荸荠皮提取分离香叶木素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然有机化学领域，涉及一种香叶木素的提取分离方法，特别是涉及 一种从荸荠皮中提取分离香叶木素的方法。
【背景技术】
[0002] 香叶木素（Diosmertin)，化学名为V -甲氧基_5,7,3'-三羟基黄酮，为黄色针 状晶体，是一种天然的黄酮类化合物，主要存在于唇形科植物薄荷、梓檬、白刺花、蒙古山萝 卜、绒毛丹参、蒲公英等多种植物中。现代研宄表明，香叶木素有抗氧化、抗感染、抗休克、抗 诱变和抗变应性特性等活性以及抑制致癌作用，可作为治疗HIV和其它病毒感染的抗病毒 药物，也可治疗各种炎症。
[0003] 香叶木素可从植物中分离得到，主要是由醇提、萃取、层析、色谱层析、结晶等工序 完成；也可以从橙皮苷中半合成得到。公开号为CN 102304113 A的中国专利介绍了一种从 薄荷中提取分离香叶木素的方法。该法利用超临界萃取技术萃取，用大孔吸附树脂和逆流 色谱技术分离，最后重结晶获得香叶木素产品。公开号为CN 103342689 A的中国专利介绍 了一种从瓜萎皮中分离香叶木素的方法。该方法是利用聚酰胺柱结合半制备高效液相色谱 分离纯化香叶木素。公开号为CN 103145668 A的中国专利介绍了一种橙皮苷半合成制备 香叶木素的方法。该方法是以橙皮苷为原料，经酸性乙醇溶液水解后精制获得橙皮素，后者 在吡啶溶液中加碘脱氢后精制获得香叶木素，是橙皮苷制备木犀草素的一个中间产品。这 些方法所用的原料都不易获得，阻碍了香叶木素生产的规模化
[0004] 荸养（Eleocharis tuberosa)，又称马蹄，属莎草科多年生浅水草本植物荸养的地 下球茎，我国大部分地区都有栽培。其中，广西荸荠产量占全国70%，贺州荸荠产量占广西 70%。据文献报道，荸荠有抗菌、抗肿瘤、防治呼吸道疾病、利肠通便和利尿排淋等作用；临 床上可用于治疗咽喉疼痛、痰热咳嗽、热病烦渴、小便不利、痢疾等症。研宄表明，荸荠的活 性物质主要富集在果皮和果肉之间。在荸荠加工过程中，被丢弃的荸荠皮质量约占新鲜荸 荠质量的25%，资源非常丰富。我们在研宄中发现荸荠皮中含有香叶木素，但目前未见从荸 荠皮中提取分离该化合物的文献报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于：提出一种荸荠皮提取分离香叶木素的方法。
[0006] 本发明的荸荠皮提取分离香叶木素的方法，应用常规提取法和MCI、聚酰胺及凝胶 色谱技术从荸荠皮中提取分离香叶木素，具体步骤如下：
[0007] (1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用；以重量计，称取荸荠皮粉末1份，加入提取 罐中，每次加入4-10份70%体积百分比的丙酮水溶液，在25°C下浸泡24h，浸泡3次，过滤， 合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物。
[0008] (2)以重量计，将提取物1份分散在5份水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙酸 乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物。
[0009] (3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇 挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，以40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相 梯度洗脱，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为70-90%体积百分比的洗脱液，减压浓 缩，获得粗品A。
[0010] ⑷往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至 干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为6:1-3:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法 检测，收集合并含有香叶木素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B。
[0011] (5)以重量计，将粗品B 1份，溶于4-8份甲醇中，加入等体积的水制成悬浊液，用 Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有香叶木素 的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C ;将所得粗品C再次用Sephadex LH-20凝胶色谱纯化，用 70%体积百分比甲醇水溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有香叶木素的洗脱液，减压 浓缩，干燥，获得含量达95%以上的香叶木素产品。
[0012] 所述步骤（3)中的所述的此1柱规格为70父46〇111111，填充材料为此11610^-20?， 柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min，检测波长为245nm ;所述的流动相为 40-100 %体积百分比的甲醇水溶液。
[0013] 所述步骤⑷中所述的聚酰胺，规格为200-300目；所用洗脱液为体积比为 6:1-3:1的氯仿-甲醇溶液。
[0014] 本发明与现有技术相比其有益效果是：设计科学合理，开辟了从天然植物中提取 分离香叶木素新途径，分离效果好，产品纯度高，使一贯被视为废弃物的荸荠皮变废为宝， 所选用的层析材料MCI、聚酰胺和凝胶均可反复使用，原料易得，资源丰富，生产成本低，可 进行规模化生产，满足医药工业需要。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0016] 本发明的荸荠皮提取分离香叶木素的方法，应用常规提取法和MCI、聚酰胺及凝胶 色谱技术从荸荠皮中提取分离香叶木素，具体步骤如下：
[0017] (1)将新鲜的荸荠皮风干，粉碎，备用。称取一定质量（g)的荸荠皮粉末加入提取 罐中，再加入4-10倍体积（mL)的70%体积百分比的丙酮水溶液，在25°C下浸泡24h，浸泡 3次，过滤，合并滤液，减压浓缩至膏状，获得提取物。
[0018] (2)将提取物（g)分散在5倍体积（mL)的水中制成悬浊液，用1-2倍水体积的乙 酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减压浓缩至干，获得萃取物。
[0019] (3)往萃取物中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍萃取物质量的聚酰胺拌样，将甲醇 挥发至干，装柱，连接MCI柱进行中压分离，柱规格为70mm X 460mm，填充材料为日本三菱化 学公司生产的MCI-gel CHP-20P，柱色谱条件为：柱压为80Psi，流动相流速为50mL/min， 检测波长为254nm，以40-100%体积百分比的甲醇水溶液为流动相梯度洗脱，根据检测峰 变化情况调节洗脱液浓度，按每份500mL收集，薄层色谱法检测，收集合并流动相浓度为 70-90%体积百分比的洗脱液，减压浓缩，获得粗品A。
[0020] (4)往粗品A中加入甲醇至完全溶解，用2-4倍质量的聚酰胺拌样，将甲醇挥发至 干，转入聚酰胺色谱柱进行分离，用体积比为6:1-3:1的氯仿-甲醇溶液洗脱，薄层色谱法 检测，收集合并含有香叶木素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品B。
[0021] (5)将粗品B(g)溶于4-8倍体积（mL)的甲醇中，加入等甲醇体积的水制成悬浊 液，用瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司生产的Sephadex LH-20凝胶色谱柱纯化，用 甲醇洗脱，薄层色谱法检测，收集合并含有香叶木素的洗脱液，减压浓缩，获得粗品C。将所 得粗品C再次用Sephadex LH-20凝胶色谱纯化，用甲醇水溶液洗脱，薄层色谱法检测，收集 合并含有香叶木素的洗脱液，减压浓缩，干燥，获得含量达95%以上的香叶木素产品。
[0022] 实施例1
[0023] 将8kg新鲜荸荠皮粉末加入在提取罐中，加入32L 70%体积百分比的丙酮水溶 液，在25°C下浸泡24h，共浸泡3次，过滤，合并滤液，减压浓缩膏状，获得提取物I. 05kg。
[0024] 将提取物加入5. OL水中制成浑浊液，用5. OL乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，减 压