一种石斛红曲制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及发酵领域，具体而言，涉及一种石斛红曲制备方法。
【背景技术】
[0002] 健康长寿是人类共同的愿望，也是医学和生命科学研宄的永恒主题。现代医学研 宄表明：活性氧自由基不仅会使人体内的脂质与蛋白质发生链式氧化反应导致细胞膜、组 织、酶和基因受损，对肌体造成了损害和衰老，而且会促使有关的基因突变，诱发相关的疾 病（如早衰、关节炎、局部缺血与再灌注损伤、老年痴呆及癌症等）。因此，清除自由基的抗 氧化药物在抗衰老和防治多种相关疾病中具有重要的作用。近时以来，抗氧化作用的研宄 发展到一个非常的高度，许多文章、鉴定和研宄报告层出不穷。
[0003] 结合中草药源性和微生物源性抗氧化物质的特点，利用微生物转化中药活性成 分，微生物转化的本质是利用微生物生长代谢过程中产生的酶对特定底物进行结构修饰的 化学反应，利用微生物发酵炮制中药的过程实际上就是一种生物转化反应，中药成分的生 物转化是研宄开发新药的重要方面。微生物在生长过程中可以分泌几十种胞外酶于培养基 中，其生命活动所产生的胞内酶更是成百上千，这些丰富而强大的酶系就可能成为中药发 生化学反应的物质基础。由于微生物具有种类繁多、繁殖快等特点，所以微生物转化常被用 来对天然产物的结构进行修饰，以获得一些结构更合理或活性更好的先导化合物。其优点 可概括为：1)保护中药活性成分免遭破坏，使药物的有效组分、活性物质最大限度地得以 提取、利用；2)提高中药药性，降低药物的毒副作用；3)所优选的有益菌种本身能补充或增 强原有药物的功能；4)产生新的活性物质；5)为中药活性成分结构修饰提供新途径；6)节 省药材资源，保护环境；7)是实现中药现代化、具有高科技水平的又一新技术，生产工艺可 控，所得产物精确，制剂方便，便于与国际接轨。
[0004] 石斛作为传统珍稀名贵中药，石斛在临床上广泛用于慢性萎缩性胃炎及降血糖、 抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等多种疾病，而这些疾病的产生在很大程度上都与体内活 性氧的代谢失调有关，目前有研宄表明联苄类和酚酸类成分具有抗氧化活性。同时，有研宄 报道红曲霉次级代谢产物中的Dimerumic acid、酷类、色素、黄酮、dihydromonacolin-MV、 他汀类、类黄酮等都具有较好的抗氧化作用。特别是Dimerumic acid，在较低的浓度就表现 出很强的抗氧化活性。所以红曲霉无论直接食用还是作为添加剂，都可以为人体提供抗氧 化物质，减少氧化损伤。
[0005] 红曲霉不但自身丰富的代谢产物具有很高的药用价值，而且它丰富的酶系对中草 药活性成分的转化与修饰存在巨大的潜力，是双向发酵体系用菌种的良好选择，石斛作为 传统珍稀名贵中药，石斛在临床上广泛用于慢性萎缩性胃炎及降血糖、抗肿瘤、抗衰老、增 强机体免疫力等多种疾病，而这些疾病的产生在很大程度上都与体内活性氧的代谢失调有 关，目前有研宄表明联苄类和酚酸类成分具有抗氧化活性。
[0006] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种石斛红曲制备方法，金钗石斛与红曲霉互相影响，协 同增效，达到预料不到的抗氧化效果。
[0008] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0009] -种石斛红曲制备方法，将红曲霉在添加有金钗石斛的培养基培养，得到的培养 产物即为石斛红曲。
[0010] 本发明提供的石斛红曲制备方法，结合中草药和微生物源性生成抗氧化活性物质 的共同特点，利用抗氧化作用疗效确切的金钗石斛与已有研宄报道具有生成抗氧化性物质 的红曲霉进行共同发酵培养，在红曲霉代谢转化金钗石斛的同时，金钗石斛也对红曲霉的 代谢流产生影响，两者产生互补及增效的作用，得到的石斛红曲达到了非常显著的抗氧化 效果，这种效果是单纯利用红曲霉发酵或金钗石斛无法达到的。
[0011] 其中，红曲霉为市售菌株。
[0012] 进一步地，所述红曲霉在添加有金钗石斛的培养基培养前，先将红曲霉菌株培养 成发酵种子液，将所述发酵种子液接种于添加有金钗石斛的培养基培养。先将红曲霉制成 发酵种子液，此时菌体的浓度为，得到的种子液中菌体数量大，菌体生长旺盛，利于下一步 的发酵培养。
[0013] 具体地，每升添加有金钗石斛的培养基含有以下成分：20-50g米粉，由金钗石斛 制成的金钗石斛汁，蛋白胨9-llg，加水定容。本发明提供的添加有金钗石斛的培养基营养 成分全面，红曲霉能很好的生长，并且红曲霉能很好的转化利用培养基中的金钗石斛，红曲 霉与金钗石斛两者相互作用，得到的石斛红曲抗氧化能力大大增强。
[0014] 进一步地，所述由金钗石斛制成的金钗石斛汁为：由50-60g新鲜金钗石斛或4-5g 干的金钗石斛制成的金钗石斛汁。每升培养基添加该含量的金钗石斛，很好的满足了红曲 霉与金钗石斛两者之间的相互作用，得到的斛红曲抗氧化能力大大增强。
