一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种高分子药物载体领域，具体涉及一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖 材料及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 壳聚糖来源于天然的动物甲壳，结构和性质均十分接近天然的多糖，具有良好的 生物相容性、天然可降解性及对细胞无毒性，且易溶于酸性环境下的水溶液，因此成为研宄 的热门，尤其是作为药物控释载体而受到极大的重视。壳聚糖分子链中含有大量的活泼氨 基，可与多种亲电试剂进行反应，形成稳定的化学接枝，这种便于改性的特点进一步增强了 壳聚糖的实用性，其中利用配体对其进行共轭接枝从而与细胞表面受体形成特异性识别的 方法是目前靶向载药研宄领域的常用手段。已被较多研宄的生物素和叶酸作为上述配体种 类中的典型，在应用于壳聚糖抗癌药物载体的靶向改性中各自均能达到较佳的实验效果， 由二者之一修饰的壳聚糖纳米载体均在一定程度上对肝癌细胞构成主动革G向，并在载药的 情况下主要对病变组织产生药效，而基本上不会伤害正常细胞，但利用生物素与叶酸作为 双配体的研宄还未见报道。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的上述不足，提供一种合成周 期短、反应效率高的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料及其制备方法。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：
[0005] 提供一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料 以壳聚糖为载体，叶酸和生物素为配体，利用N-酰化反应制备叶酸/生物素修饰的壳聚糖 材料，其结构式如下：
[0006]
【主权项】
1. 一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于，所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖 材料以壳聚糖为载体，叶酸和生物素为配体，利用N-酰化反应制备叶酸/生物素修饰的壳 聚糖材料。
2. 根据权利要求1所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于：所述壳聚糖 分子量为20000-50000,脱乙酰度多85%。
3. 根据权利要求1所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料，其特征在于：所述叶酸/生 物素修饰的壳聚糖材料中叶酸和生物素的接枝率均多5%。
4. 一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料的制备方法，其特征在于步骤如下： 1) 制备壳聚糖溶液：将壳聚糖溶于醋酸溶液中，得到浓度为5-10mg/mL的壳聚糖溶液， 并调节pH值至4. 7-6.0,备用； 2) 制备琥珀酰亚胺基生物素酯：将DCC、NHS与生物素按摩尔比1. 2-1. 5:1:1混合后于 50-60°C条件下反应16-24h，过滤后在冰浴条件下向滤液中滴加乙醚析出沉淀，然后用异丙 醇对沉淀进行重结晶，过滤收集结晶并用DMF溶解结晶，过滤后逐滴加入无水乙醚中，冷藏 过夜，移走上清液，室温下真空干燥得到琥珀酰亚胺基生物素酯，备用； 3) 制备具有氨基反应活性的叶酸活性酯溶液：将叶酸溶于无水DMSO中，并加入EDC. HC1，在避光条件下于25-40°C磁力搅拌反应l_4h，得到叶酸活性酯溶液，浓度以叶酸质量 浓度计为26-44mg/mL，备用； 4) 将步骤2)所得琥珀酰亚胺基生物素酯溶于DMF中，得到浓度为20-34mg/mL的生物 素酯溶液，在磁力搅拌条件下，将生物素酯溶液缓慢加入步骤1)所得壳聚糖溶液中，在室 温条件下反应至反应液澄清，然后在搅拌条件下缓慢加入步骤3)所得叶酸活性酯溶液，在 室温下继续反应12-24h，反应结束后将反应液移入透析袋，于蒸馏水中透析3d，每6h换水 一次，透析后经冷冻干燥即得到叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料。
5. 根据权利要求4所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料的制备方法，其特征在于： 步骤3)所述叶酸与EDC. HCl的摩尔比为1:5-10。
6. 根据权利要求4所述的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料的制备方法，其特征在于： 步骤4)所述琥珀酰亚胺基生物素酯与壳聚糖的摩尔比为20-30:1 ;所述叶酸活性酯与壳聚 糖的摩尔比为20-30:1。
【专利摘要】本发明涉及一种叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料及其制备方法，所述叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料以壳聚糖为载体，叶酸和生物素为配体，利用N-酰化反应制备叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料。本发明通过先后加入活性生物素酯和活性叶酸酯与壳聚糖反应一次合成双配体修饰的壳聚糖材料，接枝率高，反应时间较两步法大大缩短，所制备的叶酸/生物素修饰的壳聚糖材料可用作一种靶向抗癌药物载体材料。
【IPC分类】A61K47-36, C08B37-08
【公开号】CN104558246
【申请号】CN201510027979
【发明人】王勇, 何法
【申请人】武汉理工大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2015年1月20日