斑节对虾热休克蛋白40基因及其编码的蛋白的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明公开了斑节对虾热休克蛋白40基因及其编码的蛋白，属于生物基因技术 领域。
【背景技术】
[0002] 热休克蛋白（heatshockproteins,HSPs)又称应激蛋白，是机体细胞在一些应激 原（如环境高温、缺氧、重金属中毒、氧化应激、感染、饥饿、创伤、代谢毒物等）的诱导下，使 HSP基因被激活，且商效表达的一组在进化上商度保守的蛋白质，对机体免受:应激因素的损 害具有重要作用。
[0003]Hsp40蛋白是一类重要的分子伴侣，具有重要的生理功能。研究表明Hsp40蛋白在 生物体正常及热激、盐、重金属、毒物代谢等胁迫下参与蛋白质的折叠、转运、分泌和目标蛋 白的降解等作用。Hsp40能够通过调节Hsp40/Hsp70的ATPase活性，使得Hsp70结合的底 物多肽发生折叠，促进部分变性的蛋白复性（重新折叠）来保护胁迫损害的细胞并使其恢 复正常功能。Hsp40参与维持蛋白质结构的稳定和变性蛋白的复性作用，是一种与细胞多种 生命活动密切相关的重要蛋白质。
[0004] 斑节对虾的养殖密度低、抗逆性差一直是困扰斑节养殖业的一个重要因素，为提 高其生长速度、养殖密度以及抗逆性，进而提高斑节对虾的产量，对其内在的生长、抗逆性 相关的分子机理进行研究已是斑节对虾繁育、养殖必不可少的工作了。
【发明内容】
[0005] 针对上述问题，本发明的目的是以实验室高通量测序获得的EST序列为基础设计 的PCR扩增引物，并通过RACE技术克隆到斑节对虾热休克蛋白40基因的全表达序列；此外 通过斑节对虾热休克蛋白40基因设计原核表达引物，对热休克蛋白40在体外进行重组表 达，为研究斑节对虾热休克蛋白40在斑节对虾中的作用奠定基础，而且可以为斑节对虾养 殖过程中所出现的对各种理化刺激应答效应从分子层面提供理论基础。
[0006] 本发明提供的热休克蛋白40基因，该基因序列如SEQIDNO: 1所不。
[0007] 该基因的制备方法依次包括下述步骤：
[0008] 1、总RNA的提取
[0009] 取健康斑节对奸，解剖，取卵巢组织，并将组织于lmLTrizol(Invitrogen，日本） 中匀浆，按Trizol试剂盒使用手册提取斑节对虾总RNA并用DEPC水悬浮，电泳观察所提取 RNA的完整性，并置于-80°C保存。
[0010] 2、cDNA第一链的合成
[0011] 取上述斑节对奸总RNA2iiL与反转录引物（oligo-dT/ adaptor(5 '-GGCCACGCGACTAGTAC(T) 16-3，）1iiL(10pmol/L)混合在反转录酶（M-MLV， Promega，USA)的作用下合成cDNA-链，反应条件：42°C60min，70°C15min。
[0012] 3、引物设计依据，引物合成的方法
[0013] 根据已有的斑节对虾热休克蛋白40的EST序列设计引物：
[0014]Pm-HSP40cDNA全长扩增及表达所用的引物
【主权项】
1. 斑节对虾热休克蛋白40基因，其特征在于，所述的基因序列如SEQIDNO: 1所示。
2. 权利要求1所述的斑节对虾热休克蛋白40基因编码的蛋白，其特征在于，所述蛋白 的氨基酸序列如SEQIDN0:2所示。
3. 含权利要求1或2所述基因的重组质粒。
4. 根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组载体为将权利要求1或2所 述基因插入pET21a质粒的多克隆位点得到的重组质粒。
5. 含有权利要求1或2所述基因的重组菌。
6. 根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌是将权利要求4所述重组质 粒转化大肠杆菌BL21得到的。
7. 权利1或2所述的斑节对虾热休克蛋白40在大肠杆菌中体外重组表达。
【专利摘要】本发明公开了斑节对虾热休克蛋白40基因及其编码的蛋白，该基因为研究斑节对虾热休克蛋白40在斑节对虾中的作用奠定基础，而且可以为斑节对虾养殖过程中所出现的对各种理化刺激应答效应从分子层面提供理论基础；其技术要点，该基因序列如SEQ ID NO:1所示；编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；属于生物基因技术领域。
【IPC分类】C07K14-435, C12N1-21, C12N15-70, C12N15-12
【公开号】CN104694547
【申请号】CN201510082048
【发明人】邱丽华, 傅明骏, 赵超, 史进选, 江世贵, 周发林
【申请人】中国水产科学研究院南海水产研究所
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年2月13日