一株蜡样芽孢杆菌j19及其诱导培养基和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物发酵和应用领域，具体设及一株蜡样芽抱杆菌J19及其诱导 培养基和应用。
【背景技术】
[0002] 自2009年开始中国对邮养殖业受到了早期死亡综合症（EMS)的重创，2011年上半 年，海南、福建、广东和广西部分地区的该病导致的死亡损失高达80%，至2013年中国华南 多个养殖区一造邮40头/斤规格养成率只有5-10%，中造邮多数邮塘放苗10-20天出现排 塘现象，发病速度之快、范围之广更甚于一造邮。EMS主要的病因为高致病性副溶血弧菌、藻 毒素和不良环境因子，常规的抗生素、消毒剂等杀菌药物对该病效果不佳。采用生物防控手 段控制水体中菌相平衡逐渐成为预防和治疗EMS的新途径。将有抑菌作用又无安全隐患的 芽抱杆菌发酵液用在养殖水体中，可部分或完全替代抗生素的使用，不易产生耐药性，且对 环境无二次污染。芽抱杆菌作为生防制剂主要是由于其抗菌作用强而有力，但并不是所有 的生防菌都能产生抗菌物质。
【发明内容】
[000引本发明提供了一株蜡样芽抱杆菌J19及其诱导培养基和应用，利用本发明所述的 蜡样芽抱杆菌J19及其对应的诱导培养基可W获得对副溶血弧菌有抑菌活性的活性物质， 可显著降低水体中副溶血弧菌含量。
[0004] 为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予W实现： 一株蜡样芽抱杆菌J19,其分类命名为蜡样芽抱杆菌保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，其保藏编号为；CGMCC No. 10052。
[0005] 诱导所述的蜡样芽抱杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑菌活性物质的诱导培养基， 所述诱导培养基包括W下组分，W质量比计： 葡萄糖 0. 1%~1〇/〇; 豆稍粉2. 0°/c^4. 0%，所述豆稍粉使用前需要在水浴中用中性蛋白酶酶解； 酵母粉 0. 5%~1〇/〇; 氯化钢 0. 1%~1〇/〇; 玉米浆 0. 1%~1. 0〇/〇。
[0006] 对上述技术方案的进一步改进；所述豆稍粉使用前需用中性蛋白酶预酶解2-化， 中性蛋白酶的用量为1500U/g豆稍粉，酶解温度为40°C。
[0007] 对上述技术方案的进一步改进；它包括W下组分；葡萄糖0. 1%、豆稍粉2. 0%、酵母 粉0. 5%、氯化钢0. 2%、玉米浆1. 0%，余量为水。
[000引本发明还提供了所述的诱导培养基在诱导蜡样芽抱杆菌J19产生对副溶血弧菌 的抑菌活性物质中的应用。
[0009] 对上述技术方案的进一步改进；所述蜡样芽抱杆菌J19在诱导培养基上于30°C下 摇床培养12-1化获得蜡样芽抱杆菌J19发酵液。
[0010] 对上述技术方案的进一步改进；将所述发酵液撒于水体中，发酵液用量为 1. 2~1. 8ml/m3水体，所述发酵液中的抑菌活性物质的浓度为10 + 0. 2mg/L。
[ocm] 对上述技术方案的进一步改进；所述水体的抑8. 5,盐度8%。-10%。，温度 27°C -29°C。
[0012] 本发明的优点和技术效果是：本发明首先筛选到一株蜡样芽抱杆菌J19,并进而 通过实验获得了其诱导培养基配方，所述培养基可W诱导蜡样芽抱杆菌J19产生抑制副溶 血弧菌的活性，有效降低水产养殖环境中致病性副溶血弧菌的数量，且对护细菌无抑制作 用，避免了抗生素在使用过程中带来的微生态破坏和细菌的耐药性，采用本发明生产的蜡 样芽抱杆菌J19发酵液，降低了因弧菌过度繁殖带来的养殖动物的患病和死亡风险，进而 有效解决近些年水产养殖过程中因高密度养殖、水环境污染、抗生素过量使用等因素造成 的致病性弧菌大量繁殖、养成率非常低的问题，W生物制剂部分或完全替代抗生素的使用， W生物防控的手段达到控制致病性弧菌过度繁殖的目的。
【附图说明】
[0013] 图1是本发明中2216E平板上对副溶血弧菌的抑菌圈。
[0014] 图2是本发明中不同发酵时间的抑菌效果测定。
【具体实施方式】
[0015] 本发明结合W下具体实施例对本发明作进一步详细说明。
[0016] 实施例1、蜡样芽抱杆菌J19菌株的获得 2010年11月由发明人采集威海市乳山市海阳所镇某海参养殖区底泥，在实验室进行 富集、分离获得一株蜡样芽抱杆菌，实验室编号为J19,即本发明所述蜡样芽抱杆菌J19。
[0017] 将所述蜡样芽抱杆菌J19菌株进行菌种保藏，保藏单位的名称；中国微生物菌种 保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC);地址；北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国 科学院微生物研究所。蜡样芽抱杆菌游cer饼W的保藏日期；2014年11月25日； 保藏编号；CGMCC No. 10052。
