一种黑僵菌的培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物培养领域，具体的，涉及一种黑僵菌的培养方法。
【背景技术】
[0002]黑僵菌(Metarhizium anisopliae)为一种可以杀死昆虫的真菌,其应用范围有鳞翅目昆虫:斜纹夜蛾(黑肚虫)、甜菜夜蛾(管仔虫)、小菜蛾(吊丝虫)、玉米穗虫(青虫)等。鞘翅目昆虫:金龟子(鸡母虫)、叩头虫(金针虫)等。直翅目昆虫:蝗虫等。黑僵菌分生孢子被害虫摄食后，沿肠道进入中肠，在中肠中释放出毒素，使中肠细胞内的线粒体和内质网结构改变，细胞核萎缩而死亡。受黑僵菌感染死亡的幼虫之后体表满布分生孢子，借由分生孢子的传播于田间行成重复有效的感染源。
[0003]现有的黑僵菌培养方法为谷壳、麦麸等固体培养基进行培养，孢子液接种，7天后开始收孢子，其孢子量一般在100亿/克。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种新的黑僵菌的培养方法。
[0005]本发明提供的技术方案如下:
[0006]一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:采用香蕉去皮之后作为培养基，将黑僵菌孢子或菌体接种到培养基上进行培养。
[0007]较佳地，前述的一种黑僵菌的培养方法，包括如下步骤:
[0008](I)培养容器灭菌，待用；香蕉去皮，高压灭菌后冷却，加到培养容器上待用；
[0009](2)接种:将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上；
[0010](3)培养:培养温度控制在20?30°C，培养室相对湿度控制在95%以上，培养至菌丝体满布培养基表面；
[0011](4)获取:待培养基表面菌丝全面复盖变黑，培养室的相对湿度缓慢降低，至培养基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。
[0012]较佳地，步骤(I)的所述的培养容器为开放式的培养容器，例如可以采用敞口容器，如盘状、碗状、长方体等各种形状。
[0013]较佳地，步骤(I)的香蕉培养基在培养容器上的厚度为l_5cm。更佳地为3_4cm。
[0014]较佳地，步骤(2)的接种比例为，按重量比，接种的孢子液体与培养基之间的液固比为 0.5-5:10o
[0015]较佳地，步骤(3)培养室温度控制在20?24°C ;培养室相对湿度在24h内控制在95%以上，24?48h内控制在100%，可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水。
[0016]较佳地，步骤(4)中，培养室的温度提高到25°C -26°C，培养室的相对湿度缓慢降低，培养至第5d，培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
[0017]采用本发明的方法，培养周期可以缩短至5天，而产品的含孢子量可达到1000亿/g，比现有技术提高10倍以上。本发明可采用次品香蕉，其价格低廉，成本低。
【具体实施方式】
[0018]实施例1
[0019]香蕉去皮作为固体培养基。固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2，保压60min,冷却后待用常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100°C保温2h，冷却待用。
[0020]洗干净培养盘，所述的培养盘为长方形，规格为50Cm*75Cm*10Cm，然后放于常压灭菌柜灭菌30min，冷却待用。拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦洗，培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。培养支架用4脚式长方体钢架结构，上、下间距20cm，支架先用新洁尔灭擦洗，然后与培养室一起进行熏蒸灭菌。
[0021]采用拌种机进行接种，黑僵菌孢子接种液(含孢子15-1O6个/ml)与培养基的液固比为0.5:1.5，固体培养基厚度为3-4cm。
[0022]培养室温度控制在20?24°C，特别在第24?64h降低室温，以控制室温不超过300C。培养室相对湿度在24h内控制在95%以上，24?48h内控制在100%，可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水，这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。
[0023]揭盖、培养3d后，待培养基表面菌丝全面复盖变黑，可揭去培养盘表面的簸箕，两盘对合，中间留些间隙，培养室的温度可提高到25°C，培养室的相对湿度缓慢降低，培养至第5d，培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
[0024]5天开始收孢，收孢后，产品含孢量超过1000亿/克。
[0025]实施例2
[0026]香蕉去皮作为固体培养基。固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2，保压60min,冷却后待用常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100°C保温2h，冷却待用。
[0027]洗干净培养盘，所述的培养盘为长方形，规格为50Cm*75Cm*10Cm，然后放于常压灭菌柜灭菌30min，冷却待用。拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦洗，培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。培养支架用4脚式长方体钢架结构，上、下间距20cm，支架先用新洁尔灭擦洗，然后与培养室一起进行熏蒸灭菌。