[0015] 进一步地，所述金钗石斛汁由以下方法制备：称取50-60g新鲜或4-5g干的金钗石 斛，加水250-400ml，打成混合浆液即得。该方法易于制得金钗石斛汁，并且其中的成分分布 更为均匀。
[0016] 优选地，所述发酵种子液按体积百分比为8% -11%进行接种于添加有金钗石斛 的培养基培养。以该百分比的接种量进行接种，既利于红曲霉在添加有金钗石斛的培养基 快速扩增，并很好的转化金钗石斛的成分，获得的石斛红曲抗氧化成分含量高，且活性强。
[0017] 进一步地，所述发酵种子液由以下方法制备：
[0018] 将浓度为3X 106-7X 106cfu的红曲霉孢子悬液按体积百分比为6-10%接种于种 子培养基，30°C ± 1，180-250r/min振荡培养72-80h，制备得到发酵种子液；
[0019] 每升所述种子培养基包括以下成分：麦芽糖4-6g，蛋白胨9-llg，酵母膏4-6g，葡 萄糖19-21g，加水定容。
[0020] 制得的发酵种子液的0D600值达到0. 7-0. 9,菌体生长旺盛，利于下一步的发酵培 养。
[0021] 优选地，所述孢子悬液在制备前先进行活化；
[0022] 所述活化优选为：将保存的红曲霉菌种转接斜面培养基，30°C ±1培养4-6d取 出；
[0023] 再将培养好的斜面菌种转接斜面培养基，30°C ± 1培养7-8d，即可。
[0024] 菌种在培养前先进行活化，以增强菌体的活力。
[0025] 进一步地，每升所述斜面培养基包括以下成分：麦芽糖4_6g，蛋白胨9-llg，酵母 膏4_6g，琼脂19_21g，葡萄糖19_21g，加水定容。该斜面培养基使红曲霉菌种很好的生长， 得到的菌株活力高。
[0026] 优选地，所述将红曲霉在添加有金钗石斛的培养基培养的条件具体为：
[0027] 30°C ±l°C，180-210rmp 振荡培养 3-4d ;然后 27°C ±1°C静止培养 4-6d 发酵终止。
[0028] 先对红曲霉进行振荡培养，以使红曲霉快速扩增，并将金钗石斛的有效成分进行 吸收转化；然后静止一段时间，以使活性物质累积。培养得到的石斛红曲为半固体到固体 状，颜色粉红到深红色，抗氧化成分含量高，且抗氧化活性高。
[0029] 将发酵产物从摇瓶中取出，30-50°C烘干，磨粉至80-200目即得石斛红曲产品。
[0030] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0031] (1)本发明利用抗氧化作用疗效确切的金钗石斛与红曲霉进行共同发酵培养，红 曲霉代谢转化金钗石斛的同时，金钗石斛也对红曲霉的代谢流产生影响，两者产生互补及 增效的作用，得到的石斛红曲达到了非常显著的抗氧化效果；
[0032] (2)本发明还提供了特定成分含量的添加有金钗石斛的培养基，红曲霉能很好的 生长，并且红曲霉能很好的转化利用培养基中的金钗石斛，红曲霉与金钗石斛两者相互作 用，得到的石斛红曲抗氧化能力大大增强；
[0033] (3)本发明还提供的金钗石斛汁的制备方法，该方法易于制得金钗石斛汁，并且其 中的成分分布更为均匀；
[0034] (4)本发明还限定了发酵的接种量以及发酵培养的条件，其中，发酵培养采用对红 曲霉进行振荡培养，以使红曲霉快速扩增，并将金钗石斛的有效成分进行吸收转化；然后静 止一段时间，以使活性物质累积，培养得到的石斛红曲为半固体到固体状，颜色粉红到深红 色，抗氧化成分含量高，且抗氧化活性高。
【附图说明】
[0035] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0036] 图1为本发明实验例2中多酚含量标准曲线图；
[0037] 图2为本发明实验例3中生物碱含量标准曲线图。
【具体实施方式】
[0038] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售获得的常规产品。
[0039] 实施例1
[0040] 1. 1培养基的制备
[0041](1)、斜面培养基：麦芽糖4g，蛋白胨9g，酵母膏4g，琼脂21g，葡萄糖21g，水 1000ml，pH自然。121°C灭菌20min，冷却待用。
[0042] (2)、种子培养基：麦芽糖4g，蛋白胨9g，酵母膏4g，葡萄糖21g，加水定容至 1000ml，pH自然。121°C灭菌20min，冷却待用。
[0043] (3)、发酵培养基
[0044] 添加有金钗石斛的培养基：50g米粉，金钗石斛汁（称取50g新鲜金钗石斛，加 300ml水，打浆机打成混合浆液），蛋白胨9g，加水定容至1000ml，121°C灭菌20min，冷却待 用。
[0045] 不添加金钗石斛的发酵培养基：50g米粉，蛋白胨9g，加水定容至1000ml，121 °C灭 菌20min，冷却待用。
[0046] 1. 2发酵培养工艺
[0047] 1. 2. 1菌种活化
[0048] 本发明所用红曲霉为红曲霉（Monascus anka)菌株3. 4577,购自中国普通微生 物菌种保藏中心；红曲霉也可购买自其它厂家。将保存的红曲霉菌种转接斜面培养基， 30°C ± 1培养4d取出；再