海水中的活菌检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及海水检测技术领域，特别涉及海水中的活菌检测方法。
【背景技术】
[0002]我国是海水养殖大国，随着养殖规模的不断扩大，病害发生日益严重，使我国的海水养殖业难以保持健康、持续的发展势头。
[0003]在传统的细菌分类学中，要鉴定不同菌株或种的大量特征，然后再用这些特征对细菌进行分类。广泛应用的有价值的分类特征如下:形态学、革兰氏反应、营养型类(光能自养、光能异养、化能自养、化能异养)、细胞壁化学、细胞内含物及忙存产物的存在与否、荚膜化学、色素、营养要求、利用各种碳源、氮源和硫源的能力、发酵产物、氧的需求、温度和PH要求(和耐受性)、盐度的要求(和耐受性)、对抗生素的敏感性、致病性、共生关系、免疫特征和生境等。常利用双歧法并检测几种表型特征，就有可能从众多考虑的细菌中逐个排除，直到未知细菌被正确鉴定出来。
[0004]由于海水富含电解质，浓度为生理盐水的2倍以上，海水中菌群的结构和耐药性均有别于陆地上普通环境中的细菌，近海岸海水易受人类生活污水污染，对于海水中细菌的检测具有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明的为了提高近海岸活菌检测效率，提供海水中的活菌检测方法，其特征在于，包括利用16S rDNA技术分析多样性并对放线菌进行初步的菌种鉴定，对分离过程中得到的新菌株进行生理生化以及化学指标的系统鉴定，确立其新种地位，对研究中分离得到的菌株进行生物活性和胞外酶活性筛选。
[0006]所述检测方法还包括样品采集，无菌采集近海岸30-50cm处沉积物，无菌冷冻存放。
[0007]所述检测方法还包括样品预处理，将样品平铺于无菌培养皿内，真空干燥约24h，磨细成粉末，稀释后做分离；将样品在55°C水浴中加热6min ;将样品平铺于无菌培养皿内，在120°C干燥箱中加热lh，分别将预处理后沉积物样品稀释，在纯海水配置的培养基上进行放线菌的分离。
[0008]所述培养基为葡萄糖10g，天东氨酸0.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸铁0.05g,琼脂20g，蒸馏水 1L，ρΗ7.2-7.4，混合煮沸，120°C灭菌 40min。
[0009]本发明针对近海岸活菌的多样性提出检测方法，在检测多种现有菌种的同时还可区别标记新菌种。
【具体实施方式】
[0010]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0011]实施例1
[0012]海水中的活菌检测方法，其特征在于，包括利用16S rDNA技术分析多样性并对放线菌进行初步的菌种鉴定，对分离过程中得到的新菌株进行生理生化以及化学指标的系统鉴定，确立其新种地位，对研究中分离得到的菌株进行生物活性和胞外酶活性筛选。样品采集，无菌采集近海岸30-50cm处沉积物，无菌冷冻存放。样品预处理，将样品平铺于无菌培养皿内，真空干燥约24h，磨细成粉末，稀释后做分离；将样品在55°C水浴中加热6min ;将样品平铺于无菌培养皿内，在120°C干燥箱中加热lh，分别将预处理后沉积物样品稀释，在纯海水配置的培养基上进行放线菌的分离。所述培养基为葡萄糖10g，天东氨酸0.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸铁0.05g，琼脂20g，蒸馏水1L，ρΗ7.2-7.4，混合煮沸，120°C灭菌40min。
【主权项】
1.海水中的活菌检测方法，其特征在于，包括利用16SrDNA技术分析多样性并对放线菌进行初步的菌种鉴定，对分离过程中得到的新菌株进行生理生化以及化学指标的系统鉴定，确立其新种地位，对研究中分离得到的菌株进行生物活性和胞外酶活性筛选。
2.根据权利要求1所述的海水中的活菌检测方法，其特征在于所述检测方法还包括样品采集，无菌采集近海岸30-50cm处沉积物，无菌冷冻存放。
3.根据权利要求1所述的海水中的活菌检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括样品预处理，将样品平铺于无菌培养皿内，真空干燥约24h，磨细成粉末，稀释后做分离；将样品在55°C水浴中加热6min ;将样品平铺于无菌培养皿内，在120°C干燥箱中加热lh，分别将预处理后沉积物样品稀释，在纯海水配置的培养基上进行放线菌的分离。
4.根据权利要求1所述的海水中的活菌检测方法，其特征在于，所述培养基为葡萄糖1g,天东氨酸0.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸铁0.05g,琼脂20g,蒸馏水1L，ρΗ7.2-7.4，混合煮沸，120°C灭菌40min。
【专利摘要】海水中的活菌检测方法，其特征在于，包括利用16S rDNA技术分析多样性并对放线菌进行初步的菌种鉴定，对分离过程中得到的新菌株进行生理生化以及化学指标的系统鉴定，确立其新种地位，对研究中分离得到的菌株进行生物活性和胞外酶活性筛选。本发明针对近海岸活菌的多样性提出检测方法，在检测多种现有菌种的同时还可区别标记新菌种。
【IPC分类】C12Q1-68, C12Q1-04
【公开号】CN104593482
【申请号】CN201310533173
【发明人】关杰, 关宇, 江美玲, 曹卉, 王清
【申请人】大连大公环境检测有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年10月31日