针对转运体的抗体及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种抗LATl/⑶98单株抗体，其特异性结合到LATl/⑶98复合体的胞 外区，直接抑制氨基酸转运活性或者与淋巴球共同地间接诱导细胞毒素性因子，由此将肿 瘤细胞向细胞死亡引导。本发明还涉及抗体和/或免疫交联物组合物，以及它们在治疗、预 防和/或诊断肿瘤中的使用。
【背景技术】
[0002] 生物为了取得生命的维持活动所需的营养素或信号传导物质而具有各种机构，各 式各样地存在于各个细胞膜上的转运体或受体为其一例。其中尤其是关于作为构成活体的 主要要素的氨基酸的转运，从1960年代已进行研宄。进入1990年后，以鉴定负责氨基酸转 运的分子为开端，现在鉴定了大概30种左右控制基因。这些转运体根据转运的氨基酸的性 质大致被区分为碱性氨基酸转运体、中性氨基酸转运体、酸性氨基酸转运体3种，和CD98的 异源二聚体型氨基酸转运体包括以下所述的LAT1、为6种。
[0003] LATl相对于其他转运体具有较大范围的基质选择性，是与钠不相依的中性 氨基酸转运体。是在1998年被克隆的12次跨膜型蛋白质，存在于细胞膜表面。是6 种⑶981c之中的一种，通过与1次跨膜型蛋白质的4F2hc(⑶98)进行二硫键结合而 形成异源二聚体，显示出氨基酸转运活性。4F2hc是与特定的转运体连结从而转移至 细胞膜的类分子伴侣分子^>卞夂口 >様分子）（例如金井好克，蛋白质核酸酵素 Vol. 46, No. 5, PP. 629-637, 2001 (非专利文献 1))。
[0004] 至今报告了许多LATl/⑶98复合体在肿瘤细胞中高表达的事例（Yanagida et al.，Biochimica et Biophysica Acta Vol. 1514, PP. 291-302, 2001 (非专利文献 2)、 Ohno et al.，Cancer Sci. Vol. 99, No. 5, PP. 1000-1007, 2008 (非专利文献 3)、Kaira et al·，Cancer Sci. Vol. 99, No. 12, PP. 2380-2386, 2008(非专利文献 4)、Kaira et al.，Cancer Sci. Vol. 100, No. 2, PP. 249-254, 2009 (非专利文献 5))。认为氨基酸是在细胞 增生中所不可或缺的物质，无秩序地重复增生的肿瘤细胞需要比一般多的氨基酸。因此，推 测比起正常细胞在肿瘤细胞中氨基酸转运体的发现量会增加。因此，教导了 LAT1/CD98复 合体作为肿瘤的治疗中的靶分子有用。
[0005] 先行技术文献
[0006] 专利文献
[0007] [专利文献1]日本特开2011-24537
[0008] 非专利文献
[0009] 非专利文献1 :金井好克，蛋白质核酸酵素 Vol. 46, No. 5, pp. 629-637, 2001
[0010] 非专利文献 2 :Yanagida et al.，Biochimica et Biophysica Acta Vol.1514, pp. 291-302, 2001
[0011] 非专利文献 3 :0hno et al. , Cancer Sci. Vol. 99, No. 5, ρρ· 1000-1007, 2008
[0012] 非专利文献 4 :Kaira et al.，Cancer Sci. Vol. 99, No. 12, ρρ· 2380-2386, 2008
[0013] 非专利文献 5 :Kaira et al.，Cancer Sci. Vol. 100, No. 2, ρρ· 249-254, 2009
[0014] 非专利文献 6 :Haynes et al.，J Immunol. 1981Apr ; 126 (4) : 1409-14.
[0015] 非专利文献 7 :Masuko et al.，Jpn J Cancer Res. 1985May ;76 (5) : 386-94.
