一种双管真空薄膜精子分离法及装置的制造方法

文档序号:8333839阅读:537来源:国知局
一种双管真空薄膜精子分离法及装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及细胞生物学领域,具体是一种双管真空薄膜精子分离法及装置。
【背景技术】
[0002]精子分离处理技术是辅助生殖技术中必不可少的关键技术,实施辅助生殖技术时常用的精子分离技术主要包括密度梯度离心技术和上游分离法。这些技术均有各自的局限。密度梯度离心技术的精子回收率较高,但由于处理完成后,需用吸管移走上层杂质和低密度溶液,再用吸管通过高密度溶液液面吸取离心管底部精子,这样,上层杂质会部分粘附在离心管壁并顺流到高密度溶液的液面,进而粘附在吸管上混入底部分离出的活动精子中,因此这种操作会将部分已经分离的上层死精子及精浆杂质混入底部筛选精子,因而虽然回收率高,但回收精子活动率较上游法低,特别是由于此局限性,在一些需要将精浆和精子彻底分离的特殊情况(如某些精浆感染病毒或细菌)下就无法通过此方法将精浆中存在的有害物质彻底清除;上游法虽然可以避免精浆杂质污染精子的情况,但回收率普遍较低。故现有技术尚无法提供一种兼顾回收率及精子质量的分离方法。
[0003]另外,常规的精液处理分离技术需要精液必须在完全液化的状态下完成,而很多不育患者的精液不液化,对于不液化精液的处理方法一般为在精液内添加培养液或蛋白酶,然后进行吹打,待精液液化后再进行精子的分离。以上操作均会对精子造成损伤。在畜牧业猪人工授精精液处理过程中,常规使用纱布和滤纸自然过滤精液以去除精液中的胶状物质。实践中我们发现将人的不液化精液在经过滤纸并离心可得到液化精液,而精液依靠其自然过滤难以通过滤纸,回收率较低,影响精液的分离处理。

