一种用甲基茉莉酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物医药技术领域，尤其是涉及一种用甲基茉莉酸提高三角褐指藻岩 藻黄素含量的方法。
【背景技术】
[0002] 岩藻黄素（Fucoxanthin)是一类呈橘黄色的类胡萝卜素，其广泛存在于褐藻和硅 藻中。它的结构比较特殊，有一个共轭双键，环氧基团，还有羰基，共同组成的多烯链化合 物。由于它的结构中包含氧原子，因此，它也属于叶黄素并具有抗氧化的作用。现在，心血管 疾病，癌症以及慢性疾病已经成为了死亡率最高的疾病。发达国家和发展中国家肥胖的概 率逐年快速增长。然而引起这些疾病和这种现象的原因是多方面的，而药物的治疗并不总 是有效的，研宄者正在对食物中对这些疾病有治疗和保护作用的功能性成分进行研宄。这 其中就包含了岩藻黄素。在褐藻中包括很多种生物活性的化合物，如《_3不饱和脂肪酸， 多酚，多糖和岩藻黄素。这些都与藻类中类胡萝卜素的抗氧化作用有关。但是，到目前为止， 仅仅通过类胡萝卜素的抗氧化作用还不能解释所有的生理作用。在过去的几年中，通过对 岩藻黄素的研宄，发现岩藻黄素在细胞代谢过程中对某些特殊基因的表达具有异常的调节 作用。岩藻黄素具有很多的作用，如抗氧化，抗癌症，抗肥胖，抗糖尿病，抗心血管疾病以及 抗老化的作用。可以说，岩藻黄素是一类功能强大的类胡萝卜素。它不仅能减少体内脂肪 的积累，还能调节血糖的含量。经研宄表明，岩藻黄素是安全的并且没有副作用。它还是重 金属和毒素的有效螯合剂。因此提高岩藻黄素的含量是一种迫切的需要。
[0003] 甲基茉莉酸（methyljasmonate，MeJA)是一类含有环戊酮基团的化合物。通过对 其进行分子生物学的研宄，发现甲基茉莉酸能够调控基因的表达。这些基因主要与植物发 育和自生的防御系统有着密切的关系。在高等植物体内，甲基茉莉酸也是一种内源生长调 节物质。在诱导植物防卫基因表达中具有信号分子的作用。当然，甲基茉莉酸本身也能够 作为激发子。王艳东等发现甲基茉莉酸除了能够促进细胞由初生代谢提前转化成次生代谢 夕卜，还可以促进细胞中某些次生代谢产物的合成。Muelleretal.和Tamogamietal等人 还发现，甲基茉莉酸不仅能够刺激植物中次生代谢产物的合成，还可以将次生代谢产物进 行迅速的积累，它的作用具有广泛性。目前，利用各种诱导子来提高岩藻黄素含量的相关文 献还未报道。本申请通过利用不同浓度的甲基茉莉酸处理三角褐指藻，来研宄三角褐指藻 的生长状况，分离和提取三角褐指藻中的岩藻黄素并且利用HPLC对不同浓度的甲基茉莉 酸处理下的三角褐指藻中岩藻黄素含量的测定。进而得出最适甲基茉莉酸的浓度，提高岩 藻黄素的含量。为提高岩藻黄素含量提供有力的实验依据和实验手段。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种用甲基茉莉酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法， 该方法对提高三角褐指藻中的岩藻黄素含量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期 短，适于批量处理和工厂化生产。
[0005] 本发明具体通过以下技术方案实现：
[0006] -种用甲基茉莉酸提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，包括以下步骤：
[0007] 1)将灭菌海水与MAD母液混合得营养液；
[0008] 2)在营养液中加入三角褐指藻母液培养；
[0009] 3)培养2天后，加入甲基茉莉酸；
[0010] 4)继续培养6天后手机藻液，离心分离，弃上清，收集藻体；
[0011] 5)将藻体冷冻干燥处理2天，研磨备用。
[0012] 本发明所述的MAD母液的配方为：KN03:10g，KH2P04:lg，FeS04.7H20 :0? 25g，MnS04: 0. 025g，EDTANa2:lg，VB1:0. 0006g，dH20 :100ml。
[0013] 本发明所述的培养条件为：5000千勒克斯，25 °C。
[0014] 所述的灭菌海水与MAD母液的体积比为1 : 1000。
[0015] 所述的营养液与三角褐指藻母液的体积比为1 : 10。
[0016] 步骤（3)中培养液加入甲基茉莉酸后甲基茉莉酸的浓度为0ymol/L-200ymol/ L，优选的甲基茉莉酸的浓度为200ymol/L。
[0017] 步骤（5)所述的冷冻干燥处理条件为：温度_70°C，压强999Pa。
[0018] 本发明的优点在于：发明首次公开了从三角褐指藻中提取岩藻黄素，为提高岩藻 黄素含量还利用不同浓度的甲基茉莉酸处理三角褐指藻，寻找最适合的甲基茉莉酸处理浓 度，通过该浓度对三角褐指藻的诱导处理，其岩藻黄素的含量增加显著。该发明操作简单方 便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产。由于岩藻黄素对抗癌，高血糖，心血 管疾病，糖尿病都有显著地功效，提高岩藻黄素的含量将满足人们治病的需要，并且能够提 高经济效益。
【附图说明】
[0019] 图1是本发明实施例不同浓度甲基茉莉酸处理三角褐指藻后生长曲线；
[0020] 图2是本发明实施例三角褐指藻生长曲线；
[0021] 图3是本发明实施例不同浓度甲基茉莉酸处理三角褐指藻后岩藻黄素含量变化。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0023] 一、实验方法
[0024] 1、三角褐指藻的培养
[0025] 取过滤且高温灭菌的海水，加入1 : 1000的灭菌MAD母液。MAD母液的配方为： KN03：10g,KH2P04：lg,FeS04 ? 7H20 ：0. 25g,MnS04：0. 025g,EDTANa2：lg,VB1 ：0. 0006,dH20 ： 100ml。以1 : 10的比例接入藻液，放置于5000Klx，温度为25°C，12h/12h黑暗/光照的培 养箱中。每天分三个时间段（8:00,12:00, 20:00)均匀摇藻体。
[0026] 2、三角褐指藻生长曲线的测定
[0027] 分别取300ml的灭菌MAD培养液3组。向每组平行中倒入30ml的藻液，放入光照 培养箱中进行培养。每天摇藻三次进行培养，并且利用分光光度机测定藻体的OD值（每次 测藻体OD值前应该将藻液摇匀）。
[0028] 3、利用甲基茉莉酸处理三角褐指藻
[0029] 向灭菌海水中加入MAD营养液，以1 : 10的比例加入三角褐指藻原液，将三角藻 放于光照培养箱中培养（培养条件与上文相同）2天，让三角褐指藻适应新的营养环境，加 入不同浓度的甲基茉莉酸。从三角褐指藻接入培养基的那天开始，每天需要利用分光光度 机来测定每组的藻液的浓度，再测定6天。
[0030] 本实验所用的岩藻黄素标准品取自宁波大学海