一种甜菜花粉萌发的培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及甜菜杂交育种与生物技术领域，具体的说，涉及一种甜菜花粉萌发的 培养方法。
【背景技术】
[0002] 栽培甜菜包括叶用甜糖（leafbeet)，饲料甜菜（fodderbeet)，食用甜菜（garden beet)以及糖用甜菜（sugarbeet)，在农业、食品、医药具有广泛的应用。甜菜属于典型的 异花授粉自交不亲和作物，杂交育种是繁殖后代及选育新品种的主要方法。甜菜花粉萌发 培养为甜菜杂交、人工辅助授粉提供生命力较强的花粉，同时也为大批量植株花粉萌发活 力以及育性的快速鉴定提供了一种有效途径。
[0003] 甜菜花粉萌发率不但与品种类型、取花药的部位、花粉的成熟程度、取花粉时期有 关还受花粉培养的方法及条件的限制。
[0004]目前实验室常用的发粉萌发培养主要包括液体培养法和琼脂固体培养基培养法2 种方法。液体培养法是把花粉洒在载玻片或平皿中液体培养基直接进行花粉萌发培养。琼 脂固体培养基培养法是将融化的琼脂培养基铺在载玻片上，待琼脂凝固后接种花粉，放在 浸水的滤纸或纱布培养皿中培养箱中培养。液体直接培养法由于吸水过多，水合过度的花 粉萌发率不高；琼脂固体培养基培养法前期琼脂培养基的配制及铺片繁琐费时，均匀平铺 点样花粉不容易操作，为保证培养湿度需在平皿等容器中培养；以上两种方法均需将样品 从田间取回在试验室中进行操作。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是为了解决甜菜花粉液体培养基直接培养萌发率低，载玻片琼脂糖 固体培养操作繁琐、未开裂化药内花粉点样不易操作的技术问题。通过改善甜菜花粉萌发 离体培养条件，提高花粉离体培养萌发率，提供一种高效、操作简单的甜菜花粉萌发培养的 方法。
[0006] 本发明为了弥补以上方法的不足，发明了新的一种花粉培养方法，以滤纸代替凝 固琼脂做为花粉附着载体，置于Effendorff离心管中，微量培养液浸润后盖上塑料管盖进 行培养，既保证花粉培养所需的湿度又防止过度水合。本发明方法易操作，培养条件及方式 易于控制可在田间直接进行取样培养；成本低、培养时间短，萌发率高，在甜菜花粉活力鉴 定及甜菜杂交育种生产中具有广泛的应用前景。本发明为实现异花授粉，开展杂交育种研 宄工作提供基础，找到一种诱导甜菜花粉高效明发的培养方法。
[0007] 本发明的一种甜菜花粉萌发的培养发法，它包含以下步骤：取甜菜花粉，以滤纸为 花粉培养载体，将附着有花粉的滤纸置于离心管中，然后倒入培养液浸润花粉后盖上离心 管盖，再置于遮光袋或盒中，在温度为23°C~30°C的条件下进行培养5~24h，即完成所述 的甜菜花粉萌发的培养。
[0008] 花粉萌发是植物受精的先决条件，它决定着胚及胚乳的形成，种子的质量，并对 后代植物体的生长发育有重要的影响。因此，甜菜花粉的人工发芽培养，不仅仅是植物生 理学研宄的问题，也是甜菜育种中自交不亲合性及甜菜属种间杂交不亲和性研宄的重要课 题。
[0009] 本发明的关键是找到了简易的甜菜花粉萌发培养方法，微量培养液浸润滤纸代替 凝固琼脂，作为花粉附着载体，盖盖试管中进行花粉萌发培养。该发明是在多年的甜菜花粉 培养及对花粉活力测定基础上，培养基以5~35%的蔗糖、0~0. 1 %的硼酸和0. 01 %的硝 酸钙基本培养基组分，设置培养温度为10~30°C，培养基pH值为4. 0~8. 0,通过对萌发率 (花粉萌发数/花粉总数）和花粉管长度指标进行测定分析，筛选出适宜花粉萌发的培养液 及培养条件，首次建立了甜菜游离花粉萌发培养方法，花粉萌发率均明显高于已有方法。
