一种葡萄果中原花青素提取物的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物美容领域，具体涉及一种葡萄果中原花青素提取物的制备方法及 应用。
【背景技术】
[0002] 葡萄，又称提子，是葡萄属的一种常见落叶木质藤本植物，是浆果类水果中营养价 值极高的一种水果类物质，原产于亚洲西部地区。《神农本草经》中载文称，葡萄具有"久食， 亲身不老延年"的功效，葡萄是一种具有抗贫血、抗炎和美容养颜功效的水果。葡萄中含有 的花青素等多酚类化学成份，这些成分具有突出的抗氧化性，能够消除人体自由基，抑制体 内脂质过氧化，达到增强皮肤免疫力、防止紫外线、美白、祛斑及减少皱纹、收敛毛孔和保湿 的效果。目前现有的专利和技术的关注点都集中在葡萄籽中原花青素的提取，而葡萄皮和 葡萄果肉以及葡萄籽中都有原花青素类物质的存在，而实际上葡萄皮和葡萄果实中的原花 青素含量也不低，但由于葡萄果通常用来酿酒，该部分的原花青素基本被废弃，实际上原花 青素的含量和价值不亚于酿酒。
[0003] 目前针对原花青素的提取方法中主要有：一、水溶液浸泡法，在水溶液中利用加热 浸泡，然后用非极性大孔树脂吸附，用乙醇洗脱、浓缩得到粗提物，粗提物蒸干得到粉末状 结晶。然而本方法提取得到的产品纯度较低，回收率也较低，其使用受到一定的限制。二、 有机溶剂萃取法，根据相似相溶原理，选用水、乙醇、乙酸乙酯和丙酮等萃取剂进行提取。然 而本方法分离过程的工艺流程复杂，操作时间长，对化学结构相似的化合物分离纯化能力 有限，而且使用的溶剂种类多、用量大，容易对环境造成污染。三、微波辅助提取法，根据物 质组分不同的微波吸收能力差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选 择性加热，从而使得萃取物质从基质活体系中分离，计入介电常数较小、微波吸收能力相对 较差的萃取液中。四、超临界流体萃取法，利用超临界流体作为萃取剂液体和固体中提取某 些成分，达到分离和提纯的目的。然而本方法需要特定的设备，设备运行及维护成本较高， 而且对不同成分的提取率有着很大的差异。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供葡萄果中原花青素提取物的制备方 法，该方法能够高效地提取葡萄果中原花青素，并应用于抗衰老美容化妆品中。
[0005] 本发明的目的通过以下技术方案来实现：
[0006] -种葡萄果中原花青素提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0007] (1)准备葡萄皮和葡萄果肉：将葡萄果剔除葡萄籽得到葡萄皮和葡萄果肉；
[0008] 葡萄籽自身带有一层外壳保护结构，在提取原花青素的过程中需要去除该部分结 构，在去除的过程中可能导致部分原花青素损失，因此工艺相对复杂，不仅需要相应的设 备，而且在去壳的过程有引进杂质的风险，而葡萄果实和葡萄皮由于自身结构不同，不存在 该问题，因此原材料的初步处理工艺上不同，只需要进行一步的溶剂萃取，无需进行二次溶 剂萃取，而且减少了萃取剂的应用就降低了引进杂质的风险。
[0009] (2)萃取原花青素：按体积比为（0. 5-2) : (0. 5-2) : (0. 5-2)配置甲醇、乙醇和水溶 液成混合溶液，将混合溶液与步骤（1)准备的葡萄皮和葡萄果肉混合，反应12-36小时；
[0010] 本发明采用甲醇、乙醇和水的混合溶液来萃取原花青素，且为了更好的提高提取 效率，甲醇、乙醇和水体积比为（〇. 5-2) : (0. 5-2) : (0. 5-2)，该比例的混合溶液对提取葡萄 果实中的原花青素更加有效。
[0011] 乙醇作为一种无毒萃取剂，在工业应用上范围较广，但是乙醇对原花青素的提取 率相对没有甲醇等物质高，因此将甲醇和乙醇及水等混合一起既可以提高萃取率时又能降 低甲醇的残留，同时又能够降低可能残留的甲醇对人体带来的毒副作用；经实验证明最佳 比例为1 :1，而现有对比技术中的其溶剂的成份较为复杂，容易引进杂质，而且其成份中醚 类及烷烃类分子量较大，在萃取时会降低原花青素的萃取率。而且本发明跟现有技术相比 不需要进行二次萃取，因此在溶剂成份和比例上，包括萃取效果和萃取次数上都相对现有 技术更具优势。
[0012] (3)步骤⑵反应后，将反应物进行固液分离得到提取液，在 (-0. 30MPa)-(-0. 05MPa)的条件下，对提取液用水冻溶，并浓缩；
