桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及桑叶技术领域，是一种桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法。
【背景技术】
[0002]γ -氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,简称GABA)是一种非蛋白质组成的天然氨基酸，分布十分广泛，在动物、植物和微生物中均有GABA存在，是一种重要的抑制性神经传递物质。研宄表明GABA具有降血压、调节心率失常、调节激素分泌、健脑、控制哮喘、治疗癫痫、抗惊厥、抗焦虑、镇痛和改善记忆等多种药理作用。随着GABA的深入研宄，GABA被作为一种新型功能性因子，广泛运用于医药、食品、保健、化工及农业等行业。新疆吐鲁番地区桑树资源丰富，研宄发现桑叶中含有高含量的GABA，10g桑叶干品中GABA平均含量为226mg，所以从桑叶中提取γ-氨基丁酸越来越受到人们的重视，市场前景广阔。申请号为200910040513.4的中国专利文献公开了桑叶γ -氨基丁酸提取方法及其运用；以鲜桑叶为原料，经烘干粉碎，加水浸泡，超声波萃取，无水乙醇沉淀，三级分离纯化等工序制得γ -氨基丁酸白色晶体；但该方法存在生产成本高，桑叶的利用率低。
【发明内容】
[0003]本发明提供了一种桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有γ-氨基丁酸提取方法存在生产成本高和桑叶的利用率低的问题。
[0004]本发明的技术方案是通过以下措施来实现的:一种桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法，按下述方法进行:第一步，将洗净的新鲜桑叶在温度为25°C至35°C下遮光密闭厌氧处理6h至8h，厌氧处理后在避光阴凉处自然风干，自然风干后粉碎成50目至100目细粉得到桑叶细粉；
第二步，按I克桑叶细粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液计，在桑叶细粉中加入乙醇水溶液进行一次浸提，一次浸提的时间为0.5h至3h，一次浸提后固液分离得到一次浸提液和一次滤渣，按I克桑叶细粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液计，在一次滤渣中加入乙醇水溶液进行二次浸提，二次浸提的时间为0.5h至3h，二次浸提后固液分离得到二次浸提液和二次滤渣，按I克桑叶细粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液计，在二次滤渣中加入乙醇水溶液进行三次浸提，三次浸提的时间为0.5h至3h，三次浸提后固液分离得到三次浸提液和三次滤渣，将一次浸提液、二次浸提液和三次浸提液混合后得到混合浸提液，将混合浸提液浓缩至混合浸提液体积的1/20至1/50后得到一次浓缩液，在一次浓缩液中加入一次浓缩液体积的3倍至5倍蒸馏水浸提0.3h至0.5h,过滤后得到一次滤液和一次滤饼，
一次滤液浓缩至质量百分含水量等于2%至5%后得到提取液；
第三步，在提取液中加入提取液3倍至4倍体积的无水乙醇在温度为70°C至80°C下混合均匀，冷却至常温后过滤得到二次滤液和二次滤饼，二次滤饼用无水乙醇萃取2次至5次，萃取后将二次滤液和各萃取液合并后得到三次滤液，三次滤液浓缩至三次滤液体积的1/20至1/50后得到三次浓缩液； 第四步，在三次浓缩液中加入活性炭并混合均匀，三次浓缩液中固形物和活性炭的质量比为80:1至100:1，静置Ih至3h后过滤得到四次滤液，四次滤液浓缩至四次滤液体积的1/20至1/50后得到粗提液；
第五步，将粗提液用柠檬酸水溶液调节PH值为3至5，将调节PH值后的1.1倍至1.3倍树脂柱体积的粗提液加入到装有树脂的玻璃层析柱中吸附30分钟至50分钟，加入pH为8的氨水溶液进行洗脱，控制从玻璃层析柱中流出的液体流速为2.5mL/min至3.5mL，在洗脱过程中不断用茚三酮检测从玻璃层析柱中流出的洗脱液，茚三酮显紫红色时开始收集洗脱液，直至茚三酮显色反应消失为止，合并洗脱液，然后对合并后的洗脱液进行浓缩、冷冻干燥粉碎后得到γ-氨基丁酸淡黄色或白色粉末。
[0005]下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进:
上述新鲜桑叶为果桑健壮枝条上部叶位3片至5片无病虫害新鲜桑叶。
[0006]上述乙醇水溶液为体积百分比为80%的乙醇水溶液。
[0007]上述柠檬酸水溶液为lmol/L的檬酸水溶液。
[0008]上述树脂为732磺酸型阳离子树脂。
[0009]上述第一步中，厌氧处理后在避光阴凉处自然风干5天至7天，间隔2天翻动一次，避光阴凉处自然风干温度为25°C至30°C。
[0010]上述第二步中，一次浸提、二次浸提和三次浸提均在密闭容器中进行的。
[0011]上述第二步中，混合浸提液浓缩的温度为55°C至70°C，一次滤液浓缩的温度为55°C至70°C ;第三步中，三次滤液浓缩的温度为55°C至70°C ;第四步中，四次滤液浓缩的温度为55°C至70°C ;第五步中，洗脱液浓缩的温度为55°C至70°C。
[0012]上述第五步中，冷冻干燥的温度为-15°C至_40°C ;冷冻干燥的时间为8h至12h。
