林麝粪便中类固醇激素的提取方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及生物技术领域中林麝粪便中类固醇激素的提取方法。
【背景技术】
[0002] 林麝是一种小型的林栖反刍有蹄类，是亚洲特产的珍贵药用动物。尽管我国开始 林麝圈养实践已有50多年的历史，但是圈养麝类种群增长速度缓慢，有些年甚至出现负增 长的现象。分析其原因主要有：1.人工圈养的母麝在繁殖期后空怀率比较高；2.麝类动物 生性胆小机警，颇警觉，应激性强。皮质醇是一种类固醇激素，可以直接反映动物的生理应 激状况；雌二醇和睾酮均为类固醇激素，这两种激素可以很好的反映动物的繁殖生理状态， 对林麝的皮质醇、雌二醇和睾酮的激素进行动态监测对林麝的圈养繁殖有十分重要的意 义。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是如何从动物粪便中提取出更多的类固醇激素（即 如何提高动物粪便中类固醇激素的提取量）。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了动物粪便中类固醇激素的提取方法。
[0005] 本发明所提供的动物粪便中类固醇激素的提取方法（从动物粪便中提取类固醇 激素的方法），包括用提取液浸提所述动物粪便得到含有所述类固醇激素的浸提液的步 骤；
[0006] 所述提取液为乙醇水溶液（溶质为乙醇，溶剂为水）、甲醇水溶液（溶质为甲醇，溶 剂为水）、乙醇或甲醇；
[0007] 所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为大于等于60 %小于100% ;
[0008] 所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比浓度为大于等于60%小于100%。
[0009] 上述方法中，所述类固醇激素为皮质醇、雌二醇和睾酮中的全部或两种或一种。
[0010] 上述方法中，所述提取液为所述乙醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分 比浓度为大于等于80 %小于100%。
[0011] 上述方法中，所述提取液为所述乙醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分 比浓度为大于等于90 %小于100%。
[0012] 上述方法中，所述提取液为所述乙醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分 比浓度为90 % -95%。
[0013] 上述方法中，所述提取液为所述乙醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分 比浓度为90%。
[0014] 上述方法中，所述提取液为所述甲醇水溶液；所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分 比浓度为60% -90%。所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比浓度具体可为60% -80%。
[0015] 上述方法中，所述动物为雌性动物；所述类固醇激素为皮质醇；所述提取液为所 述乙醇水溶液或所述甲醇；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度可为90%。
[0016] 上述方法中，所述动物为雌性动物；所述类固醇激素为雌二醇；所述提取液为所 述乙醇或所述乙醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度可为90%。
[0017] 上述方法中，所述动物为雄性动物；所述类固醇激素为皮质醇；所述提取液为所 述乙醇水溶液或所述乙醇或所述甲醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度可 为90%;所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比浓度可为60%或80%。
[0018] 上述方法中，所述动物为雄性动物；所述类固醇激素为睾酮；所述提取液为所述 乙醇水溶液或所述乙醇；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度可为90%。
[0019] 上述方法中，所述动物为林麝（Moschusberezovskii)。
[0020] 上述方法中，所述方法在20-25 °C进行。
[0021] 上述方法中，所述方法还包括将所述动物的新鲜粪便在自封袋中保存的步骤。所 述动物的新鲜粪便可在-20 °C冻存。
[0022] 实验证明，本发明的动物粪便中类固醇激素的提取方法可以提高动物粪便中类固 醇激素的提取量：90E(体积百分比浓度为90%的乙醇水溶液）可从每克雌性林麝干粪便 中提取得到425. 2373±21. 27ng皮质醇和3111. 2957±155. 70pg雌二醇，可从每克雄性 林麝干粪便中提取得到322. 3980±32. 24ng皮质醇和6. 5430±1. 21ng睾酮；乙醇可从每 克雌性林麝干粪便中提取得到287. 9728±34. 96ng皮质醇和3149. 2394±203. 98pg雌二 醇，可从每克雄性林麝干粪便中提取得到319. 2465±54. 12ng皮质醇和5. 8387±1. 52ng 睾酮；60M(体积百分比浓度为60%的甲醇水溶液）可从每克雄性林麝干粪便中提取得到 329. 3007±38. 41ng皮质醇和4. 8227±0. 60ng睾酮，可从每克雌性林麝干粪便中提取得到 368. 1832±23. 31ng皮质醇和2117. 2691±98. 89pg雌二醇；甲醇可从每克雌性林麝干粪便 中提取得到421. 65±50. 52ng皮质醇和2168. 4580±135. 93pg雌二醇，可从每克雄性林麝 干粪便中提取得到275. 31 ± 10. 91ng皮质醇和4. 0097±0. 62ng睾酮。实验证明，可以利用 本发明的动物粪便中类固醇激素的提取方法从动物粪便中提取类固醇激素，最佳提取液为 90E(体积百分比浓度为90 %的乙醇水溶液）。
【附图说明】
[0023] 图1为用不同提取液提取雌性林麝粪便得到的皮质醇提取量。
[0024] 图2为用不同提取液提取雄性林麝粪便得到的皮质醇提取量。