【发明内容】
[0016] 发明所要解决的问题
[0017] 虽然认为对于LAT1/CD98复合体特异性结合抑制活性或者诱导细胞毒素的单 株抗体有希望作为分子靶向药物，但是因抗体医药的性质，需要是对LAT1/CD98复合体 的胞外区进行辨识的抗体。虽然到目前为止，报告了数种对CD98进行特异性辨识的抗 体（Haynes et al·，J Immunol. 1981Apr; 126 (4) :1409-14.(非专利文献 6) ;Masuko et al.，Jpn J Cancer Res.l985May;76(5):386-94.(非专利文献 7))，但是作为将 LAT1/CD98 复合体的胞外区视为表位的抗体仅有唯一的报告（日本特开2011-24537 :专利文献1)。然 而，日本特开2011-24537所公开的抗体为了治疗人类抗体力价不充分，不足以作为抗肿瘤 剂供实用。
[0018] 因此，要求一种将LAT1/CD98复合体的胞外体作为表位辨识的更优异的抗体（"抗 LAT1/CD98 抗体"）。
[0019] 用于解决问题的手段
[0020] 鉴于此情况，本发明提供一种单株抗体，其对观察到肿瘤细胞特异性高表达的 LAT1/CD98复合体的胞外区进行辨识，抑制其活性或诱导细胞毒素性因子，由此将肿瘤细胞 向细胞死亡引导。并且，提供一种产生本发明的抗体的融合瘤、本发明的抗体与具有杀细胞 活性和/或抗肿瘤活性的化合物或放射性同位素的复合体（免疫交联物）。
[0021] 本发明人成功制作了一种抗LATl/⑶98抗体，其具有与日本特开2011-24537所公 开的抗LATl/⑶98抗体的⑶R的氨基酸序列不同的⑶R氨基酸序列，对于LATl/⑶98复合 体的胞外区的结合性显著更优异。另外，确认了该抗体具有显著的细胞毒素诱导活性和内 化活性。
[0022] 因此，本发明提供以下内容。
[0023] [1] 一种抗体或其抗原结合片段，其特异性结合于表达LATl/⑶98的细胞的LATl/ CD98复合体的胞外区；
[0024] (1)包括作为轻链互补性决定区1 (⑶RL1)、轻链互补性决定区2 (⑶RL2)和轻链互 补性决定区3 (CDRL3)，分别是序列号码7、序列号码8和序列号码9的氨基酸序列，或者在 序列号码7、序列号码8和序列号码9的氨基酸序列中分别具有1个或数个氨基酸残基变异 之氨基酸序列，
[0025] 并包括作为重链互补性决定区1 (⑶RH1)、重链互补性决定区2 (⑶RH2)和重链互 补性决定区3 (CDRH3)，分别是序列号码10、序列号码11和序列号码12的氨基酸序列，或者 在序列号码10、序列号码11和序列号码12之氨基酸序列中分别具有1个或数个氨基酸残 基变异的氨基酸序列；
[0026] (2)包括作为⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3,分别是序列号码13、序列号码14和序列号 码15的氨基酸序列，或者在序列号码13、序列号码14和序列号码15之氨基酸序列中分别 具有1个或数个氨基酸残基变异的氨基酸序列，
[0027] 并包括作为⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3,分别是序列号码16、序列号码17和序列号码 18的氨基酸序列，或者在序列号码16、序列号码17和序列号码18之氨基酸序列中分别具 有1个或数个氨基酸残基变异的氨基酸序列；
[0028] (3)包括作为CDRL1、CDRL2和CDRL3,分别是序列号码19、序列号码20和序列号 码21之氨基酸序列，或者在序列号码19、序列号码20和序列号码21之氨基酸序列中分别 具有1个或数个氨基酸残基变异的氨基酸序列，
[0029] 并包括作为⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3,分别是序列号码22、序列号码23和序列号码 24的氨基酸序列，或者在序列号码22、序列号码23和序列号码24的氨基酸序列中分别具 有1个或数个氨基酸残基变异的氨基酸序列；
[0030] (4)包括作为CDRL1、CDRL2和CDRL3,分别是序列号码25、序列号码26和序列号 码27的氨基酸序列，或者在序列号码25、序列号码26和序列号码27的氨基酸序列中分别 具有1个或数个氨基酸残基变异的氨基酸序列，
[0031] 并包括作为⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3,包含是序列号码28、序列号码29和序列号码 30的氨基酸序列，或者在序列号码28、序列号码29和序列号码30的氨基酸序列中分别具 有1个或数个氨基酸残基变异的氨基酸序列。
[0032] [2] -种抗体或其抗原结合片段，其特异性结合于表达LATl/⑶98的细胞的LATl/ ⑶98复合体的胞外区；且包括：
