Cyp4v2基因突变体及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及CYP4V2基因突变体及其应用。具体地，本发明涉及分离的编码CYP4V2 突变体的核酸，分离的多肽，筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品的方法，筛选易 感原发性结晶样视网膜变性的生物样品的系统，用于筛选易感原发性结晶样视网膜变性的 生物样品的试剂盒，构建体以及重组细胞。
【背景技术】
[0002] Bietti，s结晶样视网膜变性（Bietti，scrystallineCorneoretinal dystrophy，简称B⑶）是罕见的遗传性致盲疾病，在全世界的发病率约为1/24000,其高发 人群是中国人，在我国的发病率约为1/4000。B⑶患者通常20- 30岁发病，40- 50岁致 盲，目前已经成为威胁全球青年和中年人群视觉功能、视觉质量的主要眼部疾病，最终严重 影响患者的生活质量，给家庭和社会带来了巨大的负担。BCD是由于视网膜感光细胞(包括 视锥细胞和视杆细胞）和视网膜色素上皮细胞变性，伴随进行性脉络膜血管萎缩、硬化而导 致的致盲性遗传性眼病。B⑶的遗传方式主要是常染色体隐性遗传（autosomarecessive BCD，简称为ARBCD)。
[0003]目前原发性BCD的基因学方面的研究较少，其致病相关机制仍不明确。因而，目前 对原发性BCD尤其是其致病基因的研究仍有待深入。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种能够有效筛选易感原发性结晶样视网膜变性（BCD)的生物样品的方法。
[0005] 本发明是基于发明人的下列工作完成的：发明人通过外显子组测序、Sanger测 序验证、蛋白结构分析的方法确定了原发性结晶样视网膜变性的一个新的致病突变-- CYP4V2基因的c. 31C>T突变。
[0006] 进而，根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的编码CYP4V2突变体的核 酸。根据本发明的实施例，所述核酸与SEQIDN0 :1相比，具有c. 31C>T突变，即相对于野 生型CYP4V2基因，本发明的CYP4V2基因突变体的cDNA第31位碱基C突变为T。根据本发 明的实施例，发明人确定了CYP4V2基因的突变体，该突变体与原发性结晶样视网膜变性的 发病密切相关，从而通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品 是否易感原发性结晶样视网膜变性。
[0007] 根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肽。根据本发明的实施例，与 SEQIDN0:2相比，所述分离的多肽具有p.QllX突变，即该突变是由于c. 31C>T突变而引 起的，具体地，相对于野生型CYP4V2,本发明的分离的多肽(即CYP4V2突变体)第11位氨基 酸由Gin突变为终止码。通过检测生物样品中是否表达该多肽，可以有效地检测生物样品 是否易感原发性结晶样视网膜变性。
[0008] 根据本发明的第三方面，本发明提出了一种筛选易感原发性结晶样视网膜变性的 生物样品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：从所述生物样品提取核酸 样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列与SEQIDNO:1相比，具有 c. 31C>T突变是所述生物样品易感原发性结晶样视网膜变性的指示。通过根据本发明实施 例的筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品的方法，可以有效地筛选易感原发性结 晶样视网膜变性的生物样品。
[0009] 根据本发明的第四方面，本发明提出了一种筛选易感原发性结晶样视网膜变性的 生物样品的系统。根据本发明的实施例，该系统包括：核酸提取装置，所述核酸提取装置用 于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装置与所述核酸 提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，以便确定所述核酸样本的核酸序列；判断装 置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，以便基于所述核酸样本的核酸序列与SEQ IDN0 :1相比，是否具有c. 31C>T突变，判断所述生物样品是否易感原发性结晶样视网膜变 性。利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品的方 法，从而可以有效地筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品。
[0010] 根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易感原发性结晶样视网膜变 性的生物样品的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒含有：适于检测CYP4V2基因突变 体的试剂，其中与SEQIDN0:1相比，该CYP4V2基因突变体具有c. 31C>T突变。利用根据 本发明的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品。
