抗-kdr抗体和使用方法

文档序号:8332867阅读:597来源:国知局
抗-kdr抗体和使用方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请号为201210063667. 7、申请日为2012年03月12日、发明名称为 "抗-KDR抗体和使用方法"的中国发明专利申请的分案申请,该申请要求申请日为2011年 11月02日,申请号为61/554, 758的美国临时申请的优先权。
[0002] 序列表
[0003] 本申请附有纸版和计算机可读形式的序列表,其精确反应了本文所述的相关序 列。
技术领域
[0004] 本发明通常涉及抗-VEGF受体2(VEGFR2 ;又称为含激酶插入区受体、或KDR)抗 体、组合物、及其使用方法。这些抗体可用于例如治疗和抑制各种疾患的方法中,所述疾患 包括年龄-相关的黄斑变性(AMD)、糖尿病、和缺血性视网膜病变、类风湿性关节炎、银肩 病、和各种肿瘤疾病(包括肾细胞癌、转移性胃或胃食管连接部腺癌、乳癌、肝细胞癌、结肠 直肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、黑素瘤、和复发性多形性成胶质细胞瘤、白血病 和实体瘤)。
【背景技术】
[0005] VEGFR2/KDR是原发性血管生成受体,以及结合VEGF亚型A、C、D和E,并且对于内 皮细胞分化、以及VEGF的促丝裂作用、血管生成作用和渗透性-增强(渗透性-增强)作 用VEGFR2/KDR为重要的。抗-KDR抗体可预防所有已知VEGF亚型与VEGFR2/KDR结合和开 始信号传递。此外,因为肿瘤分泌更多VEGF的分子,而受体的数目仍然相对恒定,即使在非 常高水平的VEGF亚型的存在下,靶向受体增加完全抑制信号的可能性。
[0006] 血管生成
[0007] 血管生成(从现存的脉管系统中新血管的形成)是严格控制的事件,并且对于正 常生理(例如胚胎发育、卵泡发育、伤口复原、以及诸如肿瘤生长和进展(1,2)的病理病症) 起着重要作用。
[0008] 原发性肿瘤的生长和新陈代谢取决于新血管的形成。在没有新血管形成的情况 下,肿瘤会坏死或细胞凋亡和/或不能生长超过2-3mm 3的尺寸(3)。肿瘤血管生成包括多 个过程,包括内皮细胞激活、增殖、迀移、和被特定的血管生长因子触发的从先前存在血管 中组织渗透,所述血管生长因子通过肿瘤细胞和周围基质(1-4)产生。
[0009] VEGF 和 VEGF 受体
[0010] 已经鉴定几种生长因子为可能的血管生长的调节剂(5)。在这些因子中,血管内皮 生长因子(VEGF)及其受体已经显示对于肿瘤血管生成(6-9)起着重要作用。
[0011] VEGF是具有强有利的血管生成的、促有丝分裂的、和血管渗透-增强活性(10, 11) 的均二聚的34 - 42kDa肝素-结合糖蛋白。VEGF调节在成年人生命(12, 13)的胚胎发育 和血管生成的过程中血管生成。VEGF家族成员包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、和 VEGF-E。通过VEGF受体(VEGFR) VEGF结合和介导活性。有3种VEGFR,包括VEGFR1 (Flt-1)、 VEGFR2(Flk-1/KDR)和 VEGFR3(14-16)。
[0012] 在基因敲除实验(17-18)中已经清晰地证实在血管形成中VEGF和VEGF受体的生 理重要性。VEGFR1酪氨酸激酶具有对于激酶活性所需要的保守的基序。然而,对VEGF-A应 答的VEGFR1的磷酸化的水平是低的(37, 38)。VEGFR-1的功能未较好定义,它可作用虚拟/ 诱傅受体(dummy/decoy receptor)以从VEGFR-2结合中螯合VEGF和调节VEGFR-2信号。 已经显示VEGFR-3可介导应答VEGF-C和VEGF-D的淋巴管生成。VEGFR2/KDR是原发性血管 生成受体,以及结合VEGF亚型A、C、D和E,并且对于内皮细胞分化和有丝分裂发生它是重 要的。
[0013] KDR的结构和生物学