[0033] (1)包括X1Asqx2VGNNVA (序列号码1)的氨基酸序列的轻链互补性决定区 I(CDRLl)；
[0034] (2)包括YASX3RX4T (序列号码2)的氨基酸序列的轻链互补性决定区2 (CDRL2);
[0035] (3)包括QrX5YKSPYT (序列号码3)的氨基酸序列的轻链互补性决定区3 (CDRL3);
[0036] (4)包括GFSLPTSSVS (序列号码4)的氨基酸序列的重链互补性决定区I(CDRHl);
[0037] (5)包括Viwsngntdyssx6X7Ks(序列号码5)的氨基酸序列的重链互补性决定区 2(CDRH2);及
[0038] (6)包括Nfrnx8PGVMDA (序列号码6)的氨基酸序列的重链互补性决定区 3(CDRH3)；
[0039] (其中，父8是任意天然存在的氨基酸残基）。
[0040] [3]如项[2]所记载的抗体或其抗原结合片段，其中，X$R或K;
[0041] X2Sn 或 τ ;
[0042] X3为 S 或 N ;
[0043] X4为 H 或 N ;
[0044] 父5为 V 或 I ;
[0045] X6为 A 或 R ;
[0046] X7为 I 或 F ;
[0047] 父8为 D 或 N。
[0048] [4]如项[2]所记载的抗体或其抗原结合片段，其中，（1)X$R，X$N，X3为N， X#N，X# I，父6为 A，父7为 I，X8SD ;
[0049] (2) K，X 2为 N，X 3为 S，X 4为 H，X 5为 V，X 6为 R，X 7为 F，X 8为 D ;
[0050] (3) K，X 2为 T，X 3为 S，X 4为 H，X 5为 V，X 6为 R，X 7为 F，X 8为 D ;或者
[0051] (4)X$ K，X 2为 N，X 3为 S，X 4为 H，X 5为 V，X 6为 R，X 7为 I，X 8为 N。
[0052] [5]如项[1]~[4]中任一项所记载的抗体或其抗原结合片段，含有：
[0053] (1)包括与序列号码31的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的轻链 可变区（LH)，和
[0054] 包括与序列号码31的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的重链可变 区（VL);
[0055] (2)包括与序列号码33的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的轻链 可变区（LH)，和
[0056] 包括与序列号码34的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的重链可变 区（VL);
[0057] (3)包括与序列号码35的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的轻链 可变区（LH)，和
[0058] 包括与序列号码36的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的重链可变 区（VL);或者
[0059] (4)包括与序列号码37的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的轻链 可变区（LH)，和
[0060] 包括与序列号码38的氨基酸序列具有90%以上同一性的氨基酸序列的重链可变 区（VL)〇
[0061] [6]如项[1]~[5]中任一项所记载的抗体或其抗原结合片段，含有：
[0062] (1)包括序列号码31的氨基酸序列的轻链可变区（VL)，和
[0063] 包括序列号码32的氨基酸序列的重链可变区（VH);
[0064] (2)包括序列号码33的氨基酸序列的轻链可变区（VL)，和
[0065] 包括序列号码34的氨基酸序列的重链可变区（VH);
[0066] (3)包括序列号码35的氨基酸序列的轻链可变区（VL)，和
[0067] 包括序列号码36的氨基酸序列的重链可变区（VH);或者
[0068] (4)包括序列号码37的氨基酸序列的轻链可变区（VL)，和
[0069] 包括序列号码38的氨基酸序列的重链可变区（VH)。
[0070] [7]如项[1]~[6]中任一项所记载的抗体或其抗原结合片段，具有针对表达 LAT1/CD98的细胞的细胞毒素活性和/或内化活性。
[0071] [8]如项[1]~[7]中任一项所记载的抗体或其抗原结合片段，亚类为IgG。
[0072] [9]如项[8]所记载的抗体或其抗原结合片段，所述IgG为IgG2a或IgGl。
[0073] [10]如项[1]~[9]中任一项所记载的抗体或其抗原结合片段，所述抗原结合片