一株对星天牛幼虫具有高致病力的球孢白僵菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于害虫生物防治领域，设及一株球抱白僵菌及其应用，具体设及一株对 星天牛幼虫具有高致病力的球抱白僵菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 星天牛（Anoplo地ora chinensis Forster)，属銷翅目（Coleoptera)天牛科 (Cerambycidae)，寄主范围广泛，达26科40属超过100种植物，不仅可W危害阔叶树，甚至 还可危害日本柳杉化yptomeria japonica等针叶树，W幼虫蛙食近地的主干或主根，破坏 树体养分和水分的运输，W致树势衰弱，重者整株枯死，是重要的林木蛙干害虫；在我国巧 橘产区W及林业、绿化树种上，星天牛危害十分严重，给林业生产带来了巨大的损失。同时， 星天牛也是东南沿海防护林主要树种--木麻黄（Casuarina spp.)的主要蛙干害虫，在发 生严重的林分中虫株率达50% W上，严重影响了沿海防护林的防护效益。
[0003] 星天牛幼虫蛙入树干木质部中，生活隐蔽，防治困难。传统的化学药剂难W到 达危害部位导致防治效果不理想，且大量使用化学农药带来对环境的影响，已经日益受 到人们的关注。生物防治是害虫防治的有效方法之一，也是防治害虫的方向。前人利用 线虫 Steinernema spp.、川硬皮月中月退蜂 Scleroderma sichuanensis、白僵菌 Beauveria b a s s i an a粘膏防治星天牛幼虫，均取得了 一定的效果。
[0004] 球抱白僵菌Beauveria bassiana炬als.)化ill是应用最为广泛的杀虫真菌之 一，因其具有致病力强、不污染环境、能有效地在林间宿存和流行等特点，已在多种农林害 虫生物防治中取得了明显成效，也被认为是在蛙干害虫生物防治中最为有效的资源之一。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一株球抱白僵菌及其应用，具体为一株对星天牛幼虫具有高 致病力的球抱白僵菌菌株及其应用。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一株球抱白僵菌，命名为球抱白僵菌（Beauveria bassiana ) FJBb201023,已于2014 年10月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（化ina General Microbiological Qilture Collection Center, CGMCC)，地址；北京市朝阳区北辰西路 1 号院3号；保藏编号；CGMCC No. 9851。
[0007] 该球抱白僵菌（Beauveria bassiana) FJBb201023 具有 W下特征： 在PPDA培养基上25 + 1 °C下生长5天，菌落直径19mm，15天达62mm。菌落白色至 乳白色初为疏茸状或棉絮状，后期形成乳粉状的抱子层，抱子层厚且均匀，中屯、凸起。菌 丝分枝，有格，无色光滑，有时成簇生长；产抱细胞(瓶梗）浓密簇生于短而膨大的柄细胞 上，瓶形，产抱细胞上部"之"字形，顶端变细长。分生抱子为近球形，单细胞，透明，光滑， 1. 8-2. 8X2-2. 7 ym。最佳生长温度为23~28°C。
[000引本发明所要解决的另一个技术问题是提供用于防治星天牛幼虫的菌剂。
[0009] 本发明所提供的菌剂具体为抱子悬浮液。其中抱子悬浮液的浓度为1〇7抱子/ml。
[0010] 本发明所提供的菌剂的有效成分是上述球抱白僵菌（Beauveria bassiana ) FJBb201023的分生抱子。
[0011] 本发明所提供的或所述菌剂可用于防治星天牛幼虫。
[0012] 本发明提供的球抱白僵菌（Beauveria bassiana) FJBb201023具有如下有益效 果： 生产形状好，产抱能力强，同时对星天牛幼虫的致病力强，采用浓度为1〇7抱子/ml的 抱子悬浮液浸溃法接种LTg。为5.6 d，感染率为90.0%。利用该菌株生产的菌剂用于防治， 能显著降低星天牛幼虫林间种群数量。同时该菌株能在林间中长期宿存，具有较强的二次 侵染能力，适合在星天牛发生林分中应用。
[0013] 本发明的优点在于；本发明提供了一株对星天牛幼虫具有高致病力的球抱白僵菌 菌株及菌剂，为生产上星天牛幼虫防治提供了生物防治资源。同时，白僵菌生物防治具有持 效期长、高效、对环境友好等特点，利用白僵菌防治星天牛幼虫，解决了 W往星天牛采用化 学防治时产生的环境污染、农药残留等问题。本发明具有良好的应用前景。
【附图说明】
[0014] 图1为FJBb201023菌株在PPDA培养基上25±rC下培养15天的菌落形态图。
[0015] 图2为星天牛幼虫被球抱白僵菌（Beauveria bassiana )FJBb201023感染状。
