一种大肠杆菌bbm2015001菌株及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明提供了一种大肠杆菌BBM2015001(EscherichiacoliBBM2015001)的衍生 菌株，以及该菌株在药物中的用途，属于药品技术领域。
【背景技术】
[0002] 外周感染是外界病原微生物侵入人体所引起的局部组织和全身性炎症反应。越来 越多的研宄表明，感染引起的外周炎症会对中枢神经系统造成影响，引起认知功能的损伤， 影响正常的工作和学习。在多种外周炎症中，手术创伤诱导的炎症反应是较为常见的一种 外周炎症，可能导致神经炎症，诱发术后认知功能障碍。该病多发于65岁以上的老年患者， 国内报道术后2~7天严重精神障碍的发生率是3. 26 %~4. 80%，常在术后恢复的过程中 持续数月甚至数年，对患者造成严重的短期或长期影响。目前研宄表明，手术创伤或者感染 引起的高水平炎症因子，是导致术后认知功能障碍的重要诱因，不仅激活了外周免疫反应， 同时也激活中枢神经系统的免疫反应。如何有效地治疗和预防手术后的外周感染及炎症， 将成为治疗神经炎症及认知水平障碍的主要难题。
【发明内容】
[0003] 本发明提供了一种大肠杆菌BBM2015001(EscherichiacoliBBM2015001)菌株， 该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCN0:M2015151，保藏日期为 2015年3月24日，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。
[0004] 本发明所提供的大肠杆菌BBM2015001菌株能够用于制备预防及治疗因外周感染 而导致的神经炎症的药物中，该菌株为绿色荧光蛋白内源表达的尿路致病性大肠杆菌经过 转基因操作后的衍生菌株，为革兰氏阴性菌株，其致病性较低。
[0005] 将本发明所提供的大肠杆菌BBM2015001菌株接种在LB培养基培养至对数生长 期，离心并重悬于磷酸缓冲液（PBS)中，分多次以不同剂量注射到6-8周的FVB小鼠腹腔 内，每次间隔为24h，每次注射选用当天培养的BBM2015001菌株。多次注射完成24h后小鼠 获得良性炎症状态。
[0006] 小鼠经诱导获得良性炎症后，其先天性免疫系统得到全面加强。小鼠腹腔作为良 性炎症诱导剂注射的组织，我们称为良性炎症诱导灶（简称诱导灶）。诱导灶内的免疫细胞 获得免疫耐受，巨噬细胞的吞噬能力得到增强，⑶llb+粒细胞下调表面TLR4、⑶86、MHCII表 达量；诱导灶外的外周组织和器官中，包括脾脏和血液中的⑶llb+粒细胞上调表面TLR4、 ⑶86、MHCII表达量，提高免疫监视的强度。
[0007] 良性炎症经过行为生物学实验检测，没有行为测试异常，在诱导的过程中不会激 活中枢神经系统。和其他免疫刺激不同，良性炎症也不会引起下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA axis)释放皮质酮抑制免疫系统的功能。在诱导过程中，诱导剂BBM2015001菌株剂量逐次 增强，作为先天性免疫系统的"负重训练"。
[0008] 经过以上试验验证，本发明所提供的大肠杆菌BBM2015001菌株能够用于制备预 防及治疗因外周感染而导致的神经炎症的药物中。
【附图说明】
[0009] 图1为本发明实施例中旷场实验结果图；
[0010] 图2为本发明实施例中神经系统细胞因子上调的抑制作用的实验结果图；
[0011] 图3为本发明实施例中大脑切片海马体附近的小胶质细胞的Iba-1抗原染色结 果；
[0012] 图4为本发明实施例中大脑切片海马体附近的小胶质细胞的Iba-1抗原标记面积 占总切片面积百分比图。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体实施例对本发明做详细具体的说明，但是本发明的保护范围并不局 限于以下实施例。
[0014]本发明所提供的大肠杆菌BBM2015001(EscherichiacoliBBM2015001)菌株，该 菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCN0:M2015151，保藏日期为2015 年3月24日，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。
[0015] 实验例1:良性炎症抗静脉注射菌株BBM2015001诱导的病态行为效果研宄