[0025] 图3为用不同提取液提取雌性林麝粪便得到的雌二醇提取量。
[0026] 图4为用不同提取液提取雄性林麝粪便得到的睾酮提取量。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028] 下述实施例中，林麝粪便中皮质醇的提取过程均在20-25 °C进行。
[0029] 下述实施例中的乙醇水溶液和甲醇水溶液的溶剂均为水，乙醇水溶液的溶质为乙 醇，甲醇水溶液的溶质为甲醇。
[0030] 实施例1、林麝粪便中皮质醇的提取
[0031] I、雌性林麝粪便中皮质醇的提取
[0032] 选取四川米亚罗片仔癀林麝养殖场的6只雌性林麝，将其分别命名为雌性林麝 甲、雌性林麝乙、雌性林麝丙、雌性林麝丁、雌性林麝戊和雌性林麝己。
[0033] I. 1雌性林麝粪便的采集
[0034] 连续4天采集上述6只雌性林麝的新鲜粪便，每天每只雌性林麝采集一次，一次 3〇g。将每次采集的新鲜粪便放入自封袋（每只雌性林麝每次采集的粪便一个自封袋）中， 排除空气封口，分别得到雌性林麝甲第1天粪便、雌性林麝甲第2天粪便、雌性林麝甲第3 天粪便、雌性林麝甲第4天粪便、雌性林麝乙第1天粪便、雌性林麝乙第2天粪便、雌性林麝 乙第3天粪便、雌性林麝乙第4天粪便、雌性林麝丙第1天粪便、雌性林麝丙第2天粪便、雌 性林麝丙第3天粪便、雌性林麝丙第4天粪便、雌性林麝丁第1天粪便、雌性林麝丁第2天 粪便、雌性林麝丁第3天粪便、雌性林麝丁第4天粪便、雌性林麝戊第1天粪便、雌性林麝戊 第2天粪便、雌性林麝戊第3天粪便、雌性林麝戊第4天粪便、雌性林麝己第1天粪便、雌 性林麝己第2天粪便、雌性林麝己第3天粪便和雌性林麝己第4天粪便，将上述粪便分别 于-20°C冰箱冻存。
[0035] 1. 2提取液的配制
[0036] 配置体积浓度分别为100%、90%、80%、60%的甲醇水溶液（名称分别为100M、 90M、80M、60M)，体积比例如表1，配置体积浓度分别为100 %、90 %、80 %、60 %的乙醇水溶 液（名称分别为l〇〇E、90E、80E、60E)，体积比例如表2。
[0037] 表1、提取液的配方
【主权项】
1. 动物粪便中类固醇激素的提取方法，包括用提取液浸提所述动物粪便得到含有所述 类固醇激素的浸提液的步骤； 所述提取液为乙醇水溶液、甲醇水溶液、乙醇或甲醇； 所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为大于等于60%小于100% ; 所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比浓度为大于等于60%小于100%。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述类固醇激素为皮质醇、雌二醇和睾酮 中的全部或两种或一种。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述提取液为所述乙醇水溶液；所述 乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为大于等于80 %小于100%。
4. 根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述提取液为所述乙醇水溶液； 所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为90 %。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取液为所述甲醇水溶液；所述甲醇 水溶液中甲醇的体积百分比浓度为60 % -90 %。
6. 根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述动物为雌性动物；所述类固醇 激素为皮质醇；所述提取液为所述乙醇水溶液或所述甲醇；所述乙醇水溶液中乙醇的体积 百分比浓度为90%。
7. 根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述动物为雌性动物；所述类固醇 激素为雌二醇；所述提取液为所述乙醇或所述乙醇水溶液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积 百分比浓度为90%。
8. 根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述动物为雄性动物；所述类固醇 激素为皮质醇；所述提取液为所述乙醇水溶液或所述乙醇或所述甲醇水溶液；所述乙醇水 溶液中乙醇的体积百分比浓度为90%;所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比浓度为60%或 80%〇
9. 根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述动物为雄性动物；所述类固醇 激素为睾酮；所述提取液为所述乙醇水溶液或所述乙醇；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百 分比浓度为90%。
10. 根据权利要求1-9任一所述的方法，其特征在于：所述动物为林麝 (Moschusberezovskii)〇
【专利摘要】本发明公开了林麝粪便中类固醇激素的提取方法。本发明所提供的动物粪便中类固醇激素的提取方法，包括用提取液浸提所述动物粪便得到含有所述类固醇激素的浸提液的步骤；所述提取液为乙醇水溶液、甲醇水溶液、乙醇或甲醇；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为大于等于60％小于100％；所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比浓度为大于等于60％小于100％；所述类固醇激素为皮质醇、雌二醇和睾酮中的全部或两种或一种。实验证明，可以利用本发明的林麝粪便中类固醇激素的提取方法从林麝粪便中提取类固醇激素，最佳提取液为90E(体积百分比浓度为90％的乙醇水溶液)。
【IPC分类】C07J5-00, C07J1-00, C07J75-00
【公开号】CN104558084
【申请号】CN201510031151
【发明人】王毅花, 刘树强, 周俊彤, 葛兴芳, 胡德夫
【申请人】北京林业大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月21日