,4－D和6－BA的固体MS或B
文档编号C08C1/02GK1252215SQ9812069
公开日2000年5月10日 申请日期1998年10月27日 优先权日1998年10月27日
发明者杨振堂, 臧埔, 赵景辉 申请人:杨振堂