一种用乙酰水杨酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法

文档序号:8218459阅读:546来源:国知局
一种用乙酰水杨酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领,尤其是涉及一种用乙酰水杨酸提高三角褐指藻岩藻 黄素含量的方法。
【背景技术】
[0002] 岩藻黄素(Fucoxanthin)是一类在叶绿体类囊体中参与光合作用光化学系统的 类胡萝卜素,广泛存在于褐藻中。在叶绿体中,岩藻黄素是以岩藻黄素叶绿体蛋白质复合体 (FCPS)存在的。该复合物是由岩藻黄素、叶绿素a和几种蛋白质所组成的。近年来,由于岩 藻黄素具有抗氧化、抗癌、抗肥胖等有重要的作用,因此受到了广泛的关注。岩藻黄素通过 调控细胞凋亡和细胞周期来实现,它能够诱导细胞周期停滞和增强细胞间通讯来抑制癌细 胞的增殖。如今,由于缺少运动以及摄入大量的脂肪、糖类和高能量的物质,肥胖已经成为 普遍的现象。岩藻黄素在肥胖的治疗中同样有重要的作用。Hayato等研宄了岩藻黄素在肥 胖中作用的机理,认为岩藻黄素是通过激活UCP1蛋白(线粒体解偶联蛋白),一方面促进 脂肪的分解,而另一方面则是在肝脏中生成DHA,从而降低胆固醇的含量。诱导子能够对增 加次生代谢产物,通过对诱导子浓度的选择可以调控次级代谢以及生物合成作用。乙酰水 杨酸就属于内源性诱导子,在植物防卫反应中起着信号作用。三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)中不仅含有丰富的油脂,同样含有岩藻黄素。
[0003]阿司匹林也叫乙酰水杨酸,是一种历史悠久的解热镇痛药,诞生于1899年3月6日。用于治感冒、发热、头痛、牙痛、关节痛、风湿病,还能抑制血小板聚集,用于预防和治疗 缺血性心脏病、心绞痛、心肺梗塞、脑血栓形成,也可提高植物的出芽率,应用于血管形成术 及旁路移植术也有效。
[0004]本申请通过利用不同浓度的乙酰水杨酸处理三角褐指藻,来研宄三角褐指藻的生 长状况,分离和提取三角褐指藻中的岩藻黄素并且利用HPLC对不同浓度的乙酰水杨酸处 理下的三角褐指藻中岩藻黄素含量的测定。进而得出最适乙酰水杨酸的浓度,提高岩藻黄 素的含量。为提高岩藻黄素含量提供有力的实验依据和实验手段。

【发明内容】

[0005]本发明的目的在于提供一种用乙酰水杨酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法。 该方法对提高三角褐指藻中的岩藻黄素含量效果显著,操作简单方便,费用低,生产周期 短,适于批量处理和工厂化生产。
[0006]本发明具体通过以下技术方案实现:
[0007]-种用乙酰水杨酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法,包括以下步骤:
[0008] 1)将灭菌海水与MAD母液混合得营养液;
[0009] 2)在营养液中加入三角褐指藻母液培养;
[0010] 3)培养2天后,加入乙酰水杨酸;
[0011] 4)继续培养6天后手机藻液,离心分离,弃上清,收集藻体;
[0012] 5)将藻体冷冻干燥处理2天,研磨备用。
[0013] 本发明所述的MAD母液的配方为:KN03:10g,KH2P04:lg,FeS04.7H20 :0? 25g,MnS04: 0. 025g,EDTANa2:lg,V B1:0. 0006g,dH 20 :100ml。
[0014] 本发明所述的培养条件为:62. 5ymolphotons/ (m2 ?s),25°C。
[0015] 所述的灭菌海水与MAD母液的体积比为1:1000。
[0016] 所述的营养液与三角褐指藻母液的体积比为1 : 10。
[0017] 步骤⑶中培养液加入乙酰水杨酸后乙酰水杨酸的浓度为10mg/L?25mg/L,优选 的乙酰水杨酸的浓度为l〇mg/L。
[0018]步骤(5)冷冻干燥条件为:温度_70°C,压强999Pa。
[0019] 本发明的优点在于:发明首次公开了从三角褐指藻中提取岩藻黄素,为提高岩藻 黄素含量还利用不同浓度的乙酰水杨酸处理三角褐指藻,寻找最适合的乙酰水杨酸处理浓 度,通过该浓度对三角褐指藻的诱导处理,其岩藻黄素的含量增加显著。该发明操作简单方 便,费用低,生产周期短,适于批量处理和工厂化生产。由于岩藻黄素对抗癌,高血糖,心血 管疾病,糖尿病都有显著地功效,提高岩藻黄素的含量将满足人们治病的需要,并且能够提 高经济效益。
【附图说明】
[0020] 图1是是实施例利用不同浓度乙酰水杨酸处理三角褐指藻后生长曲线;
[0021] 图2是是实施例不同浓度乙酰水杨酸处理三角褐指藻后岩藻黄素含量变化。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明,以下所述,仅是对本发明的较佳实施 例而已,并非对本发明做其他形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容,依据本发明 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化,均落在本发明的保护范围内。
[0023] 一、实验方法
[0024] 1、三角褐指藻的培养
[0025] 三角褐指藻由宁波大学海洋生物工程重点实验室微藻室提供。取过滤且高温灭菌 的海水,加入1:1000灭菌MAV母液。MAD母液的配方为:KN03:10g,KH2P04:lg,FeS04*7H20: 0? 25g,MnS04:0.0 2 5g,EDTANa2:lg,VB1 :0? 0006, dH20 :100ml。以1:10比例接入藻液,并 在62. 5 ymol photons/(m2,s),25°C,12h/12h(黑暗/光照)条件下培养。每天分三个时 间段(8:00,12:00, 20:00)均匀摇藻体。
[0026] 2、三角褐指藻光密度回归方程和生长曲线测定
[0027] 取1ml藻液,倍比稀释,利用紫外可见分光光度计(6800型双光束,英国bibby科 技有限公司)测定每组稀释液的〇D_值,并且用血球计数法对各组样品计数。将所得数据 建立三角褐指藻光密度回归方程。每天同一时段分别取lml经不同浓度乙酰水杨酸处理的 三角褐指藻并测定〇D_值,每组均设3个平行。根据光密度回归方程得出各样品的细胞密 度,建立经不同浓度乙酰水杨酸处理三角褐指藻后的生长曲线。
[0028] 3、岩藻黄素的提取
[0029] 分别取80ml的处理三角褐指藻,分别作3个平行对其进行岩藻黄素的提取。将各 组藻体在4°C,52000g,离心lOmin,弃上清,收集藻体。冷冻干燥2d,称重。研磨
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