一种易吸收的胶原蛋白肽的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及多肽领域，具体涉及了一种吸收性好的胶原蛋白肽。
【背景技术】
[0002] 胶原蛋白为动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广 的功能性蛋白，占蛋白质总量的25%?30%。与组织的形成、成熟、细胞间信息的传递， 以及关节润滑、伤口愈合、钙化作用、血液凝固和衰老等有着密切的关系，在医学材料、化妆 品、食品工业等均有着广泛应用。一般认为小分子量胶原蛋白有着更好的吸收效果，因此化 妆品中常用胶原蛋白肽，尤其是分子量低于1500的小分子胶原蛋白肽。
[0003] 胶原蛋白多从牛猪等牲畜皮及骨中提取，如中国专利CN103060406A公开了一种 牲畜骨中提取胶原蛋白的方法，由于一些宗教禁忌和牲畜传染病，近年来从鱼皮、鱼骨获取 胶原蛋白受到了人们的重视。同时，CN103060406A、CN1802982等现有专利文献公开的酶法 制备低分子量肽的方法，均采用的是复合酶法，但由于不同蛋白酶最适温度、最适PH和等 电点的不同，复合酶法不具备通用性，尤其对于胶原蛋白这类存在多个等电点的蛋白质而 言，选择合适的复合酶对其进行降解具有难度。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在克服现有技术中选材和酶法制备的不足，以罗非鱼骨作为胶原蛋白来 源，提高原料的安全性，避免宗教禁忌；通过三步酶法有效的避免胶原蛋白等电点造成的沉 淀反应，高效的获得低分子量胶原蛋白肽，该胶原蛋白肽易于吸收，可广泛应用于食品、药 品、化妆品和保健品中。
[0005] 具体而言，本发明提供了一种易吸收的胶原蛋白肽，所述胶原蛋白肽以罗非鱼骨 为原料，由包括以下步骤的方法制备而成：
[0006] 1)将罗非鱼骨粉碎成40?100目的颗粒后，加入由氯仿和乙醇混合而成的脱脂液 进行脱脂处理，干燥，得胶原粗蛋白；
[0007] 2)在步骤1)所得胶原粗蛋白中加入浓度为0. 3?0. 5%的盐酸溶液，再加入胃蛋 白酶，35?40°C下充分酶解后，得胃蛋白酶解液；
[0008] 3)将步骤2)所得胃蛋白酶解液的pH值调至6.0?6. 5,加入木瓜蛋白酶，52? 58 °C下反应3?5h，得木瓜蛋白酶解液；
[0009] 4)维持步骤3)所得木瓜蛋白酶解液的pH值不变，加入中性蛋白酶，47?53°C下 反应2?3h，得中性蛋白酶解液；升温至90?92°C使酶灭活,得酶解液；
[0010] 5)将步骤4)所得酶解液用0. 4?0. 5 μ m的滤膜抽滤，再用截留分子量量为4-5kD 的超滤膜超滤，所得滤液脱苦脱色，真空浓缩，喷雾干燥，即得胶原蛋白肽。
[0011] 本发明步骤1)中，所述脱脂液为体积比2:1的氯仿/乙醇；具体的，该步骤中，在 罗非鱼骨中加入质量体积比1 :1〇?20的脱脂液，450?550rpm/min条件下搅拌1?3h 后，去除有机溶剂，干燥，得胶原粗蛋白。
[0012] 本发明步骤2)中，所述盐酸溶液的加入量为步骤1)所述胶原粗蛋白20?25倍， 此处盐酸溶液的单位为体积ml，胶原粗蛋白的单位为质量g，优选为23倍，所述盐酸溶液的 质量百分比浓度为〇. 3?0. 5%，优选为0. 4%。
[0013] 本发明步骤2)中，所述胃蛋白酶的比活为2500?4000U/g，优选为3000U/g，胃蛋 白酶的加入量为罗非鱼骨质量的〇. 3?0. 5%，优选为0. 4%。
[0014] 本发明步骤3)中，所述木瓜蛋白酶的比活为400000?1200000U/g，优选为 1000000U/g，木瓜蛋白酶的加入量为罗非鱼骨质量的0. 5?1. 5%，优选为1% ;
[0015] 本发明步骤4)中，所述中性蛋白酶的比活为30000?60000U/g，优选为40000U/ g，中性蛋白酶的加入量为罗非鱼骨质量的0. 3?0. 5%，优选为0. 4%。
[0016] 本发明步骤5)中，所述脱苦脱色具体为：所得滤液中加入活性炭，室温低速搅拌 1?3h后，优选为2h，过滤除去活性炭。
[0017] 作为优选方案，本发明所述低分子量多肽由包括以下步骤的方法制备而成：