[0018] 经本发明实验验证可知蜡样芽抱杆菌J19是一株具有抑制革兰氏阴性细菌潜力 的有益菌，但在不同培养基中抑菌效果差异较大，甚至有些培养基中没有抑菌效果。所W， 培养基成分对蜡样芽抱杆菌抑菌物质的稳定产生有显著的影响作用。
[0019] 实施例2、不同诱导培养基配方的选择 本实施例中选择培养基组分葡萄糖0. 1%~1% ;豆稍粉2. 0%~4. 0% ;酵母粉0. 5%~1% ;氯 化钢0. P/c^l% ;玉米浆0. P/c^l. 0%进行配方优化试验，本发明中培养基配方中的百分比为 质量比。所述豆稍粉需进行前处理，前处理方法为取粒度大于等于40目的豆稍粉2g，添加 3000U中性蛋白酶，加水100ml，揽匀后，置于40°C水浴摇床中100转/min酶解化。
[0020] 试验中酵母粉、玉米浆和氯化钢选择常规用量，分别为0. 5%、1. 0%、0. 2%，进一步对 不同葡萄糖用量和豆稍是否需酶解进行了探索。按照表1所示的各种组分的配方进行抑菌 试验。
[0021] 表1 ;不同培养基配方对抑菌效果的影响
【主权项】
1. 一株蜡样芽孢杆菌J19,其特征在于：其分类命名为蜡样芽孢杆菌 cereiAs，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.10052。
2. 诱导权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑菌活性物质的诱导 培养基，其特征在于所述诱导培养基包括以下组分，以质量比计： 匍萄糖0. 1%~1% ; 豆柏粉2. 0°/p4. 0%，所述豆柏粉使用前需要在水浴中用中性蛋白酶酶解； 酵母粉〇. 5%~1% ; 氯化钠0. 1%~1% ; 玉米楽· 0· 1%~1· 0%。
3. 根据权利要求2所述的诱导培养基，其特征在于：所述豆柏粉使用前需用中性蛋白 酶预酶解2-3h，中性蛋白酶的用量为1500U/g豆柏粉，酶解温度为40°C。
4. 根据权利要求3所述的诱导培养基，其特征在于：所述诱导培养基包括以下组分：葡 萄糖0. 1%、豆柏粉2. 0%、酵母粉0. 5%、氯化钠0. 2%、玉米浆1. 0%，余量为水。
5. 权利要求2所述的诱导培养基在诱导蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑菌活 性物质中的应用。
6. 根据权利要求5所述的诱导培养基在诱导蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑 菌活性物质中的应用，其特征在于，所述蜡样芽孢杆菌J19在诱导培养基上于30°C下摇床 培养12-16h获得蜡样芽孢杆菌J19发酵液。
7. 根据权利要求6所述的诱导培养基在诱导蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌 的抑菌活性中物质的应用，其特征在于，将所述J19发酵液撒于水体中，发酵液用量为 I. 2~1. 8ml/m3水体，所述发酵液中的抑菌活性物质的浓度为10±0. 2mg/L。
8. 根据权利要求6所述的诱导培养基在诱导蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑 菌活性中物质的应用，其特征在于，所述水体的pH 8. 5,盐度8%。-10%。，温度27°C -29°C。
【专利摘要】本发明提供了一株蜡样芽孢杆菌J19及其诱导培养基和应用，蜡样芽孢杆菌J19的保藏编号为：CGMCC No.10052，所述诱导培养基包括以下组分：葡萄糖0.1%~1%；豆粕粉2.0%~4.0%，酵母粉0.5%~1%；氯化钠0.1%~1%和玉米浆0.1%~1.0%。本发明所述培养基可以诱导蜡样芽孢杆菌J19产生抑制副溶血弧菌的活性，有效降低水产养殖环境中致病性副溶血弧菌的数量，且对G+细菌无抑制作用，避免了抗生素在使用过程中带来的微生态破坏和细菌的耐药性，采用本发明生产的益生菌菌液，通过生态的手段降低因弧菌过度繁殖带来的水产养殖动物的患病和死亡风险。CGMCC No.1005220141125
【IPC分类】C12R1-085, C12N1-20, C12P1-04, A01P1-00, A01N63-02
【公开号】CN104630114
【申请号】CN201510070176
【发明人】梁晶晶, 王娇, 谢金萍, 张明俊
【申请人】青岛根源生物技术集团有限公司
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月11日