一种抗肿瘤肽变体nc6及其应用
【专利说明】-种抗肿瘤化变体NC6及其应用
[00(川相关申请 本申请是专利申请号为201410312285. 2、名称为"一种抗肿瘤肤变体及其应用"的分案 申请。
技术领域
[0002] 本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及抗肿瘤肤变体。
【背景技术】
[0003] ND100是由1413、16111、1617、比611、2口1'〇、11'虹、口71'组成的八肤。体外及体内试验 均表明ND100具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，可用来制备抗肿瘤药物，用于治疗肿 瘤。
[0004] 在现有技术中，为了提高多肤的活性，针对多肤序列进行特异性的改变，从而寻找 活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该多肤的生物活性，申请人通过大量的实 验，针对多肤序列进行了氨基酸的改变，从而获得了比原始多肤本身具有更高抑制活性的 变体。
【发明内容】
[0005] 本发明涉及的多肤，序列如下： NC :AlaGluGlyLeu化oProT'hi'Tyr ; (NC1) lAlaGluGlyLeuRroProTlirlle ; (NC2) :AlaSerGlyLeuPro化oThrTyr ; (NC3) :AlaGluGlyLeuRroSerT'h:rTyr ; (NC4) :AlaGluGlyGlyLeuPro化oThrTyr ; (NC5) :AlaGluGlyGlyLeuProRroProT'h:rTyr ; (NC 6) :GlyAlaGluGlyLeu化oPro化oThrTyr ; (NC7) :AlaGlyGlyLeuRroProT'h:rTyr ; (NC8) :GlyAlaGlyGlyLeu化oProT'hi'Tyr ; (NC 9) :AlaGlyGlyLeuRroSerT'h:rTyr ; (NC 10) :GlyAlaGlyGlyLeuProSei'ThrTyr ; (NC 11) :GlyAlaGlyGlyLeuProRroProT'h:rTyr ; (NC 12) :AlaGlyGlyLeu化oPro化oThrTyr ; (NC 13) :AlaGlyGlyLeuRroProRroThrIle ; 对照 1 :AlaGluGlyLeu化oGlyT'hi'Tyr ; 对照 2 :AlaLeuGlyLeuRroProT'h:rTyr ; 本发明的多献合成后，可W做成游离态形式，也可W做成阳离子盐，如：TFA盐（兰氣乙 酸盐），HC1盐（盐酸盐），醋酸盐形式。
[0006] 本发明的多肤，可W选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治 疗。该些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身 给药。
【具体实施方式】
[0007] 实施例1 ;本发明多肤的人工化学合成 本发明的肤的制备采用液相合成法和活化醋逐个增长法，将本发明的肤的C端的第二 个氨基酸的氨基用Boc基（叔下氧撰醜基）保护，駿基用册Su (N-羟基玻巧醜亚胺）活化， 然后在KHC03溶液中与C端第一个氨基酸在3(TC水浴，反应2天。抽去有机溶剂，在冰浴中 用2mol/LHCl调抑3~4 (沉淀最多时），用己酸己醋抽提，饱和化C1洗3次，无水Na2S〇4干 燥，抽干，无水己離研磨，得带保护基的二肤。用50 % TFA ( H氣醋酸）处理，脱去Boc基，再 与N端带Boc保护基，C端用册Su活化的C端的第H个氨基酸缩合，用同样的方法逐个接 上氨基酸，最后用催化氨化法脱去Glu侧链上的保护基，用50 % TFA脱去本发明肤N端的 Boc基，得粗肤，粗肤用HPLC进行分离纯化，可得98%纯度的本发明的多肤。经过电喷雾质 谱测定，其序列与目标序列完全一致。
[000引实施例2 ;ND100的抗肿瘤活性 (1)体外活性测定： 采用细胞培养和细胞计数的方法，人肝癌细胞7721、胃癌细胞MKN、肺癌细胞A549 W各 自常规的培养基，视不同情况加入10%左右的小牛血清，用T-25培养瓶在37°C，5% C02 培养箱中单层培养。
[0009] 当细胞生长成单层后消化，用含1 %小牛血清的培养液制成细胞息液，按每孔1ml 接种到24孔培养板上，37°C、5% C〇2培养箱中培养化后，加入不同剂量的本申请的多肤， 对照组和实验组均设H个重复孔，对照组加入lOy 1的PBS，试验组加入不同剂量的本申请 的多肤，继续培养72小时后，吸出培养液，用PBS洗，然后每孔加入200 y 1消化液消化，待 细胞变圆后，加入800 y 1的PBS，在倒置显微镜下用血球计数板计数。
[00…]抑制率结果如下：_^^^
【主权项】
1. 一种抗肿瘤肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO :1，7所示。
2. 如权利要求1所述的肿瘤肽变体在制备抑制肿瘤药物中的用途。
3. 如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为肝癌、胃癌或肺癌。
4. 一种抗肿瘤药物制剂，它含有权利要求2所述的肿瘤肽变体以及药学上合适的载 体。
【专利摘要】本发明提供了一种抗肿瘤活性肽变体，该蛋白变体相对于野生型具有更强的抑制肿瘤细胞生长的效果。这些变体蛋白质和它们的衍生物可以用于包括肝癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的治疗。
【IPC分类】A61K38-08, A61P35-00, C07K7-06
【公开号】CN104672303
【申请号】CN201510068955
【发明人】马海龙
【申请人】马海龙
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2014年6月27日