一种从石蒜属植物中提取单体石蒜碱的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种石蒜碱的提取方法，尤其是设及一种从石蒜属植物中提取石蒜碱 单体的方法。
【背景技术】
[0002] 石蒜中石蒜碱等生物碱的化学合成方法已经有报道，但从石蒜属植物中提取仍是 该类物质的一大重要来源，现有技术中石蒜生物碱的提取方法主要有溶剂提取法、超声波 提取法、微波提取法、超临界流体萃取等方法，该些方法一般都存在环境污染严重、生产成 本高等缺点。
[0003] 中国专利2008102047350公开了一种石蒜中石蒜碱的提取分离方法，W石蒜鱗茎 为原料，采用复合酶预处理，稀盐酸浸提，超声波辅助提取，氯仿萃取方法提取石蒜碱。虽提 高了石蒜碱的提取率，但提取的不是石蒜碱单体，且步骤复杂，操作繁琐。目前缺乏对石蒜 碱单体的提取。
[0004] 中国专利2007100532075公开了一种从石蒜属植物中提取活性生物碱的方法，生 物碱纯化根据石蒜生物碱碱性强弱不同，使用分段萃取技术同步得到多种石蒜生物碱粗产 品，再经过柱层析和反复重结晶得到高纯度的石蒜生物碱单体（加兰他敏、石蒜碱、力可拉 敏、多花水仙碱），而萃取用的有机溶剂为0. 5-3倍体积的氯仿、正了醇、石油離、己酸己醋、 己離和异戊醇中的一种，虽该发明提高了石蒜综合利用度，但是操作复杂，有机溶剂含量 高，污染环境。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种提取时 间短、溶剂用量少、环保的从石蒜属植物中提取石蒜碱单体的方法。
[0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，一种从石蒜属植物中提取石蒜碱单 体的方法，包括W下步骤：
[0007] (1)提取；称取经处理的石蒜粉末，W料液比1:10,比例单位为g/mU加入抑 为4. 5的水中，加入石蒜粉末质量1.0% -3.0% (优选2.0% -2. 8%，更优选2.5% ) 的纤维素酶与果胶酶的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1:1，在50°C下酶解 20-100min (优选 40-80min，更优选 60min)，然后超声波处理 5-25min (优选 15min-20min， 更优选15min)，500化/min离屯、20min，取上清液，即得石蒜碱提取液；
[000引 （2)纯化
[0009] ①溶剂萃取；将步骤（1)提取的石蒜碱提取液用化OH调节抑至10,按体积比1:1 加入萃取剂立氯甲烧，摇匀，静置过夜，取下层氯仿化肥1调节抑至2,抽滤，得石蒜碱萃取 浓缩液；
[0010] ②阳离子交换树脂吸附；将步骤①中萃取浓缩液经肥1调节抑至1~6(优选 抑为2)用D-001型阳离子交换树脂，W上样速率l-3BV/h(优选3BV/h)上样至饱和，用含 0. 5-2. 5mol/L (优选1. 5mol/L)氨水的40% -80% (优选70% )己醇溶液w 3BVA的洗脱 速率进行洗脱，干燥，得干燥物I ;
[0011] ⑨反相硅胶柱层析；C18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物I的Ci8填 料装于层析柱中，然后W流动相（流动相；V(己膳）；V(磯酸盐）为16 ; 84)溶解层析 出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干 燥物II ;
[0012] ④正相硅胶柱层析；用经预处理的20倍质量于步骤⑨所得干燥物II的柱层析用 硅胶（200-300目）W柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10~30 (优 选1:10)，步骤⑨所得干燥物II与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油離、己酸己 醋、氯仿、丙酬、甲醇中的两种溶剂混合；蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真 空冷冻干燥，得干燥物III ;
[0013] ⑥重结晶；将步骤④所得干燥物III经己醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在 50~60°C真空干燥的石蒜碱单体。
[0014] 进一步，所述步骤④中，洗脱剂为石油離和己酸己醋，所述己酸己醋与石油離的体 积比为8. 4:1.6。
[0015] 进一步，所述石蒜属植物为红花石蒜或稻草石蒜。
[0016] 进一步，所述石蒜属植物粉末为红花石蒜鱗茎粉末。
[0017] 与现有技术相比，本发明操作简单，提取时间短、提取率高、溶剂用量少、成本较 低，采用超声波协同酶法提取，石蒜碱得率为0. 1812% ;纯化工艺环保，且纯度高，可达 99. 4%。
【附图说明】
[001引图1为本发明酶用量对石蒜碱得率的影响不意图；
[0019] 图2为本发明酶解时间对石蒜碱得率的影响示意图；
[0020] 图3为本发明超声时间对石蒜碱得率的影响。
【具体实施方式】
[0021] W下结合附图及实施例对本发明做进一步说明。
[00巧实施例1
[0023] 本实施例包括W下步骤；（1)提取；称取经处理的石蒜粉末，W料液比1:10,比例 单位为g/mU加入pH为4. 5的水中，加入石蒜粉末质量1. 0% -3. 0%的纤维素酶与果胶酶 的混合酶，所述纤维素酶与果胶酶的质量比为1: 1，在50°C下酶解20-100min，然后超声波 处理5-25min，5000r/min离屯、20min，取上清液，即得石蒜碱提取液；
[0024] 似纯化
[0025] ①溶剂萃取；将步骤（1)提取的石蒜碱提取液用化OH调节抑至10,按体积比1:1 加入萃取剂立氯甲烧，摇匀，静置过夜，取下层氯仿化肥1调节抑至2,抽滤，得石蒜碱萃取 浓缩液；
[0026] ②阳离子交换树脂吸附；将步骤①中萃取浓缩液经肥1调节抑至2,用D-001型阳 离子交换树脂，W上样速率3BVA上样至饱和，用含1. 5mol/L氨水的70%己醇溶液W 3BV/ h的洗脱速率进行洗脱，干燥，得干燥物I ;
[0027] ⑨Ci8反相硅胶柱层析；C 18填料预处理，将20倍质量于步骤②中干燥物I的C18填 料装于层析柱中，然后W流动相（流动相；V(己膳）；V(磯酸盐）为16 ; 84)溶解层析 出来的层析物，上样，采用甲醇-水溶液分次洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干燥，得干 燥物II ;
[002引④正相硅胶柱层析；用经预处理的20倍质量于步骤⑨所得干燥物II的柱层析用 硅胶（200-300目）W柱直径-柱高湿法装柱，所述柱直径-柱高的比例为1:10,步骤⑨所 得干燥物II与硅胶混匀，加入洗脱剂溶解，所述洗脱剂为石油離和己酸己醋，所述己酸己醋 与石油離的体积比为8. 4:1. 6 ;蒸发溶剂后干法上样，洗脱，收集洗脱液，浓缩，真空冷冻干 燥，得干燥物III;
[0029] ⑥重结晶；将步骤④所得干燥物III经己醇溶解，再结晶得到石蒜碱粗品，过滤，在 50~60°C真空干燥得纯度为99. 4%的石蒜碱单体。
[0030] 石蒜属植物粉末为红花石蒜鱗茎粉末。
[003U 参照附图1，酶用量的影响情况，称取经处理的石蒜粉末2. O