[0014] VEGFR是受体酪氨酸激酶,并且属于作为TOGF和成纤维细胞生长因子(FGF)的受 体的相同家族。VEGFR2/KDR是在胞外结构域、跨膜结构域、和通过激酶插入分成两个细胞内 酪氨酸激酶结构域中由个免疫球蛋白样的环组成的200kDa糖蛋白。第二和第三免疫球蛋 白样的环是对于VEGF的高-亲合力配体-结合结构域,然而第一和第四免疫球蛋白样的环 分别调节配体结合和受体二聚化。与对于VEGFR1的25pM的Kd相比,VEGF使用75-250pM 的Kd来结合KDR。
[0015] KDR主要表达在血管内皮细胞的细胞表面。还在造血细胞、血管平滑肌细胞 (VSMC)、和一些恶性细胞的细胞表面上发现KDR。
[0016] KDR是在发展的血管生成和血细胞生成中主要受体,和是VEGF的促有丝分裂的、 血管生成的和渗透性-增强作用的主要的介体。VEGFR2〃-敲除小鼠显示在E8. 5 - 9. 5下 具有缺陷性血-岛形成和血管生成的胚胎致死率(41)。生理上,VEGF与KDR的结合导致内 皮细胞激活、增殖、迀移、侵袭和存活。一旦与VEGF结合时,KDR受体二聚化,这导致激酶结 构域的激活和KDR受体信号传递的转导。类似许多其他受体酪氨酸激酶,导致血管生成的 主要的细胞内信号传递途径包括MAPK和PI3激酶激活。
[0017] 作为分子靶用于抗体治疗的KDR
[0018] VEGFR2/VEGF轴是在肿瘤血管生成中主要途径。多个研宄已经显示:VEGF和KDR 的过表达与在人恶性肿瘤(6)中侵袭和转移强烈相关。VEGF受体与发生在许多人实体瘤 (包括膀胱(21)、乳房(22、23)、直肠(24、25)、胃肠(26)、神经胶质瘤(12、27)、肾脏(28)、 黑素瘤(29)、和成神经细胞瘤(30))中血管生成相关。
[0019] 在肿瘤血管生成中KDR的重要作用直接证实在研宄中,其中显性-阴性KDR受体 的表达导致在无胸腺小鼠(31)中减少的内皮细胞有丝分裂发生和皮下神经胶质瘤肿瘤的 生长抑制。其他研宄使用中和可溶性VEGF受体以及使用包括小分子酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)和KDR-特异性抗体的KDR抑制剂来证实该作用。
[0020] 除了它对于肿瘤血管生成的作用外,在诸如白血病细胞的一些肿瘤细胞上还发现 KDR,并且通过刺激白血病生长(42, 43)的自分泌环KDR可直接介导肿瘤发生。
[0021] KDR信号传递的抑制能够减少血管生成和延迟肿瘤生长(35, 36)。靶向KDR的大 多数目前治疗是小-分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。TKI干扰ATP或其他底物与酪氨酸激 酶的结合,以及破坏激酶催化活性。所有迄今开发的TKI (类似舒尼替尼)与KDR激酶结构 域的ATP结合部位可逆地结合。
[0022] 在各种类型的肿瘤(12, 19)中VEGF在高水平下表达,以及新近发育的毛细血管被 聚集在VEGF-产生肿瘤细胞(12)周围。在含氧量低的条件(与快速生长的肿瘤(20)相关 的那些条件)下强烈上调VEGF表达。通过诸如Avastin(33,34)的抗体中和VEGF是临床 批准的治疗,从而抑制癌症或诸如AMD的其他血管生成疾病。然而,甚至当联合化学治疗给 予时已经发现对VEGF阻断的抵抗。该抵抗可以与重塑的脉管系统和其他生成血管因子的 增加的表达相关。就其本身而论,本领域保留需求对于用于抑制癌症和与血管生成相关的 其他疾病的改善的组合物和方法。
[0023] 尽管TKI和抗-KDR抗体能够抑制KDR-介导的血管生成,但是抗体途径的优势超 过TKI。相对于TKI,抗-KDR抗体是更加特异的KDR靶向剂(即,它不会抑制其他的VEGF 受体)。因为它的高特异性,抗-KDR抗体能够限制和/或避免通过更低特异性TKI (44)导 致的脱革G效应(〇ff-target effect)和毒性。
[0024] 在各种类型的肿瘤(12, 19)中VEGF在高水平下表达,以及新近发育的毛细血管被 聚集在VEGF-产生肿瘤细胞(12)周围。在含氧量低的条件(与快速生长的肿瘤(20)相关 的那些条件)下强烈上调VEGF表达。通过诸如Avastin (33, 3
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