[0011] 根据本发明的第六方面，本发明还提出了一种构建体。根据本发明的实施例，该构 建体包含前面所述的分离的编码CYP4V2突变体的核酸。由此，利用本发明的构建体转化受 体细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗原发性结晶样视网膜变性的药物。
[0012] 根据本发明的第七方面，本发明还提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，该 重组细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。根据本发明的一些实施例，利 用本发明的重组细胞，能够有效地筛选治疗原发性结晶样视网膜变性的药物。
[0013] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0014] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0015] 图1显示了根据本发明实施例的筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品 的系统及其组成部分的示意图，其中，
[0016] 图II为根据本发明实施例的筛选易感原发性结晶样视网膜变性的生物样品的系 统的示意图，
[0017] 图III为根据本发明实施例的核酸提取装置的示意图，
[0018] 图1III为根据本发明实施例的核酸序列确定装置的示意图；
[0019] 图2显示了根据本发明一个实施例的B⑶患者家系的家系图；
[0020] 图3显示了根据本发明一个实施例，图2所示B⑶患者家系中先证者的眼底像；
[0021] 图4显示了根据本发明的一个实施例，图2所示B⑶患者家系中先证者、家系内正 常人和家系外正常对照的CYP4V2基因c. 31C>T突变位点的代表性Sanger测序验证峰图， 其中，
[0022] 图4I为根据本发明实施例的先证者的CYP4V2基因c. 31C>T突变位点的代表性 Sanger测序验证峰图，
[0023] 图4II为根据本发明实施例的家系内正常人的CYP4V2基因c. 31C>T突变位点的 代表性Sanger测序验证峰图，
[0024] 图4III为根据本发明实施例的家系外正常对照的CYP4V2基因c. 31C>T突变位点 的代表性Sanger测序验证峰图；
[0025] 图5显示了根据本发明的一个实施例，多个物种CYP4V2蛋白的序列对比结果。
【具体实施方式】
[0026] 下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅是说明性 的，而不能理解为对本发明的限制。
[0027]CYP4V2基因突变体
[0028] 根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的编码CYP4V2突变体的核酸。根 据本发明的实施例，所述核酸与SEQIDN0:1相比，具有c. 31C>T突变。在本文中所使用的 表达方式"编码CYP4V2突变体的核酸"，是指与编码CYP4V2突变体的基因相对应的核酸物 质，即核酸的类型不受特别限制，可以是任何包含与CYP4V2突变体的编码基因相对应的脱 氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于DNA、RNA或cDNA。根据本发明的 一个具体示例，前面所述的编码CYP4V2突变体的核酸为DNA。根据本发明的实施例，发明人 确定了CYP4V2基因的突变体，该突变体与原发性结晶样视网膜变性的发病密切相关，从而 通过检测该突变体在生物样品中是否存在，可以有效地检测生物样品是否易感原发性结晶 样视网膜变性，也可以通过检测该突变体在生物体中是否存在，可以有效地预测生物体是 否易感原发性结晶样视网膜变性。
[0029] 对于本发明说明书和权利要求书中，提及核酸，本领域技术人员应当理解，实际包 括互补双链的任意一条，或者两条。为了方便，在本说明书和权利要求书中，虽然多数情况 下只给出了一条链，但实际上也公开了与之互补的另一条链。例如，提及SEQIDN0 :1，实际 包括其互补序列。本领域技术人员还可以理解，利用一条链可以检测另一条链，反之亦然。
[0030] 该编码CYP4V2突变体的核酸，是本申请的发明人通过外显子组测序、Sanger测序 验证以及蛋白结构分析的方法确定的原发性结晶样视网膜变性的致病基因CYP4V2的新的 致病突变。该致病突变位点在现有技术中并未被提到。
[0031] 其中，野生型CYP4V2基因的CDNA具有如下所示的核苷酸序列：
[0032]ATGGCGGGGCTCTGGCTGGGGCTCGTGTGGCAGAAGCTGCTGCTGTGGGGCGCGGCGAGTGCCCTTTCC CTGGCCGGCGCCAGTCTGGTCCTGAGCCTGCTGCAGAGGGTGGCGAGCTACGCGCGGAAATGGCAGCAGATGCGGCC CATCCCCACGGTGGCCCGCGCCTACCCACTGGTGGGCCACGCGCTGCTGATGAAGCCGGACGGGCGAGAATTTTTTC AGCAGATCATTGAGTACACAGAGGAATACCGCCACATGCCGCTGCTGAAGCTCTGGGTCGGGCCAGTGCCCATGGTG GCCCTTTATAATGCAGAAAATGTGGAGGTAATTTTAACTAGTTCAAAGC