一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法

文档序号:8244158阅读:1449来源:国知局
一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制药,特别是一种从血浆中提取人血白蛋白提高得率的方法。
【背景技术】
[0002] 人血白蛋白是人体血液中最主要的一种功能性蛋白质,其主要的生理功能为调节 人体渗透压和新陈代谢中物质运输,在治疗因烧伤等原因引起了体液大量流失方面具有非 常重要的作用,此外,人血白蛋白还起着营养供给、运输及解毒和对其它血浆蛋白的胶体保 护和稳定的作用。
[0003] 目前世界上各血液制品生产厂家大多采用低温乙醇法生产人血白蛋白,此类技 术为低温乙醇分级沉淀技术,通过有效控制蛋白质沉淀的五个因素:PH值、温度、蛋白质浓 度、离子强度、乙醇浓度来逐级沉淀血浆中的不同蛋白质,一般分离人血白蛋白的步骤为先 从血浆中去除组分I,再去除组分11+111,然后去除组分IV,最后沉淀提取组分V即人血白 蛋白。在原材料血浆日益紧张的今天,尽管各个生产企业采取了各种方法提高收率,比如 合并血浆时冲洗各种与之接触的器皿;或用大量的平衡液冲洗滤板等等措施,从而降低各 个过程的损失提高收率,但这些措施仅是从减少损失的前提下进行的,而且操作麻烦,成本 高。因此,如何有效解决从血浆中提高回收人血白蛋白得率是本领域技术人员非常关心,需 要解决的技术问题。

