斑节对虾热休克蛋白60基因及其编码的蛋白的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明公开了斑节对邮热休克蛋白60基因及其编码的蛋白，属于生物基因技术 领域。
【背景技术】
[0002] 热休克蛋白化eat shock proteins, HSPs)是高水平基础表达的一种蛋白，占在 正常生长条件下所有类型细胞中蛋白总量的5%-10%。当细胞处于应激条件时（如重金 属、热休克、周围气温的变化、糖分损失、游离自由基的作用、病原体传染、组织损伤、精神和 生理逆境等）热休克蛋白表达量明显提高。根据分子量的不同，热休克蛋白主要划分为 服P100、服P90、服P70、服P60、和S恤SP五个家族。
[0003] HSP60作为一种分子伴侣，其重要的生物功能已日益引起人们的重视，尤其是在细 胞保护方面。HSP60提高细胞的"应急耐受"能力，帮助变性、不可溶的凝聚蛋白重新恢复天 然构象。此外，HSP60在许多病原体传染过程中都是一种免疫优势抗原，在先天免疫中发挥 重要的作用。
[0004] 免疫分子机理的研究对斑节对邮养殖有着举足轻重的地位，对HSP参与的免疫原 理进行探究，阐明病害的发生机制，对斑节对邮的繁育和养殖有着重要的作用。
【发明内容】
[0005] 针对上述问题，本发明的目的是W实验室高通量测序获得的EST序列为基础设计 的PCR扩增引物，并通过RACE技术克隆到斑节对邮热休克蛋白60基因的全表达序列；此外 通过斑节对邮热休克蛋白60基因设计原核表达引物，对热休克蛋白60在体外进行重组表 达，为研究斑节对邮热休克蛋白60在斑节对邮中的作用奠定基础，而且可W为斑节对邮养 殖过程中所出现的对各种理化刺激应。
[0006] 本发明提供的热休克蛋白60基因，该基因序列如SEQ ID NO: 1所不；。
[0007] 该基因的制备方法依次包括下述步骤：
[000引 1、总RNA的提取
[0009] 取健康斑节对邮，解剖，取卵巢组织，并将组织于1血Trizol (Invitrogen，日本） 中匀浆，按Trizol试剂盒使用手册提取斑节对邮总RNA并用DEPC水息浮，电泳观察所提取 RNA的完整性，并置于-8(TC保存。
[0010] 2、cDNA第一链的合成
[0011] 取上述斑节对邮总RNA 2]iL与反转录引物（oligo-dT/ adaptor (5' -GGCCACGCGACT AGTAC (T) 16-3' ) 1 y L (lOpmol/L)混合在反转录酶（M-MLV, Promega，USA)的作用下合成 cDNA -链，反应条件；42°C 60min，70°C 15min〇
[0012] 3、引物设计依据，引物合成的方法
[0013] 根据已有的斑节对邮热休克蛋白60的EST序列设计引物：
[0014] Pm-服P60CDNA全长扩增及表达所用的引物
[0015]
【主权项】
1. 斑节对虾热休克蛋白60基因，其特征在于，所述的基因序列如SEQ ID NO: 1所示。
2. 权利要求1所述的斑节对虾热休克蛋白60基因编码的蛋白，其特征在于，所述蛋白 的氨基酸序列如SEQ ID N0:2所示。
3. 含权利要求1或2所述基因的重组质粒。
4. 根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组载体为将权利要求1或2所 述基因插入pET21a质粒的多克隆位点得到的重组质粒。
5. 含有权利要求1或2所述基因的重组菌。
6. 根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌是将权利要求4所述重组质 粒转化大肠杆菌BL21得到的。
7. 权利1或2所述的斑节对虾热休克蛋白60在大肠杆菌中体外重组表达。
【专利摘要】本发明公开了斑节对虾热休克蛋白60基因及其编码的蛋白，该基因为研究斑节对虾热休克蛋白60在斑节对虾中的作用奠定基础，而且可以为斑节对虾养殖过程中所出现的对各种理化刺激应答效应从分子层面提供理论基础；其技术要点，该基因序列如SEQ ID NO:1所示；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；属于生物基因技术领域。
【IPC分类】C12N1-21, C12N15-12, C12N15-70, C07K14-435
【公开号】CN104630232
【申请号】CN201510082504
【发明人】邱丽华, 傅明骏, 赵超, 史进选, 江世贵, 周发林
【申请人】中国水产科学研究院南海水产研究所
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年2月13日