1-芘基-碳酰肼的合成及其衍生物在糖蛋白特异性预染检测法中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及糖蛋白特异性荧光预染检测技术，具体地说是1-芘基-碳酰肼 (UGF202)的设计合成及其衍生物在糖蛋白特异性荧光预染检测法中的应用。
【背景技术】
[0002] 蛋白质糖基化修饰在生命科学研宄领域具有至关重要的作用，作为最主要和普遍 的蛋白质翻译后修饰之一，目前已知哺乳动物蛋白质中至少有二分之一发生了糖基化，这 些糖蛋白广泛分布于组织、细胞、体液中，特别是在细胞膜表面、体液等中含量丰富，糖基化 对于蛋白质的折叠、运输和定位等都起着重要作用，并参与受体激活、信号转导、细胞载附 等诸多重要的生物过程。糖蛋白数量变化或糖链结构的改变，都可能导致疾病发生。不但 目前已知的很多疾病的诊断标志物是糖蛋白，而且通过国际标准认证的药物中，糖蛋白也 占到较尚的比例。
[0003] 分离纯化及鉴定是糖蛋白研宄的重要步骤，是下一步结构分析得以实施的基础， 目前凝胶上蛋白质染色主要分为预染及后染两类。前者在电泳前对样品进行处理，使染料 特异性地与样品内糖蛋白相结合，经电泳分离之后即可在相应激发波长下进行观察，后染 主要对电泳后的蛋白凝胶进行特异性染色。
[0004] 目前糖蛋白检测领域试剂盒主要集中于后染，且多数产品均以高附加值的价格在 市场销售，价格高昂，不利于生物技术基础研宄的发展。尤其国内利用现有的生物试剂进行 生物实验成本居高不下，无法实现经济效益与实验共同发展。糖蛋白特异性荧光预染检测 技术鲜有报道。本发明开发的UGF202及其衍生物荧光预染检测方法灵敏度与经典的Pro-Q Emerald300染色法一致，是一种灵敏、便捷、特异的糖蛋白荧光预染检测技术，有较好的基 础与临床意义。
【发明内容】
[0005]
【主权项】
1. 具有下列化学结构的化合物及其成盐化合物：
化合物（UGF202)为： (E) - (pyren-l-ylmethylene)carbohydrazide (E) -1-花基碳酰餅。
2. 权利要求上述化合物，其在糖蛋白特异性预染检测中的应用。
3. 如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的UGF202的钠盐、钾盐、铵盐等。
4. 一种凝胶上糖蛋白特异性荧光预染检测法，其包括步骤： 1) 在1-20 μ L含0· 5-10 μ g蛋白样品（不足1-20 μ L用重蒸水补足）中加入 0. 005-0. 05Μ高碘酸水溶液1-20 μ L，置于避光处进行氧化反应2-20min ; 2) 在反应液中加入0. 1-0. 3M抗坏血酸1-10 μ L，摇匀反应0. l-5min ; 3) 在反应液中加入UGF202或其衍生物按体积比0. 1-5%二甲基亚砜溶液1-5 μ L，室温 下反应5_20min ; 4) 在反应液中加入10-50 μ L 3X蛋白质上样缓冲液，摇匀； 5) 电泳，观察。
5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤1)中蛋白样品体积为10 μ L :所加高碘 酸水溶液体积为10 μ L，摩尔浓度为0. 03Μ，避光反应。
6. 如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤2)中所加抗坏血酸溶液体积为5 μ L， 摩尔浓度为〇. 24Μ。
7. 如权利要求4?5任一项所述的方法，其特征在于，步骤3)所加 UGF202或其衍生物 溶液为按体积比〇. 5%的二甲基亚砜溶液2. 5 μ L。
8. 如权利要求4?5任一项所述的方法，其特征在于，步骤4)向反应液中加入30 μ L 3Χ蛋白质上样缓冲液。
9. 如权利要求4?5任一项所述的方法，其特征在于，步骤1)氧化时间为5min ;其特 征在于，步骤2)反应时间为0. 5min ;步骤3)反应时间为lOmin。
10. 如权利要求4?5任一项所述的方法，其特征在于，步骤5)可在激光扫描仪下观察 染色后的糖蛋白。
【专利摘要】本发明涉及糖蛋白特异性荧光预染检测法检测技术，具体地说是1-芘基-碳酰肼(UGF202)的合成及其衍生物在糖蛋白特异性荧光预染检测中的应用。本发明还提供了应用UGF202进行糖蛋白特异性荧光预染检测的方法，包括步骤：向蛋白质样品中加入高碘酸溶液进行氧化；加入抗坏血酸溶液中和过量高碘酸溶液；加入染料反应；加入上样缓冲液；电泳；观察。本预染发明具有灵敏度高、选择性好、操作简单迅速、重现性好、线性关系好、质谱兼容性好、使用安全、成本低廉等优点。此外相对于凝胶电泳后糖蛋白染色方法，预染检测法在电泳结束后即可观察，节省了凝胶电泳后染色步骤，可较好地适用于高通量蛋白质组学的研究。
【IPC分类】C07C281-06, C09K11-06, G01N21-64
【公开号】CN104529834
【申请号】CN201510027542
【发明人】玄元虎, 王旭, 周阿益, 郁冬冬, 洪国赢, 朱忠欣, 丛维涛, 金利泰
【申请人】温州医科大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月16日