[0028]采用拌种机进行接种，黑僵菌孢子接种液(含孢子15-1O6个/ml)与培养基的液固比为2:10，固体培养基厚度为2-3cm。
[0029]培养室温度控制在20?24°C。培养室相对湿度在24h内控制在95%以上，24?48h内控制在100%，可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水，这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。
[0030]揭盖、培养3d后，待培养基表面菌丝全面复盖变黑，可揭去培养盘表面的簸箕，两盘对合，中间留些间隙，培养室的温度可提高到25°C，培养室的相对湿度缓慢降低，培养至第5d，培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
[0031]5天开始收孢，收孢后，产品含孢量超过1000亿/克。
[0032]实施例3
[0033]香蕉去皮作为固体培养基。固体培养基的灭菌高压灭菌压力为1.2kg/cm2，保压60min,冷却后待用常压灭菌，利用蒸气消毒柜消毒，100°C保温2h，冷却待用。
[0034]洗干净培养盘，所述的培养盘为长方形，规格为50cm*75cm*10cm，然后放于常压灭菌柜灭菌30min，冷却待用。拌种机及培养室的灭菌采用千分之一的新洁尔灭溶液作表面擦洗，培养室每立方米空间用5ml福尔马林溶液加高锰酸钾进行熏蒸灭菌。培养支架用4脚式长方体钢架结构，上、下间距20cm，支架先用新洁尔灭擦洗，然后与培养室一起进行熏蒸灭菌。
[0035]采用拌种机进行接种，黑僵菌孢子接种液(含孢子15-1O6个/ml)与培养基的液固比为1:10，固体培养基厚度为5cm。
[0036]培养室温度控制在20?24°C，特别在第24?64h降低室温，以控制室温不超过300C。培养室相对湿度在24h内控制在95%以上，24?48h内控制在100%，可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水，这时培养基的内外已长满菌丝在培养基表面。
[0037]揭盖、培养3d后，待培养基表面菌丝全面复盖变黑，可揭去培养盘表面的簸箕，两盘对合，中间留些间隙，培养室的温度可提高到25°C，培养室的相对湿度缓慢降低，培养至第5d，培养基里外都长满了乳黄色的孢子这时可进行干燥处理。
[0038]5天开始收孢，收孢后，产品含孢量超过1000亿/克。
[0039]上述仅为本发明的具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。
【主权项】
1.一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:采用香蕉作为培养基，将黑僵菌孢子或菌体接种到培养基上进行培养。
2.如权利要求1所述的一种黑僵菌的培养方法，包括如下步骤: (1)培养容器灭菌，待用；香蕉去果皮，高压灭菌后冷却，加到培养容器上待用； (2)接种:将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上； (3)培养:培养温度控制在20?30°C，培养室相对湿度控制在95%以上，培养至菌丝体满布培养基表面； (4)获取:待培养基表面菌丝全面复盖变黑，培养室的相对湿度缓慢降低，至培养基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。
3.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:步骤(I)的所述的培养容器为开放式的培养容器。
4.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:步骤(I)的香蕉培养基在培养容器上的厚度为l_5cm。
5.如权利要求2所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:步骤(2)的接种比例为，按重量比，液固比为0.5-5 =10
6.如权利要求1所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:步骤(3)培养室温度控制在20?24°C ;培养室相对湿度在24h内控制在95%以上，24?48h内控制在100%，可通过每天喷无菌水来调节培养室的相对湿度，2d后停止喷水。
7.如权利要求6所述的一种黑僵菌的培养方法，其特征在于:步骤(4)中，培养室的温度提高到25°C -26°C，培养室的相对湿度缓慢降低，培养至第5d，培养基里外都长满乳黄色的孢子时可进行干燥处理。
【专利摘要】本发明公开了一种黑僵菌的培养方法，其包括如下步骤：（1）培养容器灭菌，待用；香蕉去皮,高压灭菌后冷却，加到培养容器上待用；（2）接种：将黑僵菌孢子或菌体接种到灭菌后的香蕉上；（3）培养：培养温度控制在20～30℃，培养室相对湿度控制在95%以上,培养至菌丝体满布培养基表面；（4）获取：待培养基表面菌丝全面复盖变黑，培养室的相对湿度缓慢降低,至培养基里外都长满了乳黄色的孢子时进行干燥处理。采用本发明的方法，培养周期可以缩短至5天，而产品的含孢子量可达到1000亿/g，比现有技术提高10倍以上。本发明可采用次品香蕉，其价格低廉，成本低。
【IPC分类】C12R1-645, C12N1-14
【公开号】CN104726341
【申请号】CN201310705759
【发明人】陈丽萍
【申请人】漳州市英格尔农业科技有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年12月19日