[0013]本发明桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法中，桑叶经过避光阴干处理从而使γ-氨基丁酸含量大大提高，本发明不需要购置萃取设备和烘干设备，利用气候自然资源进行晾晒；同时本发明中只需要用活性炭吸附色素后，直接用732型阳离子树脂分离纯化即可；通过本发明得到的γ-氨基丁酸淡黄色或白色粉末中γ-氨基丁酸的含量和现有桑叶γ-氨基丁酸提取方法及其运用中γ-氨基丁酸白色结晶体中γ-氨基丁酸的含量相当；从而大大降低了生产成本，节约了能耗，提高了桑叶的利用率。
【具体实施方式】
[0014]本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。
[0015]实施例1，该桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法，按下述方法进行:第一步，将洗净的新鲜桑叶在温度为25°C至35°C下遮光密闭厌氧处理6h至8h，厌氧处理后在避光阴凉处自然风干，自然风干后粉碎成50目至100目细粉得到桑叶细粉；
第二步，按I克桑叶细粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液计，在桑叶细粉中加入乙醇水溶液进行一次浸提，一次浸提的时间为0.5h至3h，一次浸提后固液分离得到一次浸提液和一次滤渣，按I克桑叶细粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液计，在一次滤渣中加入乙醇水溶液进行二次浸提，二次浸提的时间为0.5h至3h，二次浸提后固液分离得到二次浸提液和二次滤渣，按I克桑叶细粉中加入5毫升至50毫升乙醇水溶液计，在二次滤渣中加入乙醇水溶液进行三次浸提，三次浸提的时间为0.5h至3h，三次浸提后固液分离得到三次浸提液和三次滤渣，将一次浸提液、二次浸提液和三次浸提液混合后得到混合浸提液，将混合浸提液浓缩至混合浸提液体积的1/20至1/50后得到一次浓缩液，在一次浓缩液中加入一次浓缩液体积的3倍至5倍蒸馏水浸提0.3h至0.5h,过滤后得到一次滤液和一次滤饼，
一次滤液浓缩至质量百分含水量等于2%至5%后得到提取液；
第三步，在提取液中加入提取液3倍至4倍体积的无水乙醇在温度为70°C至80°C下混合均匀，冷却至常温后过滤得到二次滤液和二次滤饼，二次滤饼用无水乙醇萃取2次至5次，萃取后将二次滤液和各萃取液合并后得到三次滤液，三次滤液浓缩至三次滤液体积的1/20至1/50后得到三次浓缩液；
第四步，在三次浓缩液中加入活性炭并混合均匀，三次浓缩液中固形物和活性炭的质量比为80:1至100:1，静置Ih至3h后过滤得到四次滤液，四次滤液浓缩至四次滤液体积的1/20至1/50后得到粗提液；
第五步，将粗提液用柠檬酸水溶液调节PH值为3至5，将调节PH值后的1.1倍至1.3倍树脂柱体积的粗提液加入到装有树脂的玻璃层析柱中吸附30分钟至50分钟，加入pH为8的氨水溶液进行洗脱，控制从玻璃层析柱中流出的液体流速为2.5mL/min至3.5mL，在洗脱过程中不断用茚三酮检测从玻璃层析柱中流出的洗脱液，茚三酮显紫红色时开始收集洗脱液，直至茚三酮显色反应消失为止，合并洗脱液，然后对合并后的洗脱液进行浓缩、冷冻干燥粉碎后得到γ-氨基丁酸淡黄色或白色粉末。避光阴干比直接晒干处理的桑叶的γ-氨基丁酸含量要高，实验结果表明，经过避光阴干处理的桑叶，有助于鲜叶中L-谷氨酸转化为γ-氨基丁酸，从而使GABA含量大大提高，提高了桑叶的利用率；一次浸提、二次浸提和三次浸提便于将一些色素和糖类杂质去除，使固形物含量降低，这样有利于浸提液的进一步纯化。
[0016]实施例2，该桑叶中提取γ-氨基丁酸的方法，按下述方法进行:第一步，将洗净的新鲜桑叶在温度为25°c或35°C下遮光密闭厌氧处理6h或8h，厌氧处理后在避光阴凉处自然风干，自然风干后粉碎成50目或100目细粉得到桑叶细粉；
第二步，按I克桑叶细粉中加入5毫升或50毫升乙醇水溶液计，在桑叶细粉中加入乙醇水溶液进行一次浸提，一次浸提的时间为0.5h或3h，一次浸提后固液分离得到一次浸提液和一次滤渣，按I克桑叶细粉中加入5毫升或50毫升乙醇水溶液计，在一次滤渣中加入乙醇水溶液进行二次浸提，二次浸提的时间为0.5h或3h，二次浸提后固液分离得到二次浸提液和二次滤渣，按I克桑叶细粉中加入5毫升或50毫升乙醇水溶液计，在二次滤渣中加入乙醇水溶液进行三次浸提，三次浸提的时间为0.5h或3h，三次浸提后固液分离得到三次浸提液和三次滤渣，将一次浸提液、二次浸提液和三次浸提液混合后得到混合浸提液，将混合浸提液浓缩或混合浸提液体积的1/20或1/50后得到一次浓缩液，在一次浓缩液中加入一次浓缩液体积的3倍或5倍蒸馏水浸提0.3h或0.5h,过滤后得到一次滤液和一次滤饼，
一次滤液浓缩至质量百分含水量等于2%或5%后得到提取液；
第三步，在提取液中加入提取液3倍或4倍体积的无水乙醇在温度为70°C或80°C下混合均匀，冷却至常温后过滤得到二次滤液和二次滤饼，二次滤饼用无水乙醇萃取2次或5次，萃取后将二次滤液和各萃取液合并后得到三次滤液，三次滤液浓缩至三次滤液体积的1/20或1/50后得到三次浓缩液； 第四步，在三次浓缩液中加入活性炭并混合均匀，三次浓缩液中固形物和活性炭的质量比为80:1或100:1，静置Ih或3h后过滤得到四次滤液，四次滤液浓缩至四次滤液体积的1/20或1/50后得到粗提液；
第五步，将粗提液用柠檬酸水溶液调节PH值为3或5，