【具体实施方式】
[0016] W下结合具体实施例，对本发明的【具体实施方式】进行详细描述，该些实施例用于 理解而不是限制本发明的范围。
[0017] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0018] 下述实施例中所用的试剂、材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0019] 下述实施例中的PPDA培养基是指蛋白腺马铃馨葡萄糖琼脂培养基的英文缩写， 其具体配方为每1000ml水中含有马铃馨200g (切块煮熟后过滤，取滤液)，葡萄糖20g，蛋 白腺lOg，琼脂20g。
[0020] 实施例1 球抱白僵菌（Beauveria bassiana) FJBb201023 的鉴定 形态学鉴定： 将分离纯化的球抱白僵菌菌株在直径为90mm的平板PPDA培养基上于25 + rC条件下 培养，4-5天后挑取白色菌丝制片在显微镜下观察菌株的菌丝和分生抱子梗形态；10-12天 后挑取成熟分生抱子制片观察分生抱子的形态与大小。15天左右观察记录菌落形态特征。 该菌株菌落白色至乳白色初为疏茸状或棉絮状，后期形成乳粉状的抱子层，抱子层厚且均 匀，中屯、凸起。菌丝分枝，有格，无色光滑，有时成簇生长；产抱细胞(瓶梗）浓密簇生于短而 膨大的柄细胞上，瓶形，产抱细胞上部"之"字形，顶端变细长。分生抱子为近球形，单细胞， 透明，光滑，1. 8-2. 8X 2-2. 7 y m。
[0021] 菌株的ITS序列扩增、序列测定及分子鉴定： 利用球抱白僵菌（Beauveria bassiana)FJBb201023的菌丝体提取总DNA，然后W所提 取的DM为模板，W真菌ITS区通用引物ITS-4和ITS-5 (由上海生工生物工程股份有限 公司合成）进行PCR扩增，PCR MasterMix (含染料）12. 5化；引物ITSVITS5 (10 帕ol/L)各1化；d地2〇 9. 5化；模板DNA 1化。PCR反应程序；95°C预变性4min，94°C变性 30s，56°C复性30s，72°C延伸40s，进行35个循环，最后72 °C延伸7min，用无菌水代替模板 作阴性对照。PCR产物经过电泳条带检测后确认样品DNA -ITS区域PCR扩增产物符合测序 要求后，将PCR扩增产物进行连接、转化之后，送至销尚生物技术(上海）有限公司进行序列 测定。将测序结果与NCBI基因数据库的白僵菌菌株序列进行比对。
[00巧扩增引物序列： ITS4:日'-TCCT CCGC TTAT TGAT ATGC-3' 。
[002引 ITS5: 5'-GGAA GTAA AAGT CGTA ACAAGG-3'。
[0024] 本发明球抱白僵菌菌株的ITS的序列如SEQ ID NO. 3所示，序列长度59化P。通 过NCBI/blast比对后发现与球抱白僵菌Beauveria bassiana (AB237657)同源性最高，达 99. 83%，可W确认该菌株为为球抱白僵菌。
【主权项】
1. 一株球孢白僵菌，其特征在于：所述菌株为球孢白僵菌（Beauveria bassiana) FJBb201023,该菌株已于2014年10月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心，保藏号为CGMCC No. 9851。
2. -种杀虫菌剂，其特征在于所述的杀虫菌剂含有权利要求1所述的球孢白僵菌 (Beauveria bassiana) FJBb201023 所产生的分生抱子。
3. 按照权利要求2所述的杀虫菌剂，其特征在于其剂型为分生孢子悬浮液。
4. 如权利要求1所述的一株球孢白僵菌在防治星天牛幼虫中的应用。
【专利摘要】本发明公开一株对星天牛幼虫具有高致病力的球孢白僵菌及其应用。本发明所提供的球孢白僵菌菌株命名为球孢白僵菌（Beauveria bassiana）FJBb201023，已于2014年10月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.9851。该菌株生长速度快、产孢能力强，同时对星天牛幼虫的致病力高，以107孢子/mL的孢子悬浮液接种后对星天牛幼虫的LT50（致死中时）为5.38天。利用该菌株生产的真菌制剂，对星天牛的防治效果好，能有效降低星天牛林间虫口密度，是一株在星天牛的防治上具有潜在价值的生防菌株，对减轻星天牛危害具有积极的意义。CGMCC No.985120141027
【IPC分类】C12R1-645, A01N63-04, A01P7-04, C12N1-14
【公开号】CN104630075
【申请号】CN201510055116
【发明人】蔡守平, 何学友, 黄金水, 曾丽琼
【申请人】福建省林业科学研究院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月3日