【发明内容】

[0004] 针对上述情况,为克服现有技术之缺陷,本发明之目的就是提供一种从血浆中提 取人血白蛋白提高得率的方法,可有效解决既从血浆中提取回收人血白蛋白和提高得率的 问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是,该方法包括以下步骤:血浆的合并与融化、组分 I+II+III的制作和压滤、组分IV的制作和压滤、组分V的制作和压滤、组分V沉淀溶解过 滤、组分V(简称FV)精制纯化、超滤透析浓缩、配制、巴氏灭活、除菌灌装、孵放和检定,所述 的组分IV的制作和压滤,在制备的组分I+II+III上清液中按体积比加入1/10体积的(TC 生理盐水,用pH4. 0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5. 80?5. 90,加入-15°C以下的体积浓度 为95%乙醇,使最终乙醇体积浓度达到40%,其它步骤均与现有技术相同或相近似,由此可 知,本发明的创新之处核心在于组分IV的制作和压滤。
[0006] 本发明采用上述技术方案,首先由于在FI+II+III上清液中提高了溶液的Na+浓 度,增加人血白蛋白的溶解性;其次因降低溶液的蛋白含量,从而减少了人血白蛋白的共 沉,降低了损失,因此在人血白蛋白关键步骤组分IV制作中使得人血白蛋白收率得以大大 提高,再者将FI沉淀并入FII+III-块提取,减少了步骤,从而减少了一步损失,是生产工 艺更加流畅简洁,并且提高了人血白蛋白得率,经济和社会效益巨大。
【附图说明】
[0007] 图1为本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0008] 以下结合工艺流程图和实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0009] 由附图给出,本发明在实施中,是由以下步骤给出: (1) 、血浆的合并与融化:破袋后并入清洁的融浆罐内,开启融浆罐,搅拌及融浆温控 器,在水温< 35 °C,使融浆罐内血浆融化,温度保持在0 °C?4°C; (2) 、组分I+II+III的制作和压滤分离:计量合并后血浆体积,用pH4. 0醋酸缓冲液 调节混合血浆pH值6. 85?6. 95,打开循环冷却系统给血浆降温,待血浆降温至0°C后,加 入-15°C以下的95%(V/V)的乙醇;加入乙醇速度彡60L/h,使制品最终乙醇浓度达到20% (v/v),在加入乙醇过程中,温度始终不得高于(TC,最终血浆温度控制在-5. 0?-5. 5°C,乙 醇加完后继续搅拌2小时以上,保持溶液pH为6. 85?6. 95 ;再向每千升溶液中加入硅藻土 和珍珠岩各2?4kg,搅拌均匀(一般搅拌30分钟),在温度-4. 5°C?-5. 5°C、压力0. 20MPa 下压滤,用洁净压缩冷空气吹出压滤机中残留液体,再用20% (v/v)的乙醇组分I+II+III (又称FI+II+III)平衡液冲洗,冲洗液并入到滤液,得到组分I+II+III上清液; 20% (v/v)的乙醇组分I+II+III平衡液是由95% (v/v)的乙醇210L、枸橼酸钠3. 8Kg、NaCl4. 6Kg、加注射用水至1000L制成,用pH4. 0HAc-NaAc缓冲液调整平衡液pH为6. 85? 6. 95,平衡液温度-4. 5?-5. 5°C; (3) 、组分IV的制作和压滤分离:步骤(2)制备的组分I+II+III上清液中按体积比 加入1/10体积的(TC生理盐水,用pH4. 0醋酸缓冲液调整溶液pH值至5. 80?5. 90,加 入-15°C以下的95% (v/v)乙醇,使乙醇浓度达到体积比40% (v/v),加乙醇速度<80L/h, 在加入乙醇过程中温度控制在-2. (TC以下,边加乙醇边降温,使组分I+II+III上清液最终 温度控制在-5. 0?-5. 5°C,乙醇加毕继续搅拌2小时,保持pH为5. 80?5. 90 (否则应矫 正至此范围内);向每千升溶液中加入硅藻土和珍珠岩各2?4kg,搅拌30分钟后开始压滤, 压滤的过程中,工作压力控制在0. 2MPa之内,滤液温度控制在-4. 5°C?-5. 5°C,压滤后,用 洁净压缩冷空气吹出压滤机中残留液体,再用40%乙醇组分IV平衡液冲洗,冲洗液并入到 滤液中,得组分IV上清液(又称FIV上清液); 所述的40%乙醇组分IV平衡液是由95%乙醇溶液420L、枸橼酸钠3.OKg和NaCl4.OKg加注射用水至1000L制成,用pH4.OHAc-NaAc缓冲液调整平衡液pH5. 80?5. 90,温 度-4. 5。。?5. 5。。; (4) 组分FV制作与分离:步骤(3)制备的IV上清液用2mol/LHAc-40%乙醇(v/v)溶 液缓慢调整pH值为4. 75?4. 85,滴加时速度小于200ml/min,边加边降温,最终温度控制 在-8?-9°C,滴加完毕后继续搅拌1小时,保持pH为4. 75?4. 85 (否则应矫正至此范围 内),静置2小时以上压滤,压滤过程中,工作压力0. 20MPa,滤液温度控制在-5. (TC以下,压 滤后,用提前预冷的洁净压缩空气吹出压滤机内的残留液,收集沉淀,得组分V; 所述的40%乙醇(v/v)组分V平衡液是由95%乙醇(v/v)420L加注射用水至1000L搅 拌均匀制成,降温至-8?_9°C; (5) 组分V精制纯化: ①组分V沉淀用5倍体积(V/V)的8%乙醇(v/v)溶液搅拌溶解,沉淀完全溶解后,测量 组分V溶液pH为4. 50?4. 70,在温度-2. 5?-3. 5°C继续搅拌2?3小时,压滤; ②压滤:压滤过程中搅拌不停,压滤完后,用低温冷空气吹出滤器内液体,至出气泡后 停止,再用组分V平衡液冲洗滤板,冲洗液并入到过滤液中得到纯化液; 所述的组分V平衡液为质量浓度12%的乙醇溶液pH值4. 50?4. 70,降温 至-2. 5 ?-3. 5。。; (6) 超滤: ① 搅拌:用IM碳酸氢钠调整纯化液pH值至7. 0?7. 2 ; ② 将纯化液超滤浓缩至蛋白浓度100?150g/L,用5倍的9g/L的氯化钠溶液等体积透 析,再用3倍的注射用水透析得到白蛋白原液,将白蛋白原液超滤浓缩至蛋白质含量210g/ L以上,用注射用水洗涤超滤膜,收集洗膜液,并入上述白蛋白原液中即为人血白蛋白原液 (取样进行原液检测); (7) 半成品配制: 测定人血白蛋白原液中蛋白质含量,按每克蛋白质160毫摩尔称取辛酸钠,按每克蛋 白质120?130毫摩尔称取氯化钠,称取后用注射用水溶解,加入人血白蛋白原液,再将人 血白蛋白原液稀释至蛋白质浓度195?200g/L,用pH4. 0醋酸缓冲液或lmol/L碳酸氢钠调 整pH值6. 8?7. 0 ; (8) 巴氏灭活分装孵化: 将步骤(7)制备的蛋白质浓度195?20
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