一种peg化多肽及其制备方法和其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药领域，具有涉及一种抗HIV多肤及其制备方法和其用途。
【背景技术】
[0002] 从1981年美国首次发现并报导艾滋病至今，艾滋病的防治一直没有得到有效解 决。艾滋病由人类免疫缺陷病毒（HIV)感染引起，目前上市的HIV的治疗性药物多为针对 病毒逆转录酶、整合酶、蛋白酶等的一些小分子酶抑制剂，由于HIV的超高突变性，使得该 些小分子特效药物正在逐渐退化为常效、甚至无效药物。近年来，随着HIV入侵宿主细胞分 子机制的逐步阐明，抑制该过程的多肤药物逐渐成为艾滋病防治领域的研究热点，该种多 肤药物可特异性结合HIV囊膜上的融合蛋白从而抑制病毒进入宿主细胞，瑞± Roche和美 国Trimeris公司共同研制的T-20 (商品名：化zeon)是目前唯一上市的抗HIV多肤药物， 与传统的小分子抗HIV药物相比较，T-20具有很强的对抗突变株的能力，且无毒副作用，自 2003年上市至今已在艾滋病治疗中占有不可替代的位置。
[0003] 近年来，随着生物技术的快速发展，越来越多的多肤药物在疾病的预防和治疗中 得到应用。虽然多肤类药物的作用位点专一、疗效确切，但溶解度低、免疫原性高、易被蛋白 酶降解和被肾脏清除等缺陷严重地制约了其临床应用。抗HIV多肤也存在同样问题，T-20 注射后很快会被患者体内血浆蛋白酶降解，患者通常需要1天多于2次的注射治疗，在美国 注射T-20-年要花费两万美元，在欧洲一年要花费两万五千美元，昂贵的药费使得T-20的 应用受到极大限制。因此，研究并建立延长T-20和皿212体内半衰期、提高其生物利用率 的化学修饰方法与技术对于抗HIV多肤药物的临床应用至关重要。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种PEG化多肤及其制备方法和其应用。
[0005] 本发明提供的一种PEG化多肤，具有式I所示结构：
[0006]
【主权项】
1. 一种PEG化多肽，具有式I所示结构：
式I中，X为1)或2)所述的多肽：1)具有序列表中SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列 的多肽；2)将序列表中的SEQ ID N2 . 1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取 代和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多肽；Y取代基选自式I -1所 示取代基，其中PEG表示聚乙二醇，η表示PEG的平均分子量，m表示甲氧基，所述甲氧基与 PEG的另一端即与连有N-取代的马来酰亚胺的相对一端连接： mPEGn 式 I _1 ; Z选自含有巯基的氨基酸；m为O或I ;n为O或I ;p为O或I ;q为O或I ;p和q不同 时为〇 ;m和η不同时为O ;p为O时m也为O ;q为O时η也为O ;优选的，式I中m为O或 1;]1为0或1$为0或1;9为0或1$和9不同时为1或0;1]1和11不同时为0或1 ;口为 O时，m也为O ;q为O时，η也为O ;再优选的，式I中m为I ;n为O ;p为I ;q为0。
2. 根据权利要求1所述的PEG化多肽，其特征在于：所述Y取代基中，η为2000-5000 ; 优选2000或5000 ;最优选2000。
3. 根据权利要求1或2所述的PEG化多肽，其特征在于：所述Z选自半胱氨酸。
4. 一种多肽定点PEG化修饰方法，所述方法包括：将式II所示化合物同式III所示化合 物反应即可：
式II中，Y取代基选自式I -1所示取代基，其中PEG表示聚乙二醇，η表示PEG的平均 分子量，m表示甲氧基，所述甲氧基与PEG的另一端即与连有N-取代的马来酰亚胺的相对 一端连接： mPEGn 式 I _1 ; 式III中，X为1)或2)所述的多肽：1)具有序列表中SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列的 多肽；2)将序列表中的SEQ ID N2 . 1的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代 和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多肽；Z选自含有巯基的氨基酸；p 为0或I ;q为0或I ;p和q不同为0。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述式III中，Z选自半胱氨酸。
6. 根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述Y取代基中，η为2000-5000 ;优 选2000或5000 ;最优选2000。
7. 根据权利要求4-6任一所述的方法，其特征在于：所述式II所示化合物同式III所示 化合物反应的pH范围为7. 2-9. 5 ;优选7. 2、8. 0或9. 5 ;最优选7. 2。
8. 根据权利要求4-7任一所述的方法，其特征在于：所述式II所示化合物同式III所示 化合物反应的反应溶剂为缓冲液。
9. 权利要求1-3任一所述的PEG化多肽或由权利要求4-8任一所述的方法制备得到的 PEG化多肽在制备下述至少一种产品中的应用： 1) 抗HIV产品 2) 治疗和/或预防艾滋病的产品。
10. -种多肽，为1)或2)所述的任一多肽： 1) 具有序列表中SEQ ID Ns . 2、SEQ ID Ns . 3或SEQ ID Ns . 4所示的氨基酸序列的多 肽； 2) 将序列表中的SEQ ID Ns . 2、SEQ ID Ns . 3或SEQ ID Ns . 4的氨基酸残基序列经过 一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多 肽。
【专利摘要】本发明公开了一种PEG化多肽及其制备方法和其应用。该PEG化多肽的结构式如式Ⅰ所示：。式Ⅰ中X基团优选抗HIV多肽T-20，Y选自PEG化合物，Z优选为含巯基的半胱氨酸。本发明的PEG化多肽与T-20相比，体内半衰期延长、药效长、稳定性高。本发明公开的多肽定点PEG化修饰方法，可在温和的反应条件下进行，方法简单高效。
【IPC分类】A61P31-18, A61K47-48, A61K38-16, C07K1-107, C07K14-16
【公开号】CN104725491
【申请号】CN201310706149
【发明人】李学兵, 程水红, 马丽英, 邵一鸣
【申请人】中国科学院微生物研究所, 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年12月19日