[0018] 1)将罗非鱼骨粉碎成80目的颗粒后，在罗非鱼骨中加入质量体积比1 :15的脱脂 液，所述脱脂液由体积比2 :1的氯仿/乙醇组成，500rpm/min条件下搅拌2h后，去除有机 溶剂，干燥，即得胶原粗蛋白；
[0019] 2)在步骤1)所得胶原粗蛋白中以质量体积比1 :23加入浓度为0.4%的盐酸溶 液，再加入比活为3000U/g的胃蛋白酶，所述胃蛋白酶的加入量为罗非鱼骨质量的0. 4%， 37 °C下充分酶解后，得胃蛋白酶解液；
[0020] 3)将步骤2)所得胃蛋白酶解液的pH值调至6. 2,加入比活为1000000U/g木瓜蛋 白酶，木瓜蛋白酶的加入量为罗非鱼骨质量的1%，55°C下反应4h，得木瓜蛋白酶解液；
[0021] 4)维持步骤3)所得木瓜蛋白酶解液的pH值不变，加入比活为40000U/g中性蛋白 酶，中性蛋白酶的加入量为罗非鱼骨质量的0. 4%，50°C下反应2. 5h，得中性蛋白酶解液； 升温至91°C使酶灭活，得酶解液；
[0022] 5)将步骤4)所得酶解液用0. 44 μ m的滤膜抽滤，再用截留分子量量为5kD的超滤 膜超滤，所得滤液脱苦脱色，真空浓缩，喷雾干燥，即得胶原蛋白肽。
[0023] 为了保证制备得到的胶原蛋白肽的活性，除了酶解反应对温度的特别要求外，本 发明各个步骤的操作温度均优选为〇?4°C。
[0024] 本发明进一步保护所述胶原蛋白肽在制备化妆品、食品、保健品、药品中的应用。
[0025] 与现有技术相比，本发明提供的技术方案可以取得显著的效果。本发明克服现有 技术中选材和酶法制备的不足，以罗非鱼骨作为胶原蛋白来源，提高原料的安全性；通过三 步酶法有效的避免胶原蛋白等电点造成的沉淀反应，高效的获得低分子量的胶原蛋白肽， 该胶原蛋白肽易于吸收，可广泛应用于食品、药品、化妆品和保健品中。
【具体实施方式】
[0026] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0027] 实施例1
[0028] 胶原蛋白肽按照以下步骤制备而成：
[0029] 1)将Ikg罗非鱼骨粉碎成80目的颗粒后，在罗非鱼骨中加入10L由体积比2 :1的 氯仿/乙醇组成的脱脂液，在500rpm/min条件下搅拌2h后，去除有机溶剂，干燥，即得胶原 粗蛋白；
[0030] 2)在步骤1)所得胶原粗蛋白中以质量体积比I :23加入浓度为0.4%的盐酸溶 液，再加入4g比活为3000U/g的胃蛋白酶，37°C下充分酶解后，得胃蛋白酶解液；
[0031] 3)将步骤2)所得胃蛋白酶解液的pH值调至6. 2,加入IOg比活为1000000U/g木 瓜蛋白酶，55°C下反应4h，得木瓜蛋白酶解液；
[0032] 4)维持步骤3)所得木瓜蛋白酶解液的pH值不变，加入4g比活为40000U/g中性 蛋白酶，50°C下反应2. 5h，得中性蛋白酶解液；升温至91°C使酶灭活,得酶解液；
[0033] 5)将步骤4)所得酶解液用0. 44 μ m的滤膜抽滤，再用截留分子量量为5kD的超滤 膜超滤，所得滤液脱苦脱色，真空浓缩，喷雾干燥，即得胶原蛋白肽。
[0034] 实施例2
[0035] 胶原蛋白肽按照以下步骤制备而成：
[0036] 1)将Ikg罗非鱼骨粉碎成40目的颗粒后，在罗非鱼骨中加入15L由体积比2 :1的 氯仿/乙醇组成的脱脂液，在450rpm/min条件下搅拌Ih后，去除有机溶剂，干燥，即得胶原 粗蛋白；
[0037] 2)在步骤1)所得胶原粗蛋白中以质量体积比1 :20加入浓度为0. 3 %的盐酸溶 液，再加入3g比活为2500U/g的胃蛋白酶，35°C下充分酶解后，得胃蛋白酶解液；
[0038] 3)将步骤2)所得胃蛋白酶解液的pH值调至6. 0,加入5g比活为400000U/g的木 瓜蛋白酶，52°C下反应3h，得木瓜蛋白酶解液；
[0039] 4)维持步骤3)所得木瓜蛋白酶解液的pH值不变，加入3g比活为30000U/g中性 蛋白酶，47°C下反应2h，得中性蛋白酶解液；升温至90°C使酶灭活,得酶解液；
[0040] 5)将步骤4)所得酶解液用0. 40 μ m的滤膜抽滤，再用截留分子量量为4kD的超滤 膜超滤，所得滤液脱苦脱色，真空浓缩，喷雾干燥，即得胶原蛋白肽。<