[0016] 1.实验材料：
[0017] 1. 1 药物：
[0018] 大肠杆菌BBM2015001菌株的磷酸缓冲重悬液；
[0019] 对照药物：磷酸缓冲液。
[0020] 1.2动物：6-8周龄的FVB野生型小鼠，20-25g。
[0021] 2?方法
[0022] 2. 1良性炎症的诱导：
[0023] 将FVB小鼠分为两组：良性炎症诱导组和对照组，每组10只。
[0024] 将大肠杆菌BBM2015001菌株接种在LB培养基培养至对数生长期，离心并重悬于 磷酸缓冲液（PBS)中，分三次以不同剂量注射到6-8周的FVB小鼠腹腔内，每次间隔为24h， 每次注射选用当天培养的BBM2015001菌株。
[0025] 第一天注射剂量：BBM2015001菌株2.Ox107CFU重悬于100y1PBS制成混合液注 射；对照组小鼠进行磷酸缓冲液腹腔注射。
[0026] 第二天注射剂量：BBM2015001菌株2. 5x108CFU重悬于100y1PBS制成混合液注 射；对照组小鼠进行磷酸缓冲液腹腔注射。
[0027] 第三天注射剂量：BBM2015001菌株1.Ox109CFU重悬于100y1PBS制成混合液注 射；对照组小鼠进行磷酸缓冲液腹腔注射。
[0028] 第三天注射24h后小鼠获得良性炎症状态。
[0029] 2. 2免疫刺激：
[0030] 取BBM2015001菌株2. Ox 109CFU重悬于200 y 1 PBS制成混合液，在小鼠进入良 性炎症状态后，经尾静脉注射给良性炎症诱导组和对照组小鼠。
[0031] 2. 3旷场行为学实验：
[0032] 小鼠接受免疫刺激24h后进行旷场实验，旷场实验装置由40x40x25cm的不透明塑 料盒构成，将小鼠放入旷场角落后，使用仪器记录小鼠在5min中内移动的总距离。
[0033] 3.结果与结论：
[0034] 旷场实验通过检验小鼠的运动状态获得小鼠的病态行为信息，实验结果如图1所 示。从图1可知，使用本发明的BBM2015001菌株诱导良性炎症组与磷酸缓冲液对照组相 比，单位时间内的总运动量有显著性差异，p〈〇. 05,证明诱导良性炎症的小鼠在静脉注射菌 株BBM2015001后没有明显的病态行为。由于神经炎症的行为学症状是在免疫刺激后表现 病态行为，因此良性炎症能够对神经炎症诱发的病态行为有较好的预防效果。
[0035] 实验例2 :BBM2015001菌株对腹腔细菌感染诱导的神经系统细胞因子上调的抑制 作用研宄
[0036] 1. 1 药物：
[0037] 大肠杆菌BBM2015001菌株的磷酸缓冲重悬液；
[0038] 对照药物：磷酸缓冲液。
[0039] 1.2动物：6-8周龄的FVB野生型小鼠，20-25g。
[0040] 2?方法
[0041] 2. 1良性炎症的诱导及免疫刺激：
[0042] 将FVB小鼠分为三组，阴性对照组，良性炎症组和阳性对照组，每组5只。所有注 射均为腹腔注射，注射剂量均为100y1按照下表进行处理：
【主权项】
1. 一种大肠杆菌BBM2015001(EscherichiacoliBBM2015001)菌株，该菌株保藏于中 国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCN0:M2015151。
2. 权利要求1所述的大肠杆菌BBM2015001菌株的用途，其特征在于：用于制备预防及 治疗因外周感染而导致的神经炎症的药物中。
【专利摘要】本发明提供了一种大肠杆菌BBM2015001(Escherichia coli BBM2015001)菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2015151，保藏日期为2015年3月24日，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。本发明所提供的大肠杆菌BBM2015001菌株能够用于制备预防及治疗因外周感染而导致的神经炎症的药物中，该菌株为绿色荧光蛋白内源表达的尿路致病性大肠杆菌经过转基因操作后的衍生菌株，为革兰氏阴性菌株，其致病性较低。CCTCC NO:M 201515120150324
【IPC分类】A61K35-74, A61P25-28, C12R1-19, C12N1-20
【公开号】CN104711214
【申请号】CN201510164977
【发明人】全宁
【申请人】武汉联程生物科技有限公司
【公开日】2015年6月17日
【申请日】2015年4月9日