[0010] 本发明所述的一种甜菜花粉萌发的培养方法，通过实施可达到以下有益效果：
[0011] 1、本发明解决了琼脂固体培养基培养法前期琼脂培养基的配制及铺片繁琐费时， 均匀平铺点样花粉不容易操作的技术问题，培养时间短，萌发率高；
[0012] 2、操作方法简单易行，培养液配制简单，培养条件及方式易于控制，可在田间直接 进行取样培养，便于批量测定田间植株的花粉萌发活力；
[0013] 3、滤纸代替琼脂粉，廉价的Effendorff塑料离心代替载玻片和培养皿，成本低， 培养液成分简单，价格便宜，在进行大量的花粉萌发培养具有较优的综合效果；
[0014] 4、本发明解决了甜菜花粉在直接的液体培养基上萌发率低和花粉管生长缓慢的 技术问题，可为甜菜人工授粉技术研发奠定基础。
[0015] 本发明方法改善了甜菜花粉萌发离体培养条件，提高了甜菜花粉离体培养萌发 率；本发明方法易操作，培养条件及方式易于控制可在田间直接进行取样培养；成本低、培 养时间短，解决花粉萌发率低，花粉管较短和不易授粉受精的问题，在甜菜花粉活力鉴定及 甜菜杂交育种生产中具有广泛的应用前景。
【附图说明】
[0016]图1为本发明方法培养的花粉萌发图片。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0017] 一：一种甜菜花粉萌发的培养发法，它包含以下步骤：取甜菜花粉， 以滤纸为花粉培养载体，将附着有花粉的滤纸置于离心管中，然后倒入培养液浸润花粉后， 再置于遮光袋或盒中，在温度为23°C~30°C的条件下进行培养5~24h，即完成所述的甜菜 花粉萌发的培养。
【具体实施方式】 [0018] 二：本实施方式与一不同点在于：滤纸剪成上宽下窄 梯形形状纸条。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0019] 三：本实施方式与一不同点在于：滤纸条的面积为离 心管侧壁面积的1/3。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0020] 四：本实施方式与一不同点在于：将附着有花粉的滤 纸置于离心管中是指：离心管底部留有高度为0. 8mm~1. 5mm的未被滤纸覆盖的空间。其 它与一相同。
[0021]
【具体实施方式】五：本实施方式与【具体实施方式】一不同点在于：花粉是指未开裂花 药花粉囊内花粉以及花药开裂时的花粉。其它与【具体实施方式】一相同。
【具体实施方式】 [0022] 六：本实施方式与一不同点在于：培养液是由10%~ 30%蔗糖、0. 05%~0. 01 %硼酸、0. 01 %硝酸钙和余量的水组成。其它与一相 同。
【具体实施方式】 [0023] 七：本实施方式与一不同点在于：培养液的pH为 5. 5~6. 5。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0024] 八：本实施方式与一不同点在于：培养温度为25°C~ 28°C。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0025] 九：本实施方式与一不同点在于：培养条件为避光培 养。其它与一相同。
【具体实施方式】 [0026] 十：本实施方式与一不同点在于：所述的甜菜是指 甜菜（Beta)属内的所有种和亚种，包括栽培甜菜和野生甜菜，其中栽培甜菜包括叶用甜 糖（leafbeet)、饲料甜菜（fodderbeet)、食用甜菜（gardenbeet)以及糖用甜菜（sugar beet)。其它与一相同。
[0027] 本
【发明内容】
不仅限于上述各实施方式的内容，其中一个或几个【具体实施方式】的组 合同样也可以实现发明的目的。
[0028