[0013] 在负压情况下，会产生强烈的空化效应和机械震动，造成葡萄细胞壁快速破碎，加 速胞内物质的向介质释放、扩散和溶解，促进提取的过程，达到较好的提取效率。随着负压 的增加，葡萄果实细胞和葡萄皮中的原花青素的提取率会有增加，但是随着负压达到一定 的临界值后就会开始下降，所以要选择一个最佳的负压值。而冻溶是因为在低温情况下，细 胞的一些生物活性能够得到保存，包括原花青素的生物化学结构能够更加的稳定，同时提 取率更加的高。
[0014] 本发明采用负压低温冻溶法结合非持续微波法提取葡萄中的原花青素。本发明在 (-0. 30MPa)-(-0. 05MPa)的条件下，对提取液用小于等于0°C;这种非持续性的微波处理能 够尽量降低葡萄果实和葡萄皮中细胞的细胞膜破碎速度，降低提取样品引入杂质的几率， 再结合反应液的温度，提高提取效率。
[0015] (4)微波提取原花青素：在400-650W微波条件下对提取液处理6-15min，离心；
[0016] (5)浓缩：将步骤⑷离心后的上清液进行浓缩，得到浓缩的原花青素提取液。
[0017] 优选的，步骤（1)中将所述葡萄皮和葡萄果肉捣碎。
[0018] 优选的，步骤（2)中所述甲醇、乙醇和水的体积比为1:1:1，所述混合溶液与步骤 (1)准备的葡萄皮和葡萄果肉混合后反应24小时。
[0019] 优选的，步骤（3)中将所述固液分离得到提取液在_〇.lOMPa下用0°C以下的水冻 溶；所述步骤（4)中在550W微波条件下对所述提取液处理。
[0020] 优选的，步骤（4)中对所述提取液处理采用进行短时间多次微波处理方式，每次 微波时间为〇. 3-0. 8S，时间间隔为0. 3-0. 8S。
[0021] 优选的，步骤（4)中每次微波时间为0. 5S，时间间隔为0. 5S，提取液温度超过设 定的报警温度40-50°C则反应停止；所述微波处理过的提取液在2000-4000r/min下离心 5-20min。这种非持续性的微波处理能够尽量降低葡萄果实和葡萄皮中细胞的细胞膜破碎 速度，降低提取样品引入杂质的几率，再结合反应液的温度，在超过一定设定温度的情况 下，可提前结束微波处理，因为较高的温度会破坏原花青素的化学结构，故要设置一定的温 度，提前停止是因为在该温度下细胞膜的通透性已经很大，再高的温度可能会让细胞膜通 透性活性完全死亡，释放大量的其它杂质类物质，增加了分离提取的难度。
[0022] 本发明还提供了所述方法制得的葡萄果中原花青素提取物制成原花青素冻干粉 的方法，包括以下步骤：
[0023] (1)过滤：收集浓缩的原花青素提取液，用孔径小于0. 45yM的滤膜过滤；
[0024] (2)浓缩：浓缩上清液；
[0025] (3)过滤：将浓缩的上清液采用孔径小于0.22yM的滤膜过滤；
[0026] (4)冻干处理：冻干温度为（_20°C)-(_35°C)，真空度为50_200Pa，冻干时间为 24-36小时，即得到原花青素冻干粉。
[0027] 本发明提供了所述方法制得的原花青素冻干粉在抗衰老护肤品中应用。本发明 将去籽后葡萄皮和葡萄果实中的原花青素化合物应用于抗衰老美容行业中，如面膜等化妆 品，能够达到保持面部肌肤弹性、去皱等效果，同时也可以将其应用在保健品中。
[0028] 优选的，所述抗衰老护肤品为面膜、爽肤水、面霜、乳液、眼霜、洗面乳。
[0029] 优选的，所述原花青素冻干粉在抗衰老护肤品中的添加量为1-1000Ug/ml。
【具体实施方式】
[0030] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。
[0031] 实施例1
[0032] 1.葡萄皮和葡萄果肉的准备
[0033]1)选取新鲜的葡萄（在市场上采购即可），用自来水清洗干净后再用去离子水清 洗一遍，然后剔除葡萄中的葡萄籽。
[0034] 2)将剔除葡萄籽的葡萄果放在不锈钢容器中，然后用器械尽可能地捣碎彻底。
[0035] 2?加入混合有机溶剂萃取原花青素
[0036] 1)按照体积比为1 :1 :1的比例加入甲醇、乙醇和水溶液，充分搅拌混匀有机溶剂 和捣碎后的去籽葡萄。
[0037] 2)静置24小时后处理。
[0038] 3?负压冻溶
[0039]1)静置结束后对其进行抽滤处理，进行固液分离。
[0040] 2)在-0. 10mPa的负压条件下，用0°C冷水冻溶，蒸发回收甲醇及乙