【发明内容】

[0004]本发明的目的在于提供一种双管真空薄膜精子分离法及装置,它无论精液是否液化,都能够通过简易操作,将精浆与精子彻底分离。在精液的预处理过程中不用对精液进行添加酶类和吹打的预处理,避免了对精子的伤害,在精子的分离过程中也无需借用其他设备仪器,避免了除杂不彻底的问题,成功率、回收率和精子质量俱佳。
[0005]本发明为实现上述目的,通过以下技术方案实现:
[0006]一种精子分离装置,包括离心内管和离心管,所述离心内管置于离心管内,所述离心内管的下部为尖端开口的锥体结构,所述离心内管的内部设置过滤装置,所述过滤装置位于离心内管的管内中部,并包括有滤纸支架、滤纸和滤纸压环,所述滤纸支架为网孔结构,所述滤纸为若干层且设置于滤纸支架上,所述滤纸为孔径30?50微米的中速定性滤纸,所述滤压环设置在滤纸上,所述离心内管顶部的管口处设置内管密封盖。
[0007]所述离心内管的顶端与内管密封盖的连接处均设置相对应的螺纹,所述内管密封盖内设置密封胶垫。
[0008]所述离心内管的外侧裹套有胶皮垫圈。
[0009]所述离心管的规格是I O-15ml的离心管。
[0010]利用权利要求1?4任一项所述一种精子分离装置实施的一种双管真空薄膜精子分离法,包括以下步骤:
[0011](a)用精子洗液将密度梯度溶液稀释配成α %和β %两种密度梯度溶液,所述α的数值大于β的数值,将等量的α %和β %两种密度梯度溶液分层置于离心管底部,并使所述α %密度梯度溶液位于β %密度梯度溶液的下方且两者之间界面清晰;
[0012](b)将所述离心内管插入由步骤(a)备好的离心管底部,确保不破坏密度梯度溶液界面的清晰,并使所述离心内管与离心管的相对位置固定;
[0013](c)将精子洗液滴入离心内管使过滤装置湿润;
[0014](d)将精液滴加在离心内管的过滤装置上;
[0015](e)闭合内管密封盖将离心内管的管口密封;
[0016](f)将离心管及离心内管进行低速离心处理后,取出离心内管使其与离心管分离,离心管的剩余物质即为部分α %密度梯度溶液以及底部的精子团;
[0017](g)离心管(2)剩余物质经精子洗液混匀低速离心洗涤后即为分离的活动精子。
[0018]所述α %的数值为90%,所述β %的数值为45%。
[0019]所述步骤(a)中,α %和β %两种密度梯度溶液的用量均为0.8-1.5ml,所述步骤
(c)中精子洗液的用量为0.1-0.3ml。
[0020]所述步骤(f)中的低速离心操作为,将离心管及离心内管进行2500rpm离心10_15mino
[0021]所述步骤(g)中的精子洗液用量为3_6ml,低速离心操作为,将离心管进行2500rpm 离心 5-lOmin。
[0022]将步骤(a)中的精子洗液和密度梯度溶液在进行操作前放置于37°C条件下,步骤
(d)中的精液取出后在37°C温度下放置1min再进行滴加操作。
[0023]对比现有技术,本发明的有益效果在于:
[0024]1、通过所述离心内管内的过滤装置,结合进行一定转速的离心操作,使滴于过滤装置上的精液,无论液化与否,均能够通过过滤装置,达到液化效果,从而无需向精液中添加培养液或蛋白酶,亦无需对精液进行吹打操作,避免了对精子的损伤,使精子收率大大提高,有利于进行后续的精液分离处理。
[0025]2、通过将所述离心内管插入装有两种密度梯度溶液的离心管底部,使离心内管底端的开口被密度梯度溶液密封,结合所述内管密封盖,使所述离心内管的管内形成密闭的空间。由于低速离心处理使得所述过滤装置上的精子洗液及精液滤过过滤装置融入底部的密度梯度溶液,从而使离心内管内产生一定的负压,并且通过离心沉降分层使得精液中的杂质、有害物质等溶于离心内管内的β %密度梯度溶液,当离心处理结束,将所述离心内管自离心管内取出时,所述离心内管内的负压能够将离心内管里的β %密度梯度溶液和部分α %密度梯度溶液一同吸出,离心内管里的部分α %密度梯度溶液以及底部的精子团则落到离心管底部。这样一来精液中的杂质和有害物质也被一并去除,从而达到分离精子的目的。本方法和装置不但保留了传统密度梯度离心法的高回收率,并且保证了回收精子的质量。与传统的密度梯度离心法不同的是,由于其组分的分离依靠离心内管自身的负压,故避免了使用吸管抽吸分离精子的过程中将上层杂质带入已分离精子的缺陷,使精浆物质彻底与精子分离。
[0026]3、所述离心内管顶端的内管密封盖,能够保证离心内管的密封,为产生负压提供前提条件;所述离心内管内设置的过滤装置,结合低速离心操作,可使精液的过滤液化和离心内管的负压生成同步完成,即能够使精液充分液化,保证了下一步分离操作的进行,又能为下一步的分离操作提供负压吸力,且过程紧凑高效,避免了人工过滤的染菌问题,提高成功率;所述离心内管下部为椎体设计,使分离出的精子团能够集中于离心内管底部中心;所述离心内管底端的开口设计,使分理出的精子团在离心内管与离心管分离时能够通过开口留在离心管底部。通过以上设计和效果,能够辅助完成将精液的液化和精子的分离,提高成功率、回收率和回收质量。
[0027]4、所述离心内管的顶端与内管密封盖的螺纹,能够使二者的连接更加紧固,所述密封胶垫的设置,进一步保证离心内管的密封性。
[0028]5、所述胶皮垫圈紧密缠绕在离心内管的外壁上且高低可调,当离心内管插入离心管并到达离心管底部后,通过调整所述胶皮垫圈在离心内管上的位置,使胶皮垫圈担托于离心管管壁顶端,从而使离心内管与离心管的相对位置固定,还能对离心管起一定的密封作用。
[0029]6、所述α %的数值为90 %,所述β %的数值为45 %,使两个密度梯度溶液的密度相差显著,有助于精子的分离。
[0030]7、两种0.8-1.5ml的密度梯度溶液,0.1-0.3ml的精子洗液,配合使用10_15ml的离心管进行实验操作,分离效果较好。
[0031]8、对所述离心管、离心内管进行2500rpm离心10_15min,即可使所处理的精液液化充分,并使精液组分分层沉降,使精子团沉淀到离心内管底端的尖部。
[0032]9、用3_6ml精子洗液与离心管剩余物质混勾后进行2500rpm离心5_10min,可将多余α %的密度梯度溶液去除,剩余所需分离的活动精子,可用于人工授精或其他研宄。
[0033]10、将刚取出的精液在37°C温度下放置lOmin,有利于精液的液化并保持精子活力;将所需试剂在37°C条件下放置,有利于精子活性的保持。
【附图说明】
[0